一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑及其用途。殺線蟲劑由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比組成，各組分以及含量用質(zhì)量百分含量計(jì)為瑞香狼毒提取物含量為2-15%，硅藻土含量為85-98%。本發(fā)明對(duì)當(dāng)歸麻口病有顯著的抑制作用，而且能明顯地提高當(dāng)歸的產(chǎn)量，提升當(dāng)歸的品相、品質(zhì)和藥用價(jià)值，并對(duì)環(huán)境友好，無殘留，可以在當(dāng)歸種植生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，具有良好的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。
【專利說明】一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種能有效防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑及其用途。具體的講，本發(fā)明涉及一種由瑞香狼毒為主要成分的植物源殺線蟲劑，屬于農(nóng)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]當(dāng)歸是我國(guó)著名的中藥材之一。在當(dāng)歸種植過程中，危害嚴(yán)重且最為常見的就是當(dāng)歸麻口病，主要表現(xiàn)為歸根根部表皮呈黃褐色縱裂、毛根增多并畸化，嚴(yán)重時(shí)皮層組織呈干爛、糠腐狀。先前有研究證實(shí)當(dāng)歸麻口病系線蟲危害所致，其病原線蟲為馬鈴薯腐爛莖線蟲U)i tylenchus ofes true tor)。然而截止到目前,沒有一種針對(duì)性強(qiáng)、作用效果明顯且對(duì)環(huán)境友好的防治當(dāng)歸麻口病的生物源農(nóng)藥制劑，嚴(yán)重影響著當(dāng)歸藥材的產(chǎn)量、品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益，也制約了當(dāng)歸種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
[0003]瑞香狼毒(stellera chamaejasme L.)為瑞香科狼毒屬多年生草本植物,廣泛分布于我國(guó)東北、華北、西南及西北等地區(qū)的草地及高山向陽(yáng)處，植物資源豐富，是我國(guó)北方草原上主要的有毒植物之一。研究結(jié)果表明，瑞香狼毒提取物對(duì)菜青蟲、菜粉蝶幼蟲、蚜蟲等昆蟲具有觸殺活性(ZL專利號(hào)1714641A)，還可用作除螨劑、除菌劑等，但是關(guān)于瑞香狼毒提取物用于對(duì)當(dāng)歸麻口病防治研究卻未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑的用途。
[0006]一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑，其特征在于殺線蟲劑由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比組成，各組分以及含量用質(zhì)量百分含量計(jì)為瑞香狼毒提取物含量為2-15%，硅藻土含量為85-98% ;依次按下列方法來制備:
A、將瑞香狼毒經(jīng)過晾干、粉碎、過篩，用乙醇浸泡反復(fù)提?。惶崛∫航?jīng)過過濾、減壓濃縮、干燥，制得瑞香狼毒提取物；
B、用水或乙醇水溶液將瑞香狼毒提取物助溶，再將硅藻土加入其中，通過攪拌、減壓干燥，利用粉碎機(jī)粉碎，過45目篩，制得顆粒均勻的殺線蟲劑。
[0007]在A步驟中，瑞香狼毒與乙醇的質(zhì)量比為1:6-20。
[0008]在A步驟中，反復(fù)提取的次數(shù)為2至5次，每次提取時(shí)間為20至30小時(shí)。
[0009]本發(fā)明的防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑呈顆粒狀，可以直接用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
[0010]我們對(duì)殺線蟲劑進(jìn)行了相關(guān)理化指標(biāo)的測(cè)定，方法如下:
按國(guó)標(biāo)GB/T 1605— 2001中5.3.3 “固體制劑采樣”方法進(jìn)行。用隨機(jī)數(shù)表法確定抽樣的包裝件，最終抽樣量不少于600 g。
[0011](1)松密度和堆密度檢測(cè)將已知質(zhì)量的樣品放入玻璃量筒中，測(cè)量其體積，計(jì)算松密度。然后將量筒垂直提高25mm，落在橡膠墊上，重復(fù)100次后再測(cè)定樣品的體積，計(jì)算堆密度。
[0012]按照以上方法測(cè)得，瑞香狼毒根提取物質(zhì)量百分含量為10%制劑(以下簡(jiǎn)稱10%制劑)的松密度為0.322 g/mL，堆密度為0.428 g/mL ;瑞香狼毒根提取物質(zhì)量百分含量為5%制劑 (以下簡(jiǎn)稱5%制齊Li)的松密度為0.300 g/mL,堆密度為0.401 g/mL ;瑞香狼毒根提取物質(zhì)量百分含量為2%制劑(以下簡(jiǎn)稱2%制劑)的松密度為0.293 g/mL,堆密度為0.389 g/
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[0013](2) pH 測(cè)定
pH值按照國(guó)標(biāo)GB/T 1601進(jìn)行。將I g樣品溶于100 mL蒸餾水中，攪拌I min，用標(biāo)定好的pH計(jì)測(cè)定。10%制劑pH值為6.04，5%制劑pH值為6.36，2%制劑pH值為6.48。
[0014](3)熱貯穩(wěn)定性試驗(yàn)
