技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種食用菌絲蓋冬菇flammulinafiliformis栽培方法，以及絲蓋冬菇一野生耐高溫菌株。

背景技術(shù)：
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金針菇flammulinavelutipes隸屬于膨瑚菌科physalacriaceae，冬菇屬flammulina。由于該種常于冬天出菇，故又名冬菇。目前，我國(guó)雖已成為世界上最大的金針菇生產(chǎn)國(guó)，然而，目前我國(guó)工廠化栽培所用的金針菇菌株均依賴日本進(jìn)口，我國(guó)還尚無具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的工廠化栽培菌株。此外，由于金針菇具有喜低溫的生理特性，因此工廠化栽培所用菌株的出菇溫度均嚴(yán)格控制在15℃以內(nèi)，故而工廠化栽培金針菇較為耗能，成本較高。

本發(fā)明人前期于夏天在云南龍陵采集到了金針菇屬另一物種絲蓋冬菇flammulinafiliformis的子實(shí)體，并從其子實(shí)體上分離得到了該種的野生菌株。經(jīng)栽培實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該野生菌株最適菌絲體生長(zhǎng)溫度為23℃，最適子實(shí)體分化溫度為18℃，均高于工廠化栽培金針菇菌株的最適菌絲體生長(zhǎng)及子實(shí)體分化溫度。且在該溫度條件下，該野生菌株的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率要顯著高于工廠化栽培所用菌株。因此，該野生菌株為一耐高溫菌株。若將該野生菌株代替金針菇栽培菌株進(jìn)行推廣種植，將極大節(jié)省金針菇工廠化栽培過程中的能耗及成本。然而，目前還沒有關(guān)于絲蓋冬菇栽培的報(bào)道，本發(fā)明旨在報(bào)道絲蓋冬菇及其栽培方法，以及絲蓋冬菇的一野生耐高溫菌株。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明目的在于提供金針菇屬絲蓋冬菇flammulinafiliformis一野生菌株cgmccno.13682，同時(shí)提供該絲蓋冬菇野生菌株在高溫下的栽培方法，以期今后在工廠化生產(chǎn)中能夠推廣使用該菌株。為我國(guó)金針菇企業(yè)提供具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的栽培菌株及栽培方法。

本發(fā)明的上述目的是通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

絲蓋冬菇耐高溫菌株，該菌株保藏號(hào)為：cgmccno.13682。

如所述的絲蓋冬菇耐高溫菌株，其最適菌絲體培養(yǎng)溫度為23℃，最適子實(shí)體分化溫度為18℃。

本發(fā)明同時(shí)還提供了一種絲蓋冬菇的栽培方法，該方法包括其母種制作、栽培種制作和出菇管理步驟。母種制作步驟為：取絲蓋冬菇一野生菌株cgmccno.13682的菌絲體保藏材料于加富pda固體培養(yǎng)基上，在23℃下避光培養(yǎng)7天得到母種。栽培種制作步驟為：將母種接種至pda液體培養(yǎng)基中，在23℃下于搖床中避光培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)10天制成栽培種。出菇管理步驟為：取栽培種10ml接種到栽培料上，在23℃下避光培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿菌瓶后10天進(jìn)行搔菌，搔菌后打開瓶口置于18℃下，空氣相對(duì)濕度90％進(jìn)行出菇管理，15-20天后采收。

根據(jù)所述的絲蓋冬菇的栽培方法，其中所述的加富pda固體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g，瓊脂8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用。所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。加富pda液體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用。所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。

根據(jù)所述的絲蓋冬菇的栽培方法，其中所述的栽培料成分為棉籽殼90％、麥麩9％、輕質(zhì)碳酸鈣1％，含水量60％，裝入聚丙烯瓶或聚丙烯袋中，并用接種棒在栽培料正中豎直打孔，于121℃下滅菌2-3小時(shí)。

具體地，本發(fā)明的絲蓋冬菇的栽培方法包括下述步驟：

母種制作：取絲蓋冬菇flammulinafiliformis野生菌株cgmccno.13682于加富pda固體培養(yǎng)基上活化，于23℃下培養(yǎng)7天后得到母種。

其中加富pda固體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g、瓊脂8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用，所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。

栽培種制作：將上述母種菌絲常規(guī)接種于滅菌后的加富pda液體培養(yǎng)基中，于搖床上在23℃、150轉(zhuǎn)/分的條件下培養(yǎng)10天后得到栽培種。

其中加富pda液體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用，所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。

