本發(fā)明涉及種植技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)，涉及一種促進(jìn)筍蘭高效繁殖的組培方法。

背景技術(shù)：

筍蘭(Thunia alba(Lindl.)Rchb.f.)屬于蘭科筍蘭屬藥用植物，全草用藥，在民族用藥中多有體現(xiàn)，具有活血祛瘀、接骨生肌之功效，主要用于跌打損傷、骨折、刀槍傷。由于其具有觀賞與藥用于一體的優(yōu)良性質(zhì)，近幾年人們對(duì)筍蘭的關(guān)注越來(lái)越高，市場(chǎng)對(duì)筍蘭的需求量也日益增大。當(dāng)前市場(chǎng)需求主要依靠野生資源提供，而野生筍蘭繁殖速度慢、繁殖系數(shù)低、種子難萌發(fā)，加上近年生態(tài)壞境惡化和人類連年采挖，導(dǎo)致筍蘭野生資源不斷減少，無(wú)法滿足當(dāng)前的市場(chǎng)需求。目前人工栽培主要采用分株繁殖法,繁殖速度慢，人工栽培技術(shù)也不成熟。為了在滿足市場(chǎng)需求，同時(shí)更好地保護(hù)我國(guó)野生筍蘭資源，本發(fā)明針對(duì)筍蘭繁殖方面的問(wèn)題進(jìn)行研究，獲得高產(chǎn)大量的筍蘭植株。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明對(duì)筍蘭莖段進(jìn)行激素誘導(dǎo)使其大量增殖，解決種源缺乏、繁殖系數(shù)低下等問(wèn)題，獲得高產(chǎn)大量的筍蘭植株。

本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題：

一種促進(jìn)筍蘭高效繁殖的組培方法，包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將筍蘭剪成莖段，用酒精進(jìn)行消毒處理后，再用 水沖洗，冷藏待用；

(2)殺菌：將預(yù)處理后的筍蘭莖段進(jìn)行殺菌，待用；

(3)刺激：將殺菌后的筍蘭莖段先進(jìn)行消毒處理，清洗后再用氯化汞和次氯酸鈉溶液浸泡一段時(shí)間，接著用水浸泡并沖洗，待用；

(4)培養(yǎng)：將刺激處理后的筍蘭莖段放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，即得。

所述步驟(1)中，將采集回來(lái)的筍蘭進(jìn)行預(yù)處理，剪成0.5～2cm長(zhǎng)的莖段，用水沖洗20～40min后，用濃度為70～80％的醫(yī)用酒精對(duì)筍蘭莖段進(jìn)行消毒處理，接著用無(wú)菌水沖洗3～4次，放入溫度為4℃以下的冰箱中冷藏待用。

所述步驟(2)中，將預(yù)處理過(guò)的筍蘭莖段放入無(wú)菌燒杯中，再將無(wú)菌燒杯放到超凈臺(tái)里，將超凈臺(tái)紫外燈打開殺菌25～35min。

所述步驟(3)中，對(duì)莖段進(jìn)行無(wú)菌及刺激處理，將濃度為70～80％的乙醇倒入裝有筍蘭莖段的無(wú)菌燒杯中，處理1～2min，然后倒出乙醇溶劑，用無(wú)菌水沖洗3～4次，再倒入氯化汞和次氯酸鈉的混合液浸泡3～8min，倒出溶液，再用無(wú)菌水浸泡1～3min，用無(wú)菌水沖洗3～4次。

所述氯化汞與次氯酸鈉的體積比為(2～4)：(0.5～1.5)，且氯化汞的質(zhì)量濃度為0.05～0.2％，次氯酸鈉的質(zhì)量濃度為5～15％。

所述步驟(4)中，筍蘭的培養(yǎng)分三個(gè)階段，依次為誘導(dǎo)愈傷組織、細(xì)胞分化和生根壯苗階段，先將筍蘭莖段放到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，25d后將誘導(dǎo)出的疏松、呈淡綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)20d后，愈傷分化出長(zhǎng)1～2cm芽尖時(shí)，再將其轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20d后長(zhǎng)出3～5條長(zhǎng)為2～3cm根，即獲得健壯筍蘭幼苗。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、細(xì)胞分化培養(yǎng)基以及生根壯苗培養(yǎng)基的pH值均為5.5～6.5。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+ 20g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

所述細(xì)胞分化培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

所述生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2MS+0.5mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

