一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術領域】。本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點的基因型，可以快速判定出該位點的基因型，生產基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系，能有效避免測交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進程，降低培育成本。采用本發(fā)明方法選育的青脛隱性白羽雞品系其肉質細嫩，肉味鮮美，生產性能高，既可以作為商品雞直接投入生產，還可以與青脛黃麻羽進行配套應用。
【專利說明】—種青脛隱性白羽雞品系的選育方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術領域】。【背景技術】
[0002]隨著生活水平的提高，人們的消費觀念從過去的數(shù)量型轉變?yōu)橘|量型。人們對雞肉肉質的要求也越來越高。我國的地方雞具有肉質好的特點，但是其生長速度較慢，飼料轉化率低。而國外的快大型肉雞雖生長速度快、飼料轉化率高，其肉質較差。為解決這一問題，將國外快大型肉雞與國內地方優(yōu)質肉雞進行雜交，既能夠改善國外快大型肉雞的肉質也能加快地方優(yōu)質肉雞的生長速度和生產性能。但是，由于我國人民長期的飲食習慣的影響，中國消費者偏愛黃麻羽、黑羽等有色羽的雞，尤其是南方城市不接受快速生長的白羽雞。為了使雜交后雞的表型符合中國消費者的需求，就需要純合的隱性白羽雞，隱性白羽雞生產性能高，且與我國有色羽雜交后能保持有色羽的羽色，對于我國優(yōu)質雞的育種上具有重大的意義。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法。
[0004]為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術方案是:
[0005]一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0006](I)利用青脛隱性白羽雞作為父本，白來航雞作`為母本進行雜交，生產出Fl代；
[0007](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0008](3)利用AS-PCR測定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點為ii基因型的個體，淘汰顯性白羽位點為II和Ii基因型的個體，得到顯性白羽位點為ii基因型的青脛白羽公母雞；
[0009](4)取顯性白羽位點為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型，重復上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
[0010]所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞，經人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測定顯性白羽位點為ii基因型。
[0011]所述步驟(3)中利用AS-PCR測定F2代青脛白羽公母雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測雞全基因組DNA為模板，以引物對Pl為引物PCR擴增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對P2為引物PCR擴增雞PMEL17基因i等位基因；對擴增得到的片段進行瓊脂糖凝膠電泳，根據瓊脂糖凝膠電泳結果鑒定雞顯性白羽位點的基因型；
[0012]所述的引物對Pl為:
[0013]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0014]下游引物，Pl-R:5’-GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)；
[0015]所述的引物對P2為:[0016]上游引物，P2-F:5’-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3’(如 SEQ ID N0.3 所示)，
[0017]下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.4 所示)。
[0018]所述的PCR 擴增反應體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L,Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L, P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0019]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化鎂和PCR反應緩沖液，為市售商品，可購自上海生工、大連寶生物、北京百泰克、北京康為等公司。
[0020]所述的PCR擴增反應程序為:94°C預變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s, 35個循環(huán)；72°C延伸IOmin0
[0021]所述的瓊脂糖凝膠的質量濃度為1.5%。
[0022]所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時間為40min。
[0023]所述的鑒定雞顯性白羽位點基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
[0024]優(yōu)選的，將步驟(4)得到的顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產出有色羽肉雞。
[0025]所述的青胚黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、盧氏雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞等。
[0026]本發(fā)明的有益效果:
[0027]本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點的基因型，可以快速判定出該位點的基因型，生產基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系，能有效避免測交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進程，降低培育成本。采用本發(fā)明方法選育的青脛隱性白羽雞品系其肉質細嫩，肉味鮮美，生產性能高，既可以作為商品雞直接投入生產，還可以與青脛黃麻羽進行配套應用。
[0028]本發(fā)明中用于檢測雞PMEL17基因顯性白羽位點基因型的引物，是針對PMEL17基因第10外顯子9bp插入(-CTGGGCACC-)設計等位基因I特異性引物Pl-R ;針對PMEL17基因第10外顯子無9bp插入設計等位基因i特異性引物P2-F。這樣引物Pl-R與Pl-F只能擴增I等位基因，擴增的片段大小為224bp ;引物P2-R與P2-F只能擴增i等位基因，擴增的片段大小為144bp。此外，由于上游引物Pl-F與下游引物P2-R的組合也可以擴增，擴增的片段大小為322bp，這個擴增不受9bp插入的影響。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1為本發(fā)明實施例1中各樣本PMEL17基因顯性白羽位點的PCR電泳圖；
[0030]注:自左至右泳道分別代表DNA Marker I和基因型i1、i1、I1、I1、I1、i1、I1、ii和Ii的電泳帶型。
【具體實施方式】
[0031]下述實施例僅對本發(fā)明作進一步詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限制。
[0032]實施例1
[0033]本實施例中青脛隱性白羽雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0034](I)利用固始雞群體中青脛隱性白羽雞作父本，白來航雞作母本進行雜交，生產出Fl代；
