本發(fā)明涉及植物工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是涉及一種雜交種試管苗的煉苗及移栽方法。
背景技術(shù)：
：通常將植物分類(lèi)學(xué)上不同種、屬或親緣關(guān)系更遠(yuǎn)的物種間進(jìn)行的雜交稱作遠(yuǎn)緣雜交。作為一種育種手段，遠(yuǎn)緣雜交打破了物種間的界限，人為地促進(jìn)了不同物種間遺傳物質(zhì)的交換和結(jié)合，把不同生物類(lèi)型各自所具有的獨(dú)特性狀，不同程度地結(jié)合于共同的雜種個(gè)體中，從而創(chuàng)造出新的品種。因此在植物遺傳與育種研究中發(fā)揮重要作用，受到遺傳及育種專(zhuān)家的長(zhǎng)期重視。它在育種方面的應(yīng)用主要包括，新物種的人工創(chuàng)造、提高品種的抗逆性、創(chuàng)造異染色體體系、培育雄性不育系以及研究生物的進(jìn)化及親緣關(guān)系等。以三葉草屬牧草為例，三葉草屬牧草具有品質(zhì)優(yōu)良、營(yíng)養(yǎng)豐富、固氮能力強(qiáng)等多種優(yōu)點(diǎn)，尤以具有強(qiáng)抗逆性的六倍體高加索三葉草品種，和具有強(qiáng)固氮能力的四倍體大興安嶺野生白三葉為例，為了培育出結(jié)合雙親優(yōu)良性狀的三葉草新品種，希望以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進(jìn)行雜交。但是，遠(yuǎn)緣雜交中物種的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，雌雄配子不親和，因此，人工雜交難以成功，雜種易夭亡或敗育且分離范圍廣、耗時(shí)長(zhǎng)、中間類(lèi)型不穩(wěn)定。其中，以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進(jìn)行雜交，雜種成活率很低，遠(yuǎn)不能滿足育種進(jìn)程的需求。用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行植物快速無(wú)性繁殖的方法簡(jiǎn)稱為試管繁殖(propagationbytissueculture)，也稱微體繁殖或微型繁殖。繁殖的植株稱試管苗，以此與種子苗(實(shí)生苗)、扦插苗、嫁接苗相區(qū)別。以三葉草屬牧草為例，通過(guò)組織培養(yǎng)可以短時(shí)間獲得大量雜交種三葉草組培苗。試管苗的移植需要從“異養(yǎng)”到“自養(yǎng)”的轉(zhuǎn)變過(guò)程，由于培養(yǎng)容器內(nèi)的環(huán)境與外部環(huán)境差異較大，移植前試管苗要進(jìn)行煉苗，使小植株逐漸適應(yīng)外界環(huán)境條件并健壯生長(zhǎng)，這種“煉苗”方法可以有效提高移植成活率。移植后的小苗管理，必須注意控制土壤濕度，掌握光照強(qiáng)度。煉苗，適時(shí)移栽，保溫、保濕以及適度的光照是保證該階段順利通過(guò)的主要因素。目前，雜交種試管苗的煉苗和移栽方法，使試管苗的成活率還停留在較低水平，浪費(fèi)時(shí)間和勞動(dòng)力，因此，亟需一種可以提高雜交種試管苗煉苗和移栽成活率的方法。有鑒于此，特提出本發(fā)明。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種雜交種試管苗的煉苗方法，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的雜交種試管苗煉苗成活率低的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種雜交種試管苗的移栽方法，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的雜交種試管苗移栽成活率低的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明提供的一種雜交種試管苗的煉苗方法包括：在無(wú)菌培養(yǎng)容器中，培養(yǎng)雜交種試管苗，至所述試管苗生長(zhǎng)至4－6cm高且至少具有3條不定根時(shí)，打破培養(yǎng)容器的無(wú)菌環(huán)境，所述試管苗繼續(xù)生長(zhǎng)至所述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁，煉苗結(jié)束。進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)容器置于培養(yǎng)室中，所述培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為25－28℃，濕度為80％－95％，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為10－13h/d，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為18000－22000μmol/m2·s。進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期27－28℃，暗期25－26℃，濕度為90％，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。進(jìn)一步地，所述雜交種試管苗為高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗。另外，本發(fā)明還提供了一種雜交種試管苗的移栽方法，所述移栽方法應(yīng)用于上述的雜交種試管苗。進(jìn)一步地，所述移栽方法包括：將雜交種試管苗連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，完成所述移栽。進(jìn)一步地，所述生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：2－2：1的沙土和珍珠巖。進(jìn)一步地，所述生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。進(jìn)一步地，所述生長(zhǎng)基質(zhì)置于培養(yǎng)室中，所述培養(yǎng)室內(nèi)的條件為：移栽后1－10天：溫度為光照期26－28℃，暗期25－26℃，濕度為90％－95％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為18000－20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期28－30℃，暗期23－25℃，濕度為85％－90％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為20000－22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期30－32℃，暗期21－23℃，濕度為80％－85％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為22000－24000μmol/m2·s。進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)室內(nèi)的條件為：移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。本發(fā)明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節(jié)約了時(shí)間成本和勞動(dòng)力成本。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。