所述步驟(4)中，三個(gè)階段筍蘭的培養(yǎng)均是在光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)環(huán)境下交替進(jìn)行，具體培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)時(shí)間10～15h、培養(yǎng)溫度為20～30℃、光照強(qiáng)度為2500～3000lx，暗培養(yǎng)時(shí)間10～15h、培養(yǎng)溫度為15～25℃。

本發(fā)明的有益效果在于：

首先，本發(fā)明通過(guò)將筍蘭莖段進(jìn)行多次殺菌消毒處理，有效的確保了后續(xù)培養(yǎng)出來(lái)的筍蘭植株為無(wú)病毒植株。

其次，本發(fā)明通過(guò)采用氯化汞與次氯酸鈉刺激筍蘭莖段，有利于促進(jìn)筍蘭細(xì)胞分化，縮短筍蘭的培養(yǎng)周期。

再次，本發(fā)明通過(guò)在筍蘭培養(yǎng)過(guò)程中分三個(gè)階段采用不同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，有效的滿足了筍蘭莖段在各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需求，促進(jìn)筍蘭莖段更快的生長(zhǎng)，縮短了筍蘭的培養(yǎng)周期。

最后，本發(fā)明有效的解決了自然情況下難以獲得無(wú)病毒大量筍蘭植株的技術(shù)問(wèn)題，并且將筍蘭的培養(yǎng)周期縮短至60～70d，獲得健壯優(yōu)質(zhì)的幼苗。

具體實(shí)施方式

為了方便本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。實(shí)施例僅僅是對(duì)該發(fā)明的舉例說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限定，實(shí)施例中未作具體說(shuō)明的步驟均是已有技術(shù)，在此不做詳細(xì)描述。

實(shí)施例一

一種促進(jìn)筍蘭高效繁殖的組培方法，包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將采集回來(lái)的筍蘭進(jìn)行預(yù)處理，剪成0.5cm長(zhǎng)的莖段，用水沖洗20min后，用濃度為70％的醫(yī)用酒精對(duì)筍蘭莖段進(jìn)行消毒處理，接著用無(wú)菌水沖洗3次，放入溫度為4℃以下的冰箱中冷藏待用；

(2)殺菌：將預(yù)處理過(guò)的筍蘭莖段放入無(wú)菌燒杯中，再將無(wú)菌燒杯放到超凈臺(tái)里，將超凈臺(tái)紫外燈打開殺菌25min，待用；

(3)刺激：對(duì)莖段進(jìn)行無(wú)菌及刺激處理，將濃度為70％的乙醇倒入裝有筍蘭莖段的無(wú)菌燒杯中，處理1min，然后倒出乙醇溶劑，用無(wú)菌水沖洗3次，再倒入氯化汞和次氯酸鈉的混合液浸泡3min，倒出溶液，再用無(wú)菌水浸泡1min，用無(wú)菌水沖洗3次，待用；

(4)培養(yǎng)：將刺激處理后的筍蘭莖段放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，筍蘭的培養(yǎng)分三個(gè)階段，依次為誘導(dǎo)愈傷組織、細(xì)胞分化和生根壯苗階段，先將筍蘭莖段放到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，25d后將誘導(dǎo)出的疏松、呈淡綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)20d后，愈傷分化出長(zhǎng)1cm芽尖時(shí)，再將其轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20d后長(zhǎng)出3條長(zhǎng)為2cm根，即獲得健壯筍蘭幼苗。三個(gè)階段筍蘭的培養(yǎng)均是在光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)環(huán)境下交替進(jìn)行，具體培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)時(shí)間10h、培養(yǎng)溫度為20℃、光照強(qiáng)度為2500lx，暗培養(yǎng)時(shí)間10h、培養(yǎng)溫度為15℃。

所述氯化汞與次氯酸鈉的體積比為2：0.5，且氯化汞的質(zhì)量濃度為0.05％，次氯酸鈉的質(zhì)量濃度為5％。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、細(xì)胞分化培養(yǎng)基以及生根壯苗培養(yǎng)基的pH值均為5.5。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為5.5。

所述細(xì)胞分化培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+ 30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為5.5。

所述生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為5.5。

實(shí)施例二

一種促進(jìn)筍蘭高效繁殖的組培方法，包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將采集回來(lái)的筍蘭進(jìn)行預(yù)處理，剪成2cm長(zhǎng)的莖段，用水沖洗40min后，用濃度為80％的醫(yī)用酒精對(duì)筍蘭莖段進(jìn)行消毒處理，接著用無(wú)菌水沖洗4次，放入溫度為4℃以下的冰箱中冷藏待用；

