本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)方法領(lǐng)域，具體涉及一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
驅(qū)蚊香草（Pelargonium citrosum Vanleenii），又名凈蚊香草、驅(qū)蚊草，是一種嶄新的天竺葵科，多年生，兩年草本轉(zhuǎn)木本植物，其葉片散發(fā)的香茅醛具有檸檬香驅(qū)蚊作用，是一種植物型驅(qū)蚊產(chǎn)品。與傳統(tǒng)的驅(qū)蚊、滅蚊產(chǎn)品相比，驅(qū)蚊香草更加廉價、環(huán)保。驅(qū)蚊香草不僅驅(qū)蚊效果好，其檸檬香味還有較強的空氣凈化的作用，以及對人體有安神、醒腦，促進睡眠的作用，對人體無毒副作用。因其葉片婆娑，一年四季常綠，具有美麗的外型，可作盆景用來觀賞，是近年來較受人們喜愛的綠花觀賞植物。而且驅(qū)蚊香草的全株可入藥，有極高的藥用價值，主要用于治療風(fēng)濕、氙氣等癥。在我們中國具有良好的種植開發(fā)前景。
驅(qū)蚊香草的價值越來越受到人們的關(guān)注，但由于驅(qū)蚊香草是融合體，不能進行有性繁殖，而扦插繁殖用材多、速度有限，多次扦插又會使植株退化、易感染病毒，植株的成活率受到限制。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于：針對上述存在的不足，本發(fā)明提供了一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)方法簡單，成活率高，適于批量生產(chǎn)的驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其技術(shù)方案包括以下步驟：
（1）外植體取材及滅菌：選用生長健壯、無病、無蟲害、盆栽2年的驅(qū)蚊香草莖段，得到外植體材料；
將所選取的外植體材料放到自來水下流水沖洗5-10min，然后將沖洗好的外植體材料放置在200ppM的次氯酸鈉溶液中浸泡，在浸泡過程中不斷地攪拌和振蕩次氯酸鈉溶液，浸泡15-20min后，將外植體材料從次氯酸鈉溶液中取出來，用無菌水沖洗外植體材料6-10遍，得到無菌外植體材料；
（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：用無菌濾紙將步驟（1）得到的外植體材料吸干水分，切掉莖段兩端消毒面，將葉柄扦插接種于的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為25-30d，得誘導(dǎo)分化芽；
（3）增值繼代培養(yǎng)：篩選步驟（2）長勢良好的誘導(dǎo)分化芽接種于增殖繼代培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行增值續(xù)代培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20-30d，得到增殖繼代芽；
（4）壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）得到的增殖繼代芽接種到壯苗培養(yǎng)基中，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20-25d，所述壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L，選出長2.5-3.0cm的健壯叢生芽；
（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）得到的健壯叢生芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為22-28d，得到生根苗；
（6）馴化培養(yǎng)、移栽：將步驟（5）得到的生根苗馴化培養(yǎng)于塑料杯中13-17d，培養(yǎng)溫度為20-25℃、空氣相對濕度55-65%、光照強度為1000-1500Lx、光照時間為12h/d，再種植于花盆中。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（1）所述外植體材料取自優(yōu)良品種驅(qū)蚊香草植株上的幼嫩頂芽部位，剪取約4-5cm帶腋芽莖段。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（2）所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂5.5-8.5g/L，pH值為5.8。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（3）所述增值續(xù)代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.5mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂5.5-8.5g/L，pH值為5.8；所述長勢良好的誘導(dǎo)分化芽長0.5-1.5cm。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（5）所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-40g/L+基質(zhì)，pH值為5.8；所述基質(zhì)為泥炭和珍珠巖按照體積比為2：1的混合物。
