一種中華獼猴桃的組培快繁方法
【專利摘要】一種中華獼猴桃的組培快繁方法，涉及獼猴桃種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法。本發(fā)明用當年生幼嫩葉片為外植體，接種在愈傷誘導及叢生芽分化培養(yǎng)基MS+0.3mg/LZT+0.05mg/LNAA上；本發(fā)明還提供了改良MS，待叢生芽分化后，轉入改良MS+2mg/LZT增殖培養(yǎng)基進行繼代，根據(jù)苗高轉入改良MS+0.015mg/LTDZ增壯培養(yǎng)基中，將符合生根的小苗轉入1/2改良MS+0.7mg/LIBA+0.1g/LAC生根培養(yǎng)基中，生根后移栽馴化。本發(fā)明愈傷誘導率達96.4%，叢生芽芽高達1.67cm，叢生芽增值系數(shù)達3.67，生根率達98.12%，且培養(yǎng)基成本低，繁殖周期短，可實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。
【專利說明】一種中華獼猴桃的組培快繁方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，尤其涉及中華獼猴桃種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術】
[0002]稱猴桃(kiwifruit)屬稱猴桃科(Actinidiaceae)稱猴桃屬spp.)落葉藤本植物，是一種重要的經(jīng)濟林木和果樹。獼猴桃富含Vc、礦物質(zhì)和花青苷等營養(yǎng)物質(zhì)(Singletary, 2012),營養(yǎng)價值和藥用價值高。近年來,被廣泛用于鮮果、飲料、保健用品等食用形式，市場需求量較大(段冬洋等.獼猴桃食療價值及加工過程中變色機理和控制措施的研究[C].//中國園藝學會熱帶南亞熱帶果樹分會成立大會暨首屆學術研討會論文集.2006:433-436.)。中華獼猴桃是獼猴桃屬的一種，與其它種類的獼猴桃如美味獼猴桃、毛花獼猴桃、葛棗獼猴桃等相比，其抗氧化能力最強，Vc含量更高(宋美晶，不同品種獼猴桃的成分研究[D].遼寧師范大學，2012.)，經(jīng)濟價值高于其它同類產(chǎn)品，市場需求量大，2013年出口價格平均為772.8美元/噸(黃琳琳、新西蘭獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展與營銷模式[J].中國果業(yè)信息，2013，02:32-34.)，推廣種植可滿足更多消費者的需求，增加果農(nóng)的經(jīng)濟收益。然而，其播種繁殖生長周期長、始花年齡長，不利于快速形成獼猴桃的市場價值。
[0003]組織培養(yǎng)是一種無性系快速繁殖方法，具有繁殖周期短、遺傳穩(wěn)定性好、繁殖系數(shù)大等特點。已有研究表明，ZT (玉米素)是獼猴桃屬植物組培愈傷誘導和增殖的最佳細胞分裂素，已在美味稱猴桃( Gonzdilez等，1995)、葛率稱猴桃(Takahashi等,2004)、毛花稱猴桃(Wu等，2011)中成功誘導出愈傷組織。MS培養(yǎng)基為植物組培通用培養(yǎng)基，無機鹽濃度高，但上述文獻均未注意能否通過改善MS培養(yǎng)基，降低其硝態(tài)鹽及鈣離子濃度，提高獼猴桃組培苗的生長發(fā)育水平。對于獼猴桃叢生芽的增殖，玉米素的綜合效應較其他激素好，且變異少。TDZ具有雙重效應:低濃度時促進腋芽的增殖，高濃度時促進不定芽和愈傷的增殖(Murthy BNS, Murch S J, Saxena P K.Thidiazuron: A potent regulator ofin vitro plant morphogenesis[J].1n Vitro Cellular & Developmental Biology -Plant, 1998, 34(4): 267-275.)，然而，TDZ濃度未涉及不定芽增壯影響。在獼猴桃生根培養(yǎng)中，IBA綜合表現(xiàn)最佳，Wu等(2011)認為誘導毛花獼猴桃(A eriantha)生根最佳的IBA濃度為0.6 mgL' Prado等(2005)提出誘導美味獼猴桃生根的最佳的IBA濃度為0.5mgL'在植物組織培養(yǎng)中，活性炭具有吸附有毒物質(zhì)和刺激生根的雙重作用，多用于生根誘導培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在提供一種中華獼猴桃的組培快繁方法，該方法根據(jù)物種基因型差異性，而與改良MS培養(yǎng)基和不同階段的組分和濃度聯(lián)系起來，以提高在各階段中獼猴桃組培苗的生長發(fā)育水平。
[0005]實現(xiàn)上述目的的方法包括葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段，而且:
