本發(fā)明涉及動(dòng)物繁殖領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及提高母畜體內(nèi)早期胚胎附植數(shù)量和窩產(chǎn)仔數(shù)的方法。

背景技術(shù)：

超數(shù)排卵(superovulation，簡(jiǎn)稱(chēng)超排)，是應(yīng)用外源性促性腺激素誘發(fā)卵巢多個(gè)卵泡發(fā)育，排出比自然條件下多幾倍甚至十幾倍并具有受精能力的卵子，目的是在優(yōu)良母畜有效繁殖年限內(nèi)，盡可能獲得其后代，快速擴(kuò)繁優(yōu)良種群，或者獲得較多的卵子用于體外受精和早期胚胎的培養(yǎng)。目前，超數(shù)排卵主要采用血清促性腺激素(pmsg)刺激卵泡發(fā)育，再經(jīng)人絨毛膜促性腺激素釋放激素(hcg)或促黃體生成素(lh)以及促性腺激素釋放激素類(lèi)似物(gnrh-a)誘導(dǎo)排卵，以獲得較多的卵子。盡管超排技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用相當(dāng)廣泛，但超排會(huì)對(duì)母體子宮或胚胎造成傷害，如卵泡異質(zhì)性增加(manymc,denefjf,hamudis,haumonts.increasedfollicularheterogeneityinexperimentalcolloidgoiterproducedbyrefeedingiodineexcessafterthyroidhyperplasia.endocrinology1986；118:637-644.)，排卵雖然增加但胚胎活力降低(dolv,viannaw,gamar,camposra,pinesem,sant'annama.secondoestrussynchronizationandprecociousembryoviabilityafterpubertyinductioningiltsbytheuseofgonadotrophintreatment.reproddomestanim2005；40:141-144.martinat-bottef,venturie,guillouetp,driancourtma,terquim.inductionandsynchronizationofovulationsofnulliparousandmultiparoussowswithaninjectionofgonadotropin-releasinghormoneagonist(receptal).theriogenology2010；73:332-342.)，或排卵增加但附植的胚胎并未顯 著增加(martinat-bottef,venturie,guillouetp,driancourtma,terquim.inductionandsynchronizationofovulationsofnulliparousandmultiparoussowswithaninjectionofgonadotropin-releasinghormoneagonist(receptal).theriogenology2010；73:332-342.)，最終產(chǎn)仔數(shù)亦未提高(longeneckerde,daybn.fertilitylevelofsowssuperovulatedatpost-weaningestrus.janimsci1968；27:709-711)。研究結(jié)果顯示應(yīng)用pmsg進(jìn)行超數(shù)排卵或者同期發(fā)情改變了子宮內(nèi)分泌環(huán)境(popewf,xies,broermanndm,nephewkp.causesandconsequencesofearlyembryonicdiversityinpigs.jreprodfertilsuppl1990；40:251-260.)，使子宮環(huán)境與早期胚胎發(fā)育不同步從而影響了早期胚胎發(fā)育。

近年來(lái)，規(guī)?；?、集約化畜禽養(yǎng)殖快速發(fā)展，提高多胎動(dòng)物窩產(chǎn)仔數(shù)已經(jīng)成為養(yǎng)殖業(yè)增收的重要途徑。自1949年，tanabe等首次用pmsg刺激豬卵泡發(fā)育后，pmsg已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室小鼠超排取卵，或牛、羊超排沖胚等實(shí)踐生產(chǎn)過(guò)程。但文獻(xiàn)研究表明，超數(shù)排卵后成功附植的胚胎以及產(chǎn)仔數(shù)并沒(méi)有隨之增加。因此，針對(duì)這一問(wèn)題，研究人員嘗試通過(guò)向超排母豬日糧添加一定比例的葉酸，但并未提高經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)仔數(shù)(longeneckerde,daybn.fertilitylevelofsowssuperovulatedatpost-weaningestrus.janimsci1968；27:709-711.)；雖然文獻(xiàn)表明對(duì)未經(jīng)pmsg超排處理的雌性cd-1小鼠通過(guò)腹腔注射褪黑素會(huì)提高產(chǎn)仔數(shù)(hec,wangj,liy,zhuk,xuz,songy,songy,liug.melatonin-relatedgenesexpressedinthemouseuterusduringearlygestationpromoteembryoimplantation.jpinealres2015；58:300-309.)，但長(zhǎng)期使用褪黑素會(huì)影響自身內(nèi)分泌，甚至產(chǎn)生依賴(lài)性。且由于褪黑素見(jiàn)光易分解，所有操作需避光進(jìn)行，導(dǎo)致處理過(guò)程繁瑣；日糧添加n-氨甲酰谷氨酸(ncg)可以提高大鼠及母豬產(chǎn)仔數(shù)(zhuj,zengx,pengq,zengs,zhaoh,shenh,qiaos.maternal n-carbamylglutamatesupplementationduringearlypregnancyenhancesembryonicsurvivalanddevelopmentthroughmodulationoftheendometrialproteomeingilts.jnutr2015；145:2212-2220.)，但其是否能提高超排母畜產(chǎn)仔數(shù)，暫時(shí)沒(méi)有相關(guān)研究；在利用pmsg對(duì)母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理或定時(shí)輸精的時(shí)代背景及提高養(yǎng)殖企業(yè)和農(nóng)戶經(jīng)濟(jì)效益的迫切需求下，增加母畜的產(chǎn)仔數(shù)是一種必然趨勢(shì)。目前，針對(duì)超排后早期胚胎附植能力低，產(chǎn)仔數(shù)未增加的研究較少，目前暫未取得令人滿意的成果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種提高母畜體內(nèi)早期胚胎附植數(shù)量和窩產(chǎn)仔數(shù)的方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明針對(duì)pmsg可以提高雌性排卵，但早期胚胎附植或最終產(chǎn)仔數(shù)并未提高的技術(shù)問(wèn)題，以小鼠為模式動(dòng)物，通過(guò)腹腔注射n-乙酰半胱氨酸(nac)改善母畜子宮環(huán)境、提高小鼠早期胚胎附植能力，以期最終提高母畜窩產(chǎn)仔數(shù)。