在移苗過程中發(fā)現(xiàn)，幼嫩驅(qū)蚊香草極脆，洗瓊脂時極易折斷，而且根細(xì)而脆，極易洗掉，導(dǎo)致驅(qū)蚊香草移栽后成活率低。在生根培養(yǎng)基中加入泥炭和珍珠巖，移栽時可以帶基質(zhì)，對驅(qū)蚊香草根損傷小，可提高成活率。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（6）所述馴化培養(yǎng)方法為將培養(yǎng)瓶口逐漸打開噴水，煉苗3-4d后，取出小苗用自來水沖洗根部培養(yǎng)基，再用0.1%多菌靈溶液浸泡4-8min，移栽于裝有馴化基質(zhì)的塑料杯中，杯中馴化基質(zhì)為火燒土：砂：蛭石=1：1：2混合，每個杯中移植一株。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（6）生根苗剛移栽于馴化培養(yǎng)時，每天早晚噴1次水，并依次隔3d、7d、10d各噴1次多菌靈，每隔7d施1次葉面肥；所述葉面肥為0.3-0.5%的尿素或者復(fù)合肥。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖續(xù)代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及馴化培養(yǎng)基均于1.03×105Pa、121-125℃的條件下，濕熱滅菌15-20min制備而成。
作為上述所述制備方法的一種優(yōu)選技術(shù)方案，在步驟（2）、步驟（3）、步驟（4）、步驟（5）所述培養(yǎng)室的溫度為25±1℃，空氣相對濕度60-70%，光照強度為800-1500Lx，光照時間為12h/d。
上述步驟（2）、（3）、（4）、（5）中所述的MS為國際通用配方，6-BA為6-芐氨基嘌呤，NAA為α-萘乙酸。
綜上所述，本發(fā)明由于采用了上述方案，具有以下有益效果：
（1）本發(fā)明的一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，取材時的植株已經(jīng)成熟，能夠鑒定和挑選到具有長勢茁壯、株型好、抗性好的植株作為母本材料，通過培養(yǎng)繁育以后得到的種苗能夠具有與母本植株相同的優(yōu)質(zhì)性狀。
（2）本發(fā)明的一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法通過采用驅(qū)蚊香草幼嫩莖段為外植體，經(jīng)過外植體處理、外植體接種分化、增值繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、馴化培養(yǎng)及移栽的步驟培育而成，馴化培養(yǎng)時煉苗植株不會出現(xiàn)脫水，沒有緩苗期，煉苗時間短，具有培養(yǎng)方法簡單，成活率高的特點，適于批量生產(chǎn)。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，作進一步說明。本發(fā)明所使用的各種原料均為常規(guī)市售產(chǎn)品，均能夠通過市場購買得到。
實施例1：
一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其技術(shù)方案包括以下步驟：
（1）外植體取材及滅菌：選用生長健壯、無病、無蟲害、盆栽2年的驅(qū)蚊香草莖段，得到外植體材料；
將所選取的外植體材料放到自來水下流水沖洗5-10min，然后將沖洗好的外植體材料放置在200ppM的次氯酸鈉溶液中浸泡，在浸泡過程中不斷地攪拌和振蕩次氯酸鈉溶液，浸泡15-20min后，將外植體材料從次氯酸鈉溶液中取出來，用無菌水沖洗外植體材料6-10遍，得到無菌外植體材料；
所述外植體材料取自優(yōu)良品種驅(qū)蚊香草植株上的幼嫩頂芽部位，剪取約4-5cm帶腋芽莖段；
（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：用無菌濾紙將步驟（1）得到的外植體材料吸干水分，切掉莖段兩端消毒面，將葉柄扦插接種于的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為25-30d，得誘導(dǎo)分化芽；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂5.5-8.5g/L，pH值為5.8；
（3）增值繼代培養(yǎng)：篩選步驟（2）長勢良好的誘導(dǎo)分化芽接種于增殖繼代培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行增值續(xù)代培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20-30d，得到增殖繼代芽；
所述增值續(xù)代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.5mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂5.5-8.5g/L，pH值為5.8，同時使用透氣設(shè)施，可明顯降低驅(qū)蚊香草玻璃化；所述長勢良好的誘導(dǎo)分化芽長0.5-1.5cm；
（4）壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）得到的增殖繼代芽接種到壯苗培養(yǎng)基中，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20-25d，所述壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L，選出長2.5-3.0cm的健壯叢生芽；
（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）得到的健壯叢生芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為22-28d，得到生根苗；
所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-40g/L+基質(zhì)，pH值為5.8；
（6）馴化培養(yǎng)、移栽：將步驟（5）得到的生根苗馴化培養(yǎng)于塑料杯中13-17d，培養(yǎng)溫度為20-25℃、空氣相對濕度55-65%、光照強度為1000-1500Lx、光照時間為12h/d，再種植于花盆中；
