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一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法

文檔序號:265808閱讀:343來源:國知局
一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法,包括九里香無菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、液體懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)化等步驟,本發(fā)明方法所制備的九里香懸浮細(xì)胞生長速度快,可以獲得較高的懸浮細(xì)胞,可以建立一個快速生長的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系,維持其可持續(xù)開發(fā)和利用。
【專利說明】 一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種九里香懸浮培養(yǎng)的快繁方法,屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]九里香,又稱:石辣椒、九秋香、九樹香等,蕓香科,iforraja exotica Z.,小喬木,九里香喜溫暖,最適宜生長的溫度為20_32°C,不耐寒。常見于離海岸不遠(yuǎn)的平地、緩坡、小丘的灌木叢中。喜生于砂質(zhì)土、向陽地方。九里香產(chǎn)于:云南、貴州、湖南、廣東、廣西、福建、海南、中國臺灣等地,以及亞洲其他一些熱帶及亞熱帶地區(qū)。產(chǎn)臺灣、福建、廣東、海南、廣西五省區(qū)南部。九里香葉含多種香豆精類化合物,從廣東、云南、海南、臺灣等各地產(chǎn)品中已分離得到:九里香甲素,九里香乙素,九里香丙素,長葉九里香內(nèi)酯二醇,長葉九里香醛,5,7-二甲氧基-8- (3’ -甲基-2’-酮基丁基)香豆精,海南九里香內(nèi)酯等,行氣活血;散瘀止痛;解毒消腫。主胃脘疼痛;跌撲腫痛;瘡癰;蛇蟲咬傷。主治跌打腫痛,風(fēng)濕骨痛,胃痛,牙痛,破傷風(fēng),流行性乙型腦炎,蟲、蛇咬傷,局部麻醉。用于胃痛,風(fēng)濕痹痛;外治牙痛,跌撲腫痛,蟲蛇咬傷。種植方法為種子繁殖,壓條繁殖,扦插繁殖。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法,由該方法所制備的九里香懸浮細(xì)胞生長速度快,可以獲得較高的懸浮細(xì)胞,建立一個快速生長的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系,維持其可持續(xù)開發(fā)和利用。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
取九里香幼嫩的葉片,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.1%的升萊處理8min,無菌水沖洗5次,吸水紙吸干,消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),附加蔗糖30g/L,瓊脂7g/L,pH5.8,暗室培養(yǎng),溫度25°C,相對濕度75%,誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng),附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照45001x,溫度25°C,接種密度為8%,125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)速110r/min,懸浮培養(yǎng)兩周后的出來的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中,30d后測定懸浮細(xì)胞的增長率。
[0005]采用本發(fā)明制備的懸浮細(xì)胞增長率高,周期短,產(chǎn)量大,污染小,利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述,但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取九里香幼嫩的葉片,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.1%的升萊處理8min,無菌水沖洗5次,吸水紙吸干,消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),附加蔗糖30g/L,瓊脂7g/L,pH5.8,暗室培養(yǎng),溫度25°C,相對濕度75%,誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4Mmol/L2,4-D+lMmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng),附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照45001x,溫度25°C,接種密度為8%,125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)速110r/min,懸浮培養(yǎng)兩周后的出來的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中,30d后測定懸浮細(xì)胞的增長率,增長率提高50%。
[0008]實施例2
取九里香幼嫩的葉片,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.1%的升萊處理8min,無菌水沖洗5次,吸水紙吸干,消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),附加蔗糖30g/L,瓊脂7g/L,pH5.8,暗室培養(yǎng),溫度25°C,相對濕度75%,誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+5Mmol/L2,4-D+1.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng),附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照45001x,溫度25°C,接種密度為8%,125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)速110r/min,懸浮培養(yǎng)兩周后的出來的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中,30d后測定懸浮細(xì)胞的增長率,增長率提高45%。
[0009]實施例3
取九里香幼嫩的葉片,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.1%的升萊處理8min,無菌水沖洗5次,吸水紙吸干,消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),附加蔗糖30g/L,瓊脂7g/L,pH5.8,暗室培養(yǎng),溫度25°C,相對濕度75%,誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4Mmol/L2,4-D+1.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng),附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照45001x,溫度25°C,接種密度為8%,125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)速110r/min,懸浮培養(yǎng)兩周后的出來的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中,30d后測定懸浮細(xì)胞的增長率,增長率提高47%。
【權(quán)利要求】
1.一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法,包括九里香無菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、液體懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)化,其主要步驟如下: (1)取九里香幼嫩的葉片,進(jìn)行消毒處理; (2)取步驟(I)消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAAl.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),附加蔗糖30g/L,瓊脂7g/L,pH5.8,暗室培養(yǎng),溫度25 °C,相對濕度75%; (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng),附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照45001x,溫度 25 0C ; (4)取步驟(3)懸浮培養(yǎng)兩周后的出來的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法,其特征在于:步驟(O中所述九里香無菌葉片的獲得為取九里香幼嫩的葉片,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.1%的升萊處理8min,無菌水沖洗5次,吸水紙吸干。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法,其特征在于:步驟(3)中九里香懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的條件為無菌抽濾后接種密度為8%,125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)速110r/min,培養(yǎng)周期為30d。
【文檔編號】A01H4/00GK104255478SQ201410463221
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司
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