栽培料接種：取10ml液體栽培種均勻接種于聚丙烯瓶中的栽培料表面，使液體栽培種覆蓋于栽培料上表面，并通過正中的豎直孔流入栽培料內(nèi)部；接種后的菌瓶避光放置于23℃、空氣相對(duì)濕度70％的條件下培養(yǎng)菌絲。

栽培料制作：采用棉籽殼90％，麥麩9％，輕質(zhì)碳酸鈣1％，含水量60％-65％，裝入聚丙烯瓶并壓緊實(shí)，并用接種棒在栽培料正中豎直打孔，于121℃下滅菌2.5小時(shí)。

出菇管理和采收：待菌絲長(zhǎng)滿菌瓶后第10天進(jìn)行搔菌，搔菌后開蓋置于18℃、空氣相對(duì)濕度90％的條件下進(jìn)行出菇管理，15-20天后采收。

與目前工廠化栽培金針菇flammulinavelutipes所用菌株和技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)益性在于：本發(fā)明提供了冬菇屬一物種絲蓋冬菇flammulinafiliformis一野生耐高溫菌株的栽培方法。該菌株的最適菌絲生長(zhǎng)溫度及子實(shí)體分化溫度均顯著高于工廠化栽培所用的金針菇栽培菌株，且在其最適生長(zhǎng)溫度及子實(shí)體分化溫度下其生物轉(zhuǎn)化率要顯著高于工廠化栽培所用的金針菇栽培菌株。若運(yùn)用該菌株代替金針菇栽培菌株進(jìn)行推廣種植，將大大降低在金針菇栽培過程中由于控制低溫所產(chǎn)生的較高能耗及成本。

具體實(shí)施方式：

本發(fā)明的絲蓋冬菇flammulinafiliformis野生菌株已于2017年2月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101，電話：010-64807355)，保藏號(hào)為：cgmccno.13682。

實(shí)施例1：

本發(fā)明的絲蓋冬菇flammulinafiliformis野生菌株cgmccno.13682為從腐木上采集的絲蓋冬菇野生子實(shí)體通過組織分離獲得，其組織分離具體方法為取菌蓋內(nèi)部于菌柄交界處干凈無菌的菌肉組織，接種于普通pda培養(yǎng)基上。采集時(shí)間為2014年6月24日，采集地點(diǎn)為云南省保山市小黑山自然保護(hù)區(qū)，海拔約2560米。其最適菌絲體培養(yǎng)溫度為23℃，最適子實(shí)體分化溫度為18℃。

本發(fā)明的絲蓋冬菇栽培方法包括下述步驟：

1、母種制作：取絲蓋冬菇flammulinafiliformis野生菌株cgmccno.13682于加富pda固體培養(yǎng)基上活化，于23℃下培養(yǎng)7天后得到母種。

2、加富pda固體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g、瓊脂8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用。所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。

3、栽培種制作：將母種菌絲常規(guī)接種于步驟2滅菌后的加富pda液體培養(yǎng)基中，于搖床上在23℃、150轉(zhuǎn)/分的條件下培養(yǎng)10天后得到栽培種。

4、加富pda液體培養(yǎng)基制作步驟如下：馬鈴薯80g、葡萄糖8g、磷酸氫二鉀0.2g、磷酸二氫鉀0.2g、硫酸鎂0.2g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.8g、水400ml，裝于1000ml錐形瓶中混合均勻后于121℃下滅菌30分鐘，滅菌后晾至室溫并加入40ul氨芐卡青霉素鈉備用。所述馬鈴薯在沸水中煮熟，用其浸出液。

5、栽培料接種：取10ml由步驟3所得的液體栽培種均勻接種于聚丙烯瓶中的栽培料表面，使液體栽培種既能覆蓋于栽培料上表面，又能通過正中的豎直孔流入栽培料內(nèi)部；接種后的菌瓶避光放置于23℃的條件下培養(yǎng)菌絲。

6、栽培料制作：采用棉籽殼90％，麥麩9％，輕質(zhì)碳酸鈣1％，含水量60％，裝入聚丙烯瓶并壓緊實(shí)，并用接種棒在栽培料正中豎直打孔，于121℃下滅菌2.5小時(shí)。

7、出菇管理和采收：待菌絲長(zhǎng)滿菌瓶后第10天進(jìn)行搔菌，搔菌后開蓋置于18℃、空氣相對(duì)濕度90％的條件下進(jìn)行出菇管理，15-20天后采收。