一種海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其制備過程包括以下步驟：乳酸菌增菌、洗滌后收集菌體；菌體與營養(yǎng)飼料混合后干燥，制得乳酸菌劑，其與營養(yǎng)飼料總重量比為1∶2～10，終產(chǎn)品水份含量為2～5%，利用本發(fā)明實施例所述方法配制的海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑，適用于海參的養(yǎng)殖；其處理過程簡單，耗時少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時間長，無污染。本發(fā)明對大批量海參養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實意義。
【專利說明】一種海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明主要涉及海產(chǎn)品疾病檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及海產(chǎn)品益生菌營養(yǎng)粉，尤其是一種海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國海域遼闊，自然條件優(yōu)越，海洋資源十分豐富。但目前開發(fā)利用的程度還很低。這也說明我國開發(fā)利用海洋資源的潛力巨大，遼寧海域是中國重要的海洋生物資源、漁業(yè)資源寶庫，其盛產(chǎn)海參、扇貝、貽貝、牡蠣和魚、蝦以及藻類等，帶動海洋經(jīng)濟(jì)發(fā)展。加強(qiáng)多邊和雙邊的海洋開發(fā)國際合作，集中集約開發(fā)利用海域及海島資源，合理配置優(yōu)勢海洋產(chǎn)業(yè)，科學(xué)高效開發(fā)海洋資源，積極開展科研與試驗、開發(fā)與利用，海水養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化是合理開發(fā)海水養(yǎng)殖資源的重要手段，研究制定海產(chǎn)品養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，合理開發(fā)海水灘涂養(yǎng)殖資源，提高養(yǎng)殖海產(chǎn)品疾病是當(dāng)今養(yǎng)殖業(yè)的重點內(nèi)容。
[0003]海產(chǎn)品養(yǎng)殖是一項高風(fēng)險的養(yǎng)殖業(yè)，傳統(tǒng)的小戶的海產(chǎn)品養(yǎng)殖給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的市場和技術(shù)風(fēng)險。為了將養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖風(fēng)險降到最低，開展對各類養(yǎng)殖業(yè)，包括魚、蝦、蟹、海參、鮑魚、貝類、海藻等各類海產(chǎn)品的疾病防治工作任務(wù)舉足輕重。有報道稱，霍亂弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌等有害細(xì)菌，是引起海產(chǎn)品各種疾病的罪魁禍?zhǔn)住?br> [0004]世界海參養(yǎng)殖以刺參(溫帶種)和糙海參(熱帶種)為主要品種。除中國、日本、韓國主要養(yǎng)殖刺參外，其他國家均以糙海參為主要養(yǎng)殖對象。近年來，隨著自然資源的減少和消費需求的增加，海參的人工養(yǎng)殖在一些國家逐漸興起。其中，中國和日本是主要的養(yǎng)殖國家，印度、印度尼西亞、越南、菲律賓、韓國、埃及等也有小規(guī)模的增養(yǎng)殖。
[0005]刺參(Apostichopus japonicus)是我國有記載的20余種食用海參中價值最高、惟一分布于黃渤海域的溫帶種。其蛋白質(zhì)含量高，糖類豐富，脂類含量低，且不含膽固醇，具有很高的營養(yǎng)保健和藥用價值，被人們視為重要的海珍品，因而具有重要的市場價值。近年來，海參消費需求量的逐年增加導(dǎo)致了世界范圍內(nèi)海參自然資源的過度開發(fā)和種群數(shù)量的急劇下降，因此，海參的人工養(yǎng)殖也隨之發(fā)展起來。隨之而來的是海參養(yǎng)殖中遇到的各類問題。
[0006]乳酸菌是目前最常用的益生菌種類。本發(fā)明不限定乳酸菌的種類，只要是標(biāo)準(zhǔn)菌株即可開發(fā)成海參養(yǎng)殖營養(yǎng)制劑，有效提高海參體內(nèi)的益生菌群。能夠達(dá)到抗菌、免疫、促生長的多重效果，對海參健康養(yǎng)殖有現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]由【背景技術(shù)】可見，提高刺參自身的免疫力，增強(qiáng)其抗病力是解決刺參病害問題的重要途徑。本研究為達(dá)到防治養(yǎng)殖業(yè)中海參患病的目的，避免在海參疾病防治中使用抗生素，本發(fā)明所述的海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其步驟包括:
[0008]乳酸菌混合物由以下方法制備:[0009](I)增菌:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，培養(yǎng)1?后，再以3-5%的體積比接種乳酸菌培養(yǎng)基，進(jìn)行發(fā)酵，3(T35°C條件下，培養(yǎng)24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為IO7~101(lCfU/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0010](2)洗滌:將步驟(1)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心2~5min，以收集菌體；以1:50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢鑖 5min后，收集混合液；
[0011](3)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0012](4)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:2~10，干燥24~36h，產(chǎn)物水份含量為2~5%，制得乳酸菌混合物；其中:
[0013]所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50~70份；馬尾藻粉:25~40份；海蒿子15~35 ;大豆蛋白10~15份；魚粉:5~10份；螺旋藻2~5份；貽貝粉2~5份；低聚殼聚糖:1~4份；復(fù)合多維I~4份；復(fù)合多礦I~4份。
[0014]對于以上所述的所有技術(shù)方案中，較優(yōu)的條件如下:所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0015]取蛋白胨IOg,牛肉膏IOg,酵母提取液5g,葡萄糖20g,檸檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫_801mL，蒸餾水lOOOmL，115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用。
[0016]本發(fā)明中，上述產(chǎn)品制備方法中，均未限定方法的其他等效條件，因其可根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)確定，也未限定所用試劑的級別，因其對結(jié)果影響小，并可以通過配制或商業(yè)途徑購買獲得，技術(shù)人員可以依據(jù)實施例中所列條件做參考依據(jù)進(jìn)行調(diào)整。這些關(guān)于制劑方式和方法的選擇，相信本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以從現(xiàn)有技術(shù)中得到充分的啟示，本發(fā)明不再贅述。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點是:適用于海參的育苗池和養(yǎng)成池；處理過程簡單，耗時少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時間長，無污染。
【具體實施方式】
[0018]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0019]實施例1
[0020](I)菌種復(fù)蘇:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35 °C條件下，培養(yǎng)12h。
[0021](2)增菌:再以4%的體積比接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)28h，至菌懸液菌含量的終濃度為108cfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0022]其中，所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0023]取蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取液5g，葡萄糖20g，檸檬酸二銨2g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫_801mL，蒸餾水lOOOmL，115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用；
[0024](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以1:50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0025](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；[0026](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:80，干燥28h，產(chǎn)物水份含量為3%，制得海參養(yǎng)殖用麥飯石載體乳酸菌劑；