本發(fā)明提供了一種雜交種試管苗的煉苗方法，包括：在無(wú)菌培養(yǎng)容器中，培養(yǎng)雜交種試管苗，至所述試管苗生長(zhǎng)至4－6cm高且至少具有3條不定根時(shí)，打破培養(yǎng)容器的無(wú)菌環(huán)境，所述試管苗繼續(xù)生長(zhǎng)至所述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁，煉苗結(jié)束。其中，選取的雜交種試管苗例如可以為，但不限于4cm，4.5cm，5cm，5.5cm或6cm高。選取的雜交種試管苗所具有的不定根至少為3條，例如可以為，但不限于3條，4條，5條，6條，7條或8條，且長(zhǎng)度大于2cm。培養(yǎng)容器可以為試管或三角瓶。無(wú)菌的培養(yǎng)容器，可以在培養(yǎng)容器開(kāi)口處放置與培養(yǎng)容器口大小相匹配的蓋或塞，或者套設(shè)封口膜。打破培養(yǎng)容器的無(wú)菌環(huán)境，是使培養(yǎng)容器內(nèi)的無(wú)菌環(huán)境變?yōu)橛芯h(huán)境，可以將培養(yǎng)容器開(kāi)口處的蓋或塞去除，或者將封口膜扎破。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，無(wú)菌的培養(yǎng)容器為在培養(yǎng)容器口套設(shè)封口膜，破壞培養(yǎng)容器的無(wú)菌性為將封口膜扎破，培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁，說(shuō)明培養(yǎng)基開(kāi)始染菌，雜交種試管苗在培養(yǎng)容器中，從完全無(wú)菌的環(huán)境變?yōu)橛芯h(huán)境，逐步加強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力。在本發(fā)明中，培養(yǎng)容器置于培養(yǎng)室中，培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為25－28℃，濕度為80％－95％，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為10－13h/d，所述培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為18000－22000μmol/m2·s。其中，培養(yǎng)室內(nèi)的溫度可以為，但不限于25℃，25.5℃，26℃，26.5℃，27℃，27.5℃或28℃。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期27－28℃，暗期25－26℃；其中，光照期的溫度可以為，但不限于27℃，27.5℃或28℃；暗期的溫度可以為，但不限于25℃，25.5℃或26℃。在光照期和暗期給予不同的溫度，能更好地模擬自然環(huán)境下晝夜溫度的變化，使雜交種試管苗在經(jīng)過(guò)本發(fā)明提供的煉苗方法煉苗之后，加強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力。濕度可以為，但不限于80％，82％，84％，85％，86％，88％，90％，92％，94％或95％。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，隨著煉苗時(shí)間的增加，可以逐漸降低培養(yǎng)室內(nèi)的濕度，以使雜交種試管苗逐漸適應(yīng)干燥的內(nèi)部環(huán)境。光周期可以為，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d。光照強(qiáng)度可以為，但不限于18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s，20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，隨著煉苗時(shí)間的增加，可以逐漸增強(qiáng)培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度，以使雜交種試管苗加強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力。在本發(fā)明中，雜交種試管苗為高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗。六倍體高加索三葉草品種是新西蘭引進(jìn)種，在內(nèi)蒙古赤峰市和呼和浩特市成功建植，其抗旱、抗寒能力很強(qiáng)，也有一定的耐鹽能力，不論作為栽培品種還是補(bǔ)播種都具有良好的應(yīng)用前景。但其固氮所需的根瘤菌特化，與其他三葉草種的根瘤菌不能互接，在高加索以外地區(qū)不能結(jié)瘤固氮。另外，相對(duì)于其他三葉草種，高加索三葉草在種植的第一年生長(zhǎng)發(fā)育非常緩慢，這也是制約其推廣種植的因素之一。本發(fā)明選用的白三葉來(lái)自大興安嶺地區(qū)，具有產(chǎn)量高，固氮能力強(qiáng)的特點(diǎn)，但其根系淺，喜濕，在內(nèi)蒙古其他地區(qū)種植時(shí)或不能越冬，或由于氣候干燥而成片死亡。為了結(jié)合二者的優(yōu)良性狀，以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進(jìn)行雜交。另外，本發(fā)明還提供了一種雜交種試管苗的移栽方法，應(yīng)用于上述的雜交種試管苗。將利用上述煉苗方法進(jìn)行煉苗之后的雜交種試管苗，應(yīng)用此雜交種試管苗的移栽方法進(jìn)行移栽。在本發(fā)明中，移栽方法包括：將雜交種試管苗連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，完成移栽。其中，進(jìn)行移栽的雜交種試管苗為生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且無(wú)破損的健康試管苗。用于清洗根部培養(yǎng)基的清水的溫度為25－28℃，例如可以為，但不限于25℃，26℃，27℃或28℃。對(duì)生長(zhǎng)基質(zhì)進(jìn)行滅菌的方法為物理滅菌法或化學(xué)滅菌法，其中，物理滅菌法可以為高溫蒸汽滅菌或紫外線照射滅菌，化學(xué)滅菌法為應(yīng)用殺菌劑進(jìn)行滅菌，如0.2％的高錳酸鉀，75％的乙醇等。在本發(fā)明中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：2－2：1的沙土和珍珠巖。沙土和珍珠巖的體積比例如可以為，但不限于1：1，1：2或2：1。以沙土和珍珠巖為基質(zhì)進(jìn)行移栽，既能夠保持水分，又能夠保證基質(zhì)的透氣性，防止雜交種試管苗爛根。