(2)殺菌：將預(yù)處理過(guò)的筍蘭莖段放入無(wú)菌燒杯中，再將無(wú)菌燒杯放到超凈臺(tái)里，將超凈臺(tái)紫外燈打開殺菌25min，待用；

(3)刺激：對(duì)莖段進(jìn)行無(wú)菌及刺激處理，將濃度為80％的乙醇倒入裝有筍蘭莖段的無(wú)菌燒杯中，處理2min，然后倒出乙醇溶劑，用無(wú)菌水沖洗4次，再倒入氯化汞和次氯酸鈉的混合液浸泡8min，倒出溶液，再用無(wú)菌水浸泡3min，用無(wú)菌水沖洗4次，待用；

(4)培養(yǎng)：將刺激處理后的筍蘭莖段放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，筍蘭的培養(yǎng)分三個(gè)階段，依次為誘導(dǎo)愈傷組織、細(xì)胞分化和生根壯苗階段，先將筍蘭莖段放到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，25d后將誘導(dǎo)出的疏松、呈淡綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)20d后，愈傷分化出長(zhǎng)2cm芽尖時(shí)，再將其轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20d后長(zhǎng)出5條長(zhǎng)為3cm根，即獲得健壯筍蘭幼苗。三個(gè)階段筍蘭的培養(yǎng)均是在光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)環(huán)境下交替進(jìn)行，具體培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)時(shí)間15h、培養(yǎng)溫度為30℃、光照強(qiáng)度為3000lx，暗培養(yǎng)時(shí)間15h、培養(yǎng)溫度為25℃。

所述氯化汞與次氯酸鈉的體積比為4：1.5，且氯化汞的質(zhì)量濃度為0.2％，次氯酸鈉的質(zhì)量濃度為15％。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、細(xì)胞分化培養(yǎng)基以及生根壯苗培養(yǎng)基 的pH值均為6.5。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6.5。

所述細(xì)胞分化培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6.5。

所述生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6.5。

實(shí)施例三

一種促進(jìn)筍蘭高效繁殖的組培方法，包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將采集回來(lái)的筍蘭進(jìn)行預(yù)處理，剪成1cm長(zhǎng)的莖段，用水沖洗30min后，用濃度為75％的醫(yī)用酒精對(duì)筍蘭莖段進(jìn)行消毒處理，接著用無(wú)菌水沖洗4次，放入溫度為4℃以下的冰箱中冷藏待用；

(2)殺菌：將預(yù)處理過(guò)的筍蘭莖段放入無(wú)菌燒杯中，再將無(wú)菌燒杯放到超凈臺(tái)里，將超凈臺(tái)紫外燈打開殺菌30min，待用；

(3)刺激：對(duì)莖段進(jìn)行無(wú)菌及刺激處理，將濃度為75％的乙醇倒入裝有筍蘭莖段的無(wú)菌燒杯中，處理1.5min，然后倒出乙醇溶劑，用無(wú)菌水沖洗3次，再倒入氯化汞和次氯酸鈉的混合液浸泡5min，倒出溶液，再用無(wú)菌水浸泡2min，用無(wú)菌水沖洗3次，待用；

(4)培養(yǎng)：將刺激處理后的筍蘭莖段放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，筍蘭的培養(yǎng)分三個(gè)階段，依次為誘導(dǎo)愈傷組織、細(xì)胞分化和生根壯苗階段，先將筍蘭莖段放到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，25d后將誘導(dǎo)出的疏松、呈淡綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)20d后，愈傷分化出長(zhǎng)2cm芽尖時(shí)，再將其轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20d后長(zhǎng)出4條長(zhǎng)為3cm根，即獲得健壯筍蘭幼苗。三個(gè)階段筍蘭的培養(yǎng)均是在光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)環(huán)境下交替進(jìn)行，具體培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)時(shí)間12h、培養(yǎng)溫度為26℃、光照強(qiáng)度為2800lx， 暗培養(yǎng)時(shí)間102h、培養(yǎng)溫度為18℃。

所述氯化汞與次氯酸鈉的體積比為3：1，且氯化汞的質(zhì)量濃度為0.1％，次氯酸鈉的質(zhì)量濃度為10％。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、細(xì)胞分化培養(yǎng)基以及生根壯苗培養(yǎng)基的pH值均為6。

所述誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6。

所述細(xì)胞分化培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6。

所述生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，該培養(yǎng)基的pH值為6。