[0027]所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:40份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:10份；螺旋藻5份；貽貝粉5份；低聚殼聚糖:4份；復(fù)合多維I份；復(fù)合多礦4份。
[0028]實施例2
[0029](I)菌種復(fù)蘇:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35 °C條件下，培養(yǎng)12h ；
[0030](2)增菌:再以5%的體積比接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0031]其中，所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0032]取蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取液5g，葡萄糖20g，檸檬酸二銨2g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫-80 Im L，蒸餾水lOOOmL，115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用;
[0033](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以5000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以I: 50的質(zhì)量比與PBS緩沖液充分混合后，收集混合液；
[0034](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0035](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:70，干燥30h，產(chǎn)物水份含量為5%，制得海參養(yǎng)殖用麥飯石載體乳酸菌劑；
[0036]所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙60份；馬尾藻粉:30份；海蒿子30 ;大豆蛋白15份；魚粉:7份；螺旋藻4份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；復(fù)合多維2份；復(fù)合多礦2份。
[0037]實驗例3
[0038](I)菌種復(fù)蘇:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35 °C條件下培養(yǎng)12h。
[0039](2)增菌:再以3-5%的體積比接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)28h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0040]其中，所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0041]取蛋白胨IOg,牛肉膏IOg,酵母提取液5g,葡萄糖20g,朽1檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫_801mL，蒸餾水lOOOmL，115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用；
[0042](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以6000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以I: 50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0043](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0044](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:60，干燥36h，產(chǎn)物水份含量為5%，制得海參養(yǎng)殖用麥飯石載體乳酸菌劑；
[0045]所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:30份；海蒿子15 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；復(fù)合多維2份；復(fù)合多礦2份。
[0046]實驗例4[0047](I)菌種復(fù)蘇:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35 °C條件下培養(yǎng)12h。
[0048](2)增菌:再以5%的體積比接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0049]其中，所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0050]取蛋白胨IOg,牛肉膏IOg,酵母提取液5g,葡萄糖20g,朽1檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫_801mL，蒸餾水lOOOmL，115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用；
[0051](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以4000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心5min，以收集菌體；以I: 50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0052](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0053](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:50，干燥36h，產(chǎn)物水份含量為2%，制得海參養(yǎng)殖用麥飯石載體乳酸菌劑；
[0054]所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙70份；馬尾藻粉:25份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉2份；低聚殼聚糖:4份；復(fù)合多維4份；復(fù)合多礦4份。
[0055]與對照組海參相比，利用本發(fā)明實施例f 4所述方法配制的海參養(yǎng)殖用麥飯石載體乳酸菌劑喂養(yǎng)海參，體重均有所增加，且不易患??；本發(fā)明產(chǎn)品適用于海參養(yǎng)殖；處理過程簡單，耗時少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時間長，無污染。本發(fā)明對解決大批量海參的養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實意義。
[0056]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于:包括以下操作步驟: 乳酸菌混合物由以下方法制備: (1)增菌:從乳酸菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到乳酸菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，培養(yǎng)12h后，再以3-5%的體積比接種乳酸菌培養(yǎng)基，進(jìn)行發(fā)酵，3(T35°C條件下，培養(yǎng)24?48h，至菌懸液菌含量的終濃度為IO7?101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物； (2)洗滌:將步驟(I)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心2?5min，以收集菌體；以1:50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢鑖 5min后，收集混合液； (3)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻； (4)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營養(yǎng)飼料混合，混合物與營養(yǎng)飼料總重量比為1:2?10，干燥24?36h，產(chǎn)物水份含量為2?5%，制得乳酸菌混合物；其中: 所述的營養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50?70份；馬尾藻粉:25?40份；海蒿子15?35 ;大豆蛋白10?15份；魚粉:5?10份；螺旋藻2?5份；貽貝粉2?5份；低聚殼聚糖:1?4份；復(fù)合多維I?4份；復(fù)合多礦I?4份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海參養(yǎng)殖用乳酸菌營養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于，所述的乳酸菌培養(yǎng)基，其配制方法如下: 取蛋白胨IOg,牛肉膏IOg,酵母提取液5g,葡萄糖20g,朽1檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,磷酸氫二鉀2g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05，四水合硫酸錳0.25g，吐溫-80 Im L，蒸餾水IOOOmL, 115°C滅菌20min ;待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.5，冷卻備用。
【文檔編號】A23K1/14GK103815137SQ201210465638
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月16日
【發(fā)明者】謝克煥 申請人:大連德通生物技術(shù)開發(fā)有限公司