在本發(fā)明中，生長(zhǎng)基質(zhì)置于培養(yǎng)室中，移栽時(shí)培養(yǎng)室內(nèi)的條件為：移栽后1－10天：溫度為光照期26－28℃，暗期25－26℃，濕度為90％－95％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為18000－20000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限于26℃，27℃或28℃；暗期的溫度可以為，但不限于25℃或26℃；濕度可以為，但不限于90％，91％，92％，93％，94％或95％；光周期可以為，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強(qiáng)度可以為，但不限于18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s或20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期28－30℃，暗期23－25℃，濕度為85％－90％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為20000－22000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限于28℃，29℃或30℃；暗期的溫度可以為，但不限于23℃，24℃或25℃；濕度可以為，但不限于85％，86％，87％，88％，89％或90％；光周期可以為，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強(qiáng)度可以為，但不限于20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期30－32℃，暗期21－23℃，濕度為80％－85％，光周期為10－13h/d，光照強(qiáng)度為22000－24000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限于30℃，31℃或32℃；暗期的溫度可以為，但不限于21℃，22℃或23℃；濕度可以為，但不限于80％，81％，82％，83％，84％或85％；光周期可以為，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強(qiáng)度可以為，但不限于22000μmol/m2·s，23000μmol/m2·s或24000μmol/m2·s。在光照期和暗期給予不同的溫度，能更好地模擬自然環(huán)境下晝夜溫度的變化，使雜交種試管苗在經(jīng)過(guò)本發(fā)明提供的移栽方法移栽之后，加強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力。隨著移栽后時(shí)間的增加，可以逐漸降低培養(yǎng)室內(nèi)的濕度，以使雜交種試管苗逐漸適應(yīng)干燥的內(nèi)部環(huán)境。并且，隨著移栽后時(shí)間的增加，可以逐漸增強(qiáng)培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度，以使雜交種試管苗加強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力。本發(fā)明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節(jié)約了時(shí)間成本和勞動(dòng)力成本。下面將結(jié)合實(shí)施例1－18和對(duì)比例1－9對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步地說(shuō)明。實(shí)施例1雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例2雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期27℃，暗期25℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例3雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為80％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例4雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為95％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例5雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為10h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例6雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為11h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例7雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為13h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。實(shí)施例8雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為18000μmol/m2·s。實(shí)施例9雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為22000μmol/m2·s。對(duì)比例1雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期30℃，暗期23℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。對(duì)比例2雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為70％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。對(duì)比例3雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為15h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。對(duì)比例4雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為25000μmol/m2·s。實(shí)施例10雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例11雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：2的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例12雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為2：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例13雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期26℃，暗期25℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期28℃，暗期23℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期30℃，暗期21℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例14雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期30℃，暗期25℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期32℃，暗期23℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例15雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為10h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為10h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為10h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例16雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為13h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為13h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為13h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。