本發(fā)明基于上述研究，科學(xué)合理地確定了nac注射劑量及時(shí)間，有效提高了雌性小鼠體內(nèi)早期胚胎附植數(shù)量，并可提高母畜最終窩產(chǎn)仔數(shù)。

第一方面，本發(fā)明提供了n-乙酰半胱氨酸在提高母畜體內(nèi)早期胚胎附植數(shù)量和窩產(chǎn)仔數(shù)方面的應(yīng)用。

第一方面，本發(fā)明提供了一種提高母畜體內(nèi)早期胚胎附植數(shù)量的方法，使體成熟的動(dòng)物通過(guò)注射或飼喂的方式攝取n-乙酰半胱氨酸。

進(jìn)一步地，通過(guò)注射方式攝取n-乙酰半胱氨酸的劑量為50～300mg/kgbw·天，通過(guò)飼喂方式攝取n-乙酰半胱氨酸的劑量為1～300mg/kgbw·天。

更進(jìn)一步地，當(dāng)所述動(dòng)物為小鼠時(shí)，通過(guò)注射方式攝取n-乙酰半胱氨酸的劑量為100～200mg/kgbw·天，優(yōu)選150mg/kgbw·天。

更進(jìn)一步地，當(dāng)所述動(dòng)物為豬時(shí)，通過(guò)飼喂方式攝取n-乙酰半胱氨酸的劑量為5～10mg/kgbw·天，優(yōu)選7.5mg/kgbw·天。

更為具體地，在所述動(dòng)物攝取n-乙酰半胱氨酸的期間，對(duì)其進(jìn)行超數(shù)排卵處理，并保證其攝取n-乙酰半胱氨酸直至胚胎附植結(jié)束。

進(jìn)一步地，本發(fā)明在具體實(shí)施方式中以小鼠和豬為例進(jìn)行試驗(yàn)，但本發(fā)明所述動(dòng)物為多胎動(dòng)物，并不限于豬和小鼠。

第三方面，本發(fā)明提供了一種提高母畜窩產(chǎn)仔數(shù)的方法，具體為：使多胎動(dòng)物自交配處理前至少7天起通過(guò)注射或飼喂的方式攝取n-乙酰半胱氨酸，直至胚胎附植或分娩結(jié)束。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明通過(guò)腹腔注射nac，針對(duì)性地改善了pmsg處理后的子宮環(huán)境及提高小鼠體內(nèi)早期胚胎發(fā)育能力，增加了超排小鼠附植胚胎數(shù)量，具有提高母畜窩產(chǎn)仔數(shù)的能力；且nac屬小分子化合物，化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，生產(chǎn)成本較低，具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組的操作簡(jiǎn)圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。需要理解的是以下實(shí)施例的給出僅是為了起到說(shuō)明的目的，并不是用于對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的宗旨和精神的情況下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和替換。

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

實(shí)施例1提高小鼠體內(nèi)早期胚胎附植能力

1、實(shí)驗(yàn)組

隨機(jī)選取7～8周齡icr雌性小鼠(北京維通利華)，如圖1所示，每天17:00通過(guò)腹腔注射0.1mlnac溶液(sigma公司)，nac注射量相當(dāng)于150mg/kg體重，連續(xù)注射14天，并在第5天17:00注射nac后，接著注射5iupmsg(寧波第二激素廠)，48h后(注射nac的第7天)注射5iuhcg(寧波第二激素廠)，并將雌性小鼠與雄性icr小鼠按1:1同籠交配，次日早8:00檢栓，見(jiàn)栓當(dāng)天記為0.5dpc(第8天)。在7.5dpc(第15天)時(shí)，通過(guò)尾靜脈向妊娠小鼠注射濃度為1％的芝加哥藍(lán)，5min后脫頸處死，用滅菌剪刀及手術(shù)鑷子打開(kāi)腹腔，小心剝離子宮，計(jì)數(shù)胚胎附植位點(diǎn)。

2、對(duì)照組

將nac注射液換成同體積的生理鹽水，其他操作同實(shí)驗(yàn)組。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1腹腔注射nac對(duì)小鼠早期胚胎附植能力的影響

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同表示差異顯著(p<0.05)

實(shí)施例2nac提高母豬窩產(chǎn)仔數(shù)

將體重?zé)o明顯差異的妊娠母豬分為兩組，設(shè)置對(duì)照組(n＝19)和試驗(yàn)組(n＝26)。

對(duì)照組的日糧中未添加nac，試驗(yàn)組的日糧中500mg/kg的nac。

兩組母豬自產(chǎn)前7天開(kāi)始飼喂上述不同日糧，直至分娩結(jié)束，統(tǒng)計(jì)窩產(chǎn)仔數(shù)并對(duì)比，見(jiàn)表2。

表2日糧中添加nac對(duì)母豬窩產(chǎn)仔數(shù)的影響

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同表示差異顯著(p<0.05)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)飼喂方式攝取nac的母豬相對(duì)于未攝取nac的母豬，可以顯著提高窩產(chǎn)仔數(shù)。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。