[0035] (2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0036](3)利用AS-PCR的方法測定F2代青脛白羽公母雞的基因型，具體包括以下步驟:
[0037]①樣品的采集
[0038]對F2代選留的青脛白羽雞翅靜脈采血，加1/3抗凝劑，用蛋白酶K法提取血液DNA,將DNA樣品保存于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> [0039]②引物設計
[0040]以PMEL17 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)為模板設計引物對 Pl 和P2，如下所示；
[0041]所述的引物對Pl為:
[0042]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
[0043]下游引物，P1-R: 5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3，；
[0044]所述的引物對P2為:
[0045]上游引物，P2-F: 5，-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，，
[0046]下游引物，P2-R: 5，-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0047]③PCR擴增
[0048]以引物對Pl和P2為引物建立了 25.0 μ L擴增體系:2XTaq PCR MasterMix(購自北京百泰克公司)12.5 μ L，CldH2O 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L, P2-F 0.6 μ L, P2-R0.4μ L, DNA 模板 1.0μ L ；
[0049]反應程序為:94°C預變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個循環(huán)；72°C延伸IOmin ；
[0050]④PCR擴增產物的檢測與結果判定
[0051]取10.0μ L PCR擴增后產物，1.5%的瓊脂糖凝膠電泳(電泳電壓:120V ;電泳時間:40min)點樣，電泳結束后，用凝膠成像系統(tǒng)對瓊脂糖凝膠照相檢測，電泳圖譜參見圖1 ;根據電泳圖譜中出現(xiàn)的條帶大小進行判定:當出現(xiàn)322bp和224bp片段，則為顯性白羽純合子(II基因型);當出現(xiàn)322bp和144bp的片段，則為野生型純合子(ii基因型);當出現(xiàn)322bp、224bp和144bp的片段，則為顯性白羽雜合子(Ii基因型)；
[0052](4)根據基因型判定結果，選留顯性白羽位點為ii基因型的個體，淘汰顯性白羽位點為II和Ii基因型的個體，得到顯性白羽位點為ii基因型的公母雞；
[0053](5)取顯性白羽位點為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型，重復上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系；
[0054](6)對步驟(5)得到的顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系作為父本與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產出有色羽肉雞。
【權利要求】
1.一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)利用青脛隱性白羽雞作為父本，白來航雞作為母本進行雜交，生產出Fl代； (2)Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞； (3)利用AS-PCR測定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點為ii基因型的個體，淘汰顯性白羽位點為II和Ii基因型的個體，得到顯性白羽位點為ii基因型的青脛白羽公母雞； (4)取顯性白羽位點為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型，重復上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
2.根據權利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞。
3.根據權利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(3)中利用AS-PCR測定F2代青脛白羽公母雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測雞全基因組DNA為模板，以引物對Pl為引物PCR擴增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對P2為引物PCR擴增雞PMEL17基因i等位基因；對擴增得到的片段進行瓊脂糖凝膠電泳，根據瓊脂糖凝膠電泳結果鑒定雞顯性白羽位點的基因型； 所述的引物對Pl為: 上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
下游引物，Pl-R:5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’ ； 所述的引物對P2為: 上游引物，P2-F:5’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，， 下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
4.根據權利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR擴增反應體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L, Pl-R0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L，P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
5.根據權利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR擴增反應程序為:94°C預變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個循環(huán)；72°C延伸 lOmin。
6.根據權利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠的質量濃度為1.5%。
7.根據權利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時間為40min。
8.根據權利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的鑒定雞顯性白羽位點基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
9.根據權利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:將步驟(4)得到的顯性白羽位點為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產出有色羽肉雞。
10.根據權利要求9所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的青脛黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、盧氏雞、桃源雞、瑤雞或茶花雞。
【文檔編號】A01K67/027GK103609527SQ201310589767
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權日:2013年11月20日
【發(fā)明者】康相濤, 田亞東, 李轉見, 楊朋坤, 孫桂榮, 韓瑞麗, 蔣瑞瑞, 呂世杰, 李國喜, 劉小軍, 閆峰賓, 王彥彬 申請人:河南農業(yè)大學