愈傷誘導及叢生芽分化的培養(yǎng)基為MS +0.3mg/L ΖΤ+0.05 mg/L NAA ；
叢生芽增殖的培養(yǎng)基為改良MS +2mg/L ZT;
叢生芽增壯的培養(yǎng)基為改良MS +0.015mg/L TDZ ；
生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1/2改良MS +0.7mg/L IBA+0.lg/L AC。
[0006]上述改良MS培養(yǎng)基除具有一般MS培養(yǎng)基的組分外，其無機鹽中含400mgr1NH4N03>1010mgr1KN03>320mgr1CaCl2.2H20。
[0007]所述葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段，培養(yǎng)室均可為光照16h/d，光強2000LX，溫度24°C，濕度70%。
[0008]所述葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段培養(yǎng)時間根據(jù)調(diào)查愈傷誘導率及叢生芽分化率、叢生芽增殖率、叢生芽增壯效果和生根率確定。
[0009]本發(fā)明所用試劑全稱:NAA,1-naphthyla-cetic acid,萘乙酸；IBA,Indole-3-butytric acid,吲哚丁酸；6_BA,6-Benzylaminopurine,6_ 節(jié)氨基腺嘌呤；ZT,Zeatin,玉米素；TDZ, Thidiazuron,噻重氮苯基服；AC, Active carbon,活性炭。
[0010]上述改良MS培養(yǎng)基除了無機鹽中含^OmgL-1NH4NO3UOlOmgL-1KNOy320mgr1CaCl2.2H20 外， 與一般 MS 培養(yǎng)基的相同組分為 WOmgL-1MgSO4.7H20、170mgL_1KH2P04,22.3mgL_1MnS04.H20,8.6mgL_1ZnS04.7Η20、6.2 mgL_1H3B03,0.83mgL_1KI,0.25mgr1Na2Mo04.2H20、0.025mgr1CoCl2.6H20、0.025mgr1CuS04.5H20、37.SmgL-1Na2-EDTA,27.8 mgL 1FeSO4.7Η20、2 mgL 1 甘氛酸、0.5 mgL 1VB6^0.1 mgL 1VB1^0.5 mgL 1VB3和 100 mgL 1肌醇。
[0011]在本發(fā)明中，發(fā)明人通過長期觀察獼猴桃組培苗的生長發(fā)育，發(fā)現(xiàn)降低硝態(tài)鹽及鈣離子濃度，更利于其生長。一般MS與本發(fā)明改良MS組分對比見表1:
表1 MS與本發(fā)明改良MS組分對比表
【權利要求】
1.一種中華獼猴桃組培快繁方法，包括葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段，其特征是: 愈傷誘導及叢生芽分化的培養(yǎng)基為MS +0.3mg/L ΖΤ+0.05 mg/L NAA ； 叢生芽增殖的培養(yǎng)基為改良MS +2mg/L ZT; 叢生芽增壯的培養(yǎng)基為改良MS +0.015mg/L TDZ ； 生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1/2改良MS +0.7mg/L IBA+0.lg/L AC ； 上述改良MS培養(yǎng)基除與具有一般MS培養(yǎng)基的組分外，其無機鹽中含400mg.L_ 1NH4NO3UOlOmg.L^1KNO3>320mg.L-1CaCl2.2H20。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽 增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段，培養(yǎng)室均可為光照16h/d，光強2000LX，溫度24°C，濕度70%。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述葉片愈傷誘導及叢生芽分化、叢生芽增殖、叢生芽增壯和生根培養(yǎng)四個階段培養(yǎng)時間分別根據(jù)所調(diào)查的愈傷誘導率及叢生芽分化率、叢生芽增殖率、叢生芽增壯效果和生根率確定。
【文檔編號】A01H4/00GK103548680SQ201310520758
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月30日 優(yōu)先權日:2013年10月30日
【發(fā)明者】張漢堯, 張?zhí)? 劉小珍 申請人:西南林業(yè)大學