本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種葡萄的組培快繁方法。
背景技術：
葡萄是廣受人們歡迎的水果，可直接食用，還可以做成葡萄干、葡萄酒等。葡萄的繁殖是葡萄種植中非常關鍵的環(huán)節(jié)，目前，葡萄的繁殖方法主要是生物學的方法，包括扦插繁殖和嫁接繁殖。傳統(tǒng)的繁殖方法周期非常的長，成活率也不理想。組織培養(yǎng)的方法能夠大大縮短葡萄的繁殖周期，但是需要在無菌條件下進行，外植體的消毒是組織培養(yǎng)中的關鍵，目前，組織培養(yǎng)的污染率仍較高。
技術實現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提供了一種葡萄的組培快繁方法，污染率低。
一種葡萄的組培快繁方法，包括：
1)挑選生長健壯、無病蟲害的“巨峰”葡萄植株，取當年新生的嫩梢，用剪刀剪去葡萄的葉子，留取4cm長的帶芽的莖段；
2)取得的莖段用流水沖洗20分鐘，再將莖段依次于70～75％的酒精中浸泡30s、0.2～0.3％的升汞浸泡3min、0.3～0.5％次氯酸鈉浸泡5min，浸泡結束后，再用無菌水沖洗三次，每次30s；
3)將消毒后的莖段簡單修剪后，留取2cm左右的帶芽莖段依次經(jīng)分化培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)后，獲得葡萄組培苗。
所述分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為MS+GA30.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂。
所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為MS+GA30.3mg/L+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂。
所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為1/2MS+1.5mg/L IAA+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂。
葡萄的品種為“巨峰”。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明葡萄的組培快繁方法簡單、高效，污染率低。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡明本發(fā)明，應理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領域技術人員對本發(fā) 明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權利要求所限定的范圍。
實施例1
一種葡萄的組培快繁方法，具體步驟如下：
(1)于每年的3月份，挑選生長健壯、無病蟲害的“巨峰”葡萄植株，取當年新生的嫩梢，用剪刀剪去葡萄的葉子，留取4cm長的帶芽的莖段。
(2)取得的莖段用流水沖洗20分鐘，再在超凈工作臺中進行消毒處理，消毒時，將莖段于70％的酒精中浸泡30s后，再用0.2％的升汞浸泡3min，最后用0.5％次氯酸鈉浸泡5min，浸泡結束后，再用無菌水沖洗三次，每次30s。
(3)將消毒后的莖段簡單修剪后，留取2cm左右的帶芽莖段接種在培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上，25℃光照培養(yǎng)，45天左右分化成2cm左右的小苗，再將小苗接種到增殖培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行增殖培養(yǎng)，溫度為25℃，每天光照10個小時，50天后形成叢生苗。增殖系數(shù)為4.9。
(4)取增殖培養(yǎng)后的小苗，對根部進行修剪后接種到生根培養(yǎng)基(1/2MS+1.5mg/L IAA+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行生根培養(yǎng)，溫度為25℃，一般15天左右生根，生根率可達95％。
莖段接種到培養(yǎng)基上25天統(tǒng)計污染率，經(jīng)統(tǒng)計，采用本發(fā)明三步消毒后，污染率僅為2％。
實施例2
一種葡萄的組培快繁方法，具體步驟如下：
(1)于每年的3月份，挑選生長健壯、無病蟲害的“巨峰”葡萄植株，取當年新生的嫩梢，用剪刀剪去葡萄的葉子，留取4cm長的帶芽的莖段。
(2)取得的莖段用流水沖洗20分鐘，再在超凈工作臺中進行消毒處理，消毒時，將莖段于75％的酒精中浸泡30s后，再用0.3％的升汞浸泡2min，最后用0.3％次氯酸鈉浸泡8min，浸泡結束后，再用無菌水沖洗三次，每次30s。
(3)將消毒后的莖段簡單修剪后，留取2cm左右的帶芽莖段接種在培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上，25℃光照培養(yǎng)，45天左右分化成2cm左右的小苗，再將小苗接種到增殖培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行增殖培養(yǎng)，溫度為25℃，每天光照10個小時，50天后形成叢生苗。增殖系數(shù)為4.9。
(4)取增殖培養(yǎng)后的小苗，對根部進行修剪后接種到生根培養(yǎng)基(1/2MS+1.5mg/L IAA+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行生根培養(yǎng)，溫度為25℃，一般15天左右生根，生根率可達95％。
莖段接種到培養(yǎng)基上25天統(tǒng)計污染率，經(jīng)統(tǒng)計，采用本發(fā)明三步消毒后，污染率僅為1.4％。
對比例1
一種葡萄的組培快繁方法，具體步驟如下：
(1)于每年的3月份，挑選生長健壯、無病蟲害的“巨峰”葡萄植株，取當年新生的嫩梢，用剪刀剪去葡萄的葉子，留取4cm長的帶芽的莖段。
(2)取得的莖段用流水沖洗20分鐘，再在超凈工作臺中進行消毒處理，消毒時，將莖段于75％的酒精中浸泡30s后，再置于0.2％的升汞中浸泡5min，浸泡結束后，再用無菌水沖洗三次，每次30s。
(3)將消毒后的莖段簡單修剪后，留取2cm左右的帶芽莖段接種在培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上，25℃光照培養(yǎng)，，45天左右分化成2cm左右的小苗，再將小苗接種到增殖培養(yǎng)基(MS+GA30.3mg/L+6-BA0.6mg/L+IBA0.3mg/L+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行增殖培養(yǎng)，溫度為25℃，每天光照10個小時，50天后形成叢生苗。增殖系數(shù)為5.3。
(4)取增殖培養(yǎng)后的小苗，對根部進行修剪后接種到生根培養(yǎng)基(1/2MS+1.5mg/L IAA+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂)上進行生根培養(yǎng)，溫度為25℃，一般15天左右生根，生根率可達95％。
莖段接種到培養(yǎng)基上25天統(tǒng)計污染率，經(jīng)統(tǒng)計，本發(fā)明的污染率為8％。