實(shí)施例17雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為18000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為22000μmol/m2·s。實(shí)施例18雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為24000μmol/m2·s。對(duì)比例5雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：3的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。對(duì)比例6雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1：1的草炭土，蛭石和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。對(duì)比例7雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期30℃，暗期23℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期32℃，暗期21℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期34℃，暗期19℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。對(duì)比例8雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為15h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為15h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為15h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。對(duì)比例9雜交種試管苗的移栽方法將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為22000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為24000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為26000μmol/m2·s。為了篩選能夠使雜交種試管苗成活率最高的煉苗及移栽方法的組合，將經(jīng)過(guò)上述實(shí)施例1－9和對(duì)比例1－4的煉苗方法進(jìn)行煉苗的雜交種試管苗，應(yīng)用實(shí)施例10－18和對(duì)比例5－9的移栽方法進(jìn)行移栽，進(jìn)行正交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)見(jiàn)表1(表1中實(shí)施例簡(jiǎn)稱為實(shí)，對(duì)比例簡(jiǎn)稱為對(duì))。表1實(shí)1實(shí)2實(shí)3實(shí)4實(shí)5實(shí)6實(shí)7實(shí)8實(shí)9對(duì)1對(duì)2對(duì)3對(duì)4實(shí)1012345678910111213實(shí)1114151617181920212223242526實(shí)1227282930313233343536373839實(shí)1340414243444546474849505152實(shí)1453545556575859606162636465實(shí)1566676869707172737475767778實(shí)1679808182838485868788899091實(shí)179293949596979899100101102103104實(shí)1810106107108109110111112113114115116117對(duì)5118119120121122123124125126127128129130對(duì)6131132133134135136137138139140141142143對(duì)7144145146147148149150151152153154155156對(duì)8157158159160161162163164165166167168169對(duì)9170171172173174175176177178179180181182上述各組每組隨機(jī)選取15株雜交種試管苗，在進(jìn)行相應(yīng)的煉苗及移栽之后，統(tǒng)計(jì)試管苗成活率。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，1組雜交種試管苗的成活率最高，為93.33％，即，選取三角瓶中生長(zhǎng)至4－6cm高，且至少具有3條長(zhǎng)度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)，至三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁。其中，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，濕度為90％，培養(yǎng)室內(nèi)的光周期為12h/d，培養(yǎng)室內(nèi)的光照強(qiáng)度為20000μmol/m2·s。將經(jīng)過(guò)煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養(yǎng)基整體從培養(yǎng)容器內(nèi)取出，用26℃的清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于高溫蒸汽滅菌后的生長(zhǎng)基質(zhì)中，在培養(yǎng)室中繼續(xù)培養(yǎng)。其中，生長(zhǎng)基質(zhì)為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽后1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，濕度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，濕度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，濕度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為23000μmol/m2·s。153組雜交種試管苗的成活率最低，僅為26.67％，其余各組雜交種試管苗的平均成活率為73.33％。綜上所述，本發(fā)明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節(jié)約了時(shí)間成本和勞動(dòng)力成本。最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12