所述馴化培養(yǎng)方法為將培養(yǎng)瓶口逐漸打開噴水，煉苗3-4d后，取出小苗用自來水沖洗根部培養(yǎng)基，再用0.1%多菌靈溶液浸泡4-8min，移栽于裝有馴化基質(zhì)的塑料杯中，杯中馴化基質(zhì)為火燒土：砂：蛭石=1：1：2混合，每個杯中移植一株；進一步地，生根苗剛移栽于馴化培養(yǎng)時，每天早晚噴1次水，并依次隔3d、7d、10d各噴1次多菌靈，每隔7d施1次葉面肥；所述葉面肥為0.3-0.5%的尿素或者復(fù)合肥；
進一步地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖續(xù)代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及馴化培養(yǎng)基均于1.03×105Pa、121-125℃的條件下，濕熱滅菌15-20min制備而成；進一步地，在步驟（2）、步驟（3）、步驟（4）、步驟（5）所述培養(yǎng)室的溫度為25±1℃，空氣相對濕度60-70%，光照強度為800-1500Lx，光照時間為12h/d。
實施例2
一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其技術(shù)方案包括以下步驟：
（1）外植體取材及滅菌：選用生長健壯、無病、無蟲害、盆栽2年的驅(qū)蚊香草莖段，得到外植體材料；
將所選取的外植體材料放到自來水下流水沖洗8min，然后將沖洗好的外植體材料放置在200ppM的次氯酸鈉溶液中浸泡，在浸泡過程中不斷地攪拌和振蕩次氯酸鈉溶液，浸泡17min后，將外植體材料從次氯酸鈉溶液中取出來，用無菌水沖洗外植體材料8遍，得到無菌外植體材料；
所述外植體材料取自優(yōu)良品種驅(qū)蚊香草植株上的幼嫩頂芽部位，剪取約4.5cm帶腋芽莖段；
（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：用無菌濾紙將步驟（1）得到的外植體材料吸干水分，切掉莖段兩端消毒面，將葉柄扦插接種于的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為27d，得誘導(dǎo)分化芽；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L，pH值為5.8；
（3）增值繼代培養(yǎng)：篩選步驟（2）長勢良好的誘導(dǎo)分化芽接種于增殖繼代培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行增值續(xù)代培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為25d，得到增殖繼代芽；
所述增值續(xù)代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L，pH值為5.8；所述長勢良好的誘導(dǎo)分化芽長1.0cm；
（4）壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）得到的增殖繼代芽接種到壯苗培養(yǎng)基中，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為23d，所述壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L，選出長2.7cm的健壯叢生芽；
（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）得到的健壯叢生芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，將該培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為25d，得到生根苗；
所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+基質(zhì)，pH值為5.8；所述基質(zhì)為泥炭和珍珠巖按照體積比為2：1的混合物；
（6）馴化培養(yǎng)、移栽：將步驟（5）得到的生根苗馴化培養(yǎng)于塑料杯中15d，培養(yǎng)溫度為23℃、空氣相對濕度60%、光照強度為1250Lx、光照時間為12h/d，再種植于花盆中；
所述馴化培養(yǎng)方法為將培養(yǎng)瓶口逐漸打開噴水，煉苗3.5d后，取出小苗用自來水沖洗根部培養(yǎng)基，再用0.1%多菌靈溶液浸泡6min，移栽于裝有馴化基質(zhì)的塑料杯中，杯中馴化基質(zhì)為火燒土：砂：蛭石=1：1：2混合，每個杯中移植一株；進一步地，生根苗剛移栽于馴化培養(yǎng)時，每天早晚噴1次水，并依次隔3d、7d、10d各噴1次多菌靈，每隔7d施1次葉面肥；所述葉面肥為0.4%的尿素或者復(fù)合肥；
進一步地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖續(xù)代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及馴化培養(yǎng)基均于1.03×105Pa、123℃的條件下，濕熱滅菌18min制備而成；進一步地，在步驟（2）、步驟（3）、步驟（4）、步驟（5）所述培養(yǎng)室的溫度為25±1℃，空氣相對濕度65%，光照強度為1150Lx，光照時間為12h/d。
綜上所述，本發(fā)明驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法是以驅(qū)蚊香草的幼嫩頂芽為外植體，經(jīng)過外植體處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及馴化培養(yǎng)、移栽的步驟培育而成。馴化培養(yǎng)時煉苗植株不會出現(xiàn)脫水，沒有緩苗期，煉苗時間短。且移苗前經(jīng)過馴化培養(yǎng)，移栽時可以帶基質(zhì)，對驅(qū)蚊香草根損傷小，可提高成活率。本發(fā)明具有培養(yǎng)方法簡單，成活率高、成本低廉的特點，適于批量生產(chǎn)
以上所述僅為發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。