一種制備印楝細(xì)胞培養(yǎng)物殺蟲劑的方法
【專利摘要】一種制備印楝細(xì)胞培養(yǎng)物殺蟲劑的方法。屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。印楝素具有控制多種害蟲的作用，一般采用從其種子種仁中提取，因而，印楝素生產(chǎn)受到很大的限制。采用印楝細(xì)胞培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)可以克服這方面的缺陷。先是誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)獲得松散的印楝愈傷組織；然后振蕩培養(yǎng)、過篩、繼代培養(yǎng)形成分散性好的細(xì)胞系；經(jīng)過誘變、振蕩培養(yǎng)、過篩、鑒定后獲得小細(xì)胞突變體；優(yōu)化小細(xì)胞突變體的懸浮培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，并確保印楝素能分泌到胞外；從愈傷組織和懸浮培養(yǎng)物獲得四種提取液制成的產(chǎn)品；該類產(chǎn)品均具顯著的控蟲效果。該制劑能有效控制多種農(nóng)林、倉儲害蟲，并具降解快、殘留量低、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)。
【專利說明】一種制備印楝細(xì)胞培養(yǎng)物殺蟲劑的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]該方法屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。通過組織培養(yǎng)、發(fā)酵工程等生產(chǎn)含印楝素的廣譜殺蟲劑，工藝技術(shù)簡單、易于推廣，其產(chǎn)品為綠色生物農(nóng)藥、易降解、低殘留，可廣泛應(yīng)用于農(nóng)林害蟲和倉儲害蟲的控防。采用這一技術(shù)工藝，可以節(jié)省印楝種植的耕地、穩(wěn)定產(chǎn)品的質(zhì)量、降低印楝素的生產(chǎn)成本。
【背景技術(shù)】
[0002]印楝素具有控制多種害蟲的作用，一般采用從印楝的種子種仁中提取。印楝主要分布在在南亞和巴西等熱帶地區(qū),我國在海南、廣東和云南等南方地區(qū)有一定規(guī)模的引種。一般，印楝在成長3-5年后才進(jìn)人盛果期，因而大規(guī)模生產(chǎn)印楝素會受到很大的限制。采用工廠工業(yè)化生產(chǎn)可以克服這類缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]采用種子、子葉、幼莖等外植體來誘導(dǎo)愈傷組織、并通過繼代培養(yǎng)獲得松散型愈傷組織；將松散型愈傷組織振蕩培養(yǎng)形成小細(xì)胞團(tuán)；進(jìn)一步繼代培養(yǎng)形成分散效果良好的細(xì)胞系；經(jīng)過射線或紫外線照射、振蕩培養(yǎng)、過篩、鑒定后獲得小細(xì)胞突變體；小細(xì)胞系懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化，并能誘導(dǎo)印楝細(xì)胞將積累的印楝素分泌到胞外；印楝培養(yǎng)物:愈傷組織、懸浮培養(yǎng)物、懸浮培養(yǎng)物經(jīng)過濾分離后的濾液和細(xì)胞等經(jīng)處理后獲得四種提取液。四種液體經(jīng)多種方法濃縮成10-50倍的濃縮液或直接制成凍干粉；它們均可常溫密封儲存1-3個月；取該類濃縮液或凍干粉加入水稀釋成不同濃度的工作液，分別處理飼養(yǎng)20天后黃粉蟲幼蟲，均可產(chǎn)生顯著的控蟲效果。
【具體實施方式】
[0004]I采用種子、子葉、`幼莖等外植體來誘導(dǎo)愈傷組織
[0005]外植體葉片、幼莖和種子用無菌水清洗后，75%的酒精殺菌30s，無菌水反復(fù)沖洗
3-5次；再用10%次氯酸鈉消毒5min，無菌水反復(fù)沖洗3-5次；將消毒的外植體分別接種在四種激素組合(表1中1-4號)的MS固體培養(yǎng)基中。25°C黑暗條件下培養(yǎng)25-30天，觀察愈傷組織形態(tài)特征和發(fā)生率(見表2-4)。選擇松散型、生長旺盛的淡綠色或淡黃色的愈傷組織進(jìn)入繼代培養(yǎng)。
[0006]表1印楝愈傷組織的誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)的激素組合
【權(quán)利要求】
1.采用種子、子葉、幼莖等外植體來誘導(dǎo)愈傷組織、并通過繼代培養(yǎng)獲得松散型愈傷組織；將松散型愈傷組織振蕩培養(yǎng)形成小細(xì)胞團(tuán)；進(jìn)一步繼代培養(yǎng)形成分散效果良好的細(xì)胞系；經(jīng)過0.05-1000Gy的、射線或5-500秒的紫外線照射、30_300rpm振蕩培養(yǎng)、30-200目篩子過篩收獲篩過物,如此培養(yǎng)、過篩等2-5次可獲得小細(xì)胞突變體。
2.在培養(yǎng)基中調(diào)整硝酸鹽與銨鹽的含氮比為0.1-10:1，促使印楝小細(xì)胞系在培養(yǎng)懸浮時細(xì)胞內(nèi)積累的印楝素分泌到胞外。
3.印楝細(xì)胞培養(yǎng)物:愈傷組織、懸浮培養(yǎng)物、懸浮培養(yǎng)物經(jīng)過濾分離后的濾液和細(xì)胞等經(jīng)細(xì)胞破碎、浸出后獲得四種提取液；四種提取液可分別制成10-50倍的濃縮液或直接制成凍干粉常溫貯藏；分別取該類濃縮液或凍干粉直接加入水稀釋成不同濃度的工作液，均可成為控蟲的生物農(nóng)藥。`
【文檔編號】A01N63/02GK103493844SQ201310444545
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月26日
【發(fā)明者】李興林, 趙娜, 韓廣建, 曹雪飛, 韓楊, 曹愛佳, 張國運(yùn), 成芳, 賈士儒 申請人:天津科技大學(xué)