通過不加壓熱貯試驗(yàn)，使產(chǎn)品加速老化，預(yù)測(cè)常溫貯存產(chǎn)品性能的變化。取20g試樣放入廣口瓶中，不加任何壓力，加蓋置玻璃瓶于烘箱中，在(54±2) °C下貯存14天。取出玻璃瓶，放入干燥器中，冷卻至室溫，在24 h內(nèi)完成對(duì)產(chǎn)品有效成分的檢測(cè)。
[0015]利用高效液相色譜法對(duì)產(chǎn)品有效成分的變化進(jìn)行檢測(cè)。
[0016]所用儀器和設(shè)備:Agilent-1200高效液相色譜儀；C18反相色譜柱(4.6mmX 250mm，5 μ m, C 18 Phecda填料)；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。
[0017]色譜條件為0-5 min, 15% 甲醇；5-10 min, 15-30% 甲醇；10-20 min, 30-45% 甲醇；20-40 min,45-65%甲醇；40-45 min，65-100%甲醇。該方法進(jìn)行線性考察，對(duì)該檢測(cè)方法進(jìn)行線性考察(r>0.9993)，精密度(RSD=0.9%)、重復(fù)性(RSD=3.1%)、穩(wěn)定性(RSD=L 0%)和回收率試驗(yàn)(回收率>96.0%, RSD=L 3%)。該檢測(cè)方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。
[0018]試驗(yàn)樣品處理方法:取待測(cè)樣品I g，溶于30 mL甲醇中，超聲提取45 min。取1.25 mL于1.5 mL離心管中，離心5 min，取上清液微孔濾膜(0.45 μπι)濾過，為待測(cè)液。對(duì)10%制劑、5%制劑和2%制劑均進(jìn)行了試驗(yàn)，每個(gè)濃度抽取3個(gè)樣本。通過將254 nm下，各個(gè)濃度下經(jīng)過試驗(yàn)處理后樣品中的6個(gè)含量較大的峰面積(保留時(shí)間分別為5.7，15.5，38.5，43.5，46.8，49.7 min)與該濃度下未經(jīng)試驗(yàn)處理樣品進(jìn)行比較，結(jié)果表明峰面積變化率均在10%以內(nèi)。充分說明該制劑可以長(zhǎng)期保存，性質(zhì)穩(wěn)定，不易發(fā)生分解變化，便于貯存和運(yùn)輸。
[0019]本發(fā)明作為防治當(dāng)歸麻口病，其特征在于對(duì)當(dāng)歸麻口病有抑制作用，在當(dāng)歸移栽期及生長(zhǎng)期過程中，施用于當(dāng)歸種植周圍1-8 cm處土壤中，每株植物施藥量在2-6 g。
[0020]本發(fā)明對(duì)當(dāng)歸麻口病有顯著的抑制作用，而且能明顯地提高當(dāng)歸的產(chǎn)量，提升當(dāng)歸的品相、品質(zhì)和藥用價(jià)值，并對(duì)環(huán)境友好，無殘留，可以在當(dāng)歸種植生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，具有良好的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。
[0021]制劑中組分具有的功效描述如下:
制劑中所用的硅藻土具有孔隙度大、吸收性強(qiáng)、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、耐磨、耐熱等特點(diǎn)，容重輕，細(xì)度均勻，PH值中性無毒，混合均勻性好。利用硅藻土的豐富孔隙與強(qiáng)吸附性能用來作為農(nóng)藥載體，可以達(dá)到藥劑均勻吸附與稀釋分散的目的，使藥效延長(zhǎng)、毒性緩解、劑量容易掌控。此外硅藻土可成為高效肥料，促使農(nóng)作物生長(zhǎng)、改良土壤等方面作用。[0022]該植物源殺線蟲劑中所用組分均來源于自然界，純天然，易降解，低毒，無污染，對(duì)環(huán)境友好，能夠符合藥材種植的要求。
[0023]本發(fā)明提供的植物源殺線蟲劑，原料易得，成本低廉，在不加入任何化學(xué)合成的高毒、高殘留添加劑和輔料的情況下完成制備，工藝簡(jiǎn)單，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，該顆粒制劑均勻、穩(wěn)定，可直接施用。該產(chǎn)品高效、低毒、無殘留。
[0024]本發(fā)明中提供的植物源殺線蟲劑的制備方法中，利用乙醇制備瑞香狼毒提取物，因乙醇易于滲入植物組織，且溶解性較好，有效成分提取充分；制備過程中利用乙醇水溶液還具有價(jià)格低廉、易于回收、對(duì)人體毒性小等突出優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模制備。
[0025]除了對(duì)當(dāng)歸麻口病的防治效果，當(dāng)歸產(chǎn)量及外在品質(zhì)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，通過高效液相色譜的方法對(duì)當(dāng)歸中主要藥效成分進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并對(duì)當(dāng)歸樣品的制劑殘留情況進(jìn)行了測(cè)定，方法如下:
1.當(dāng)歸內(nèi)在藥效成分評(píng)價(jià)
利用高效液相色譜建立了當(dāng)歸有效成分指紋圖譜，對(duì)田間試驗(yàn)的各組當(dāng)歸內(nèi)阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該制劑能有效提高當(dāng)歸中阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量，提高了當(dāng)歸的藥用價(jià)值。
[0026]根據(jù)《中國(guó)藥典2010》規(guī)定，阿魏酸是考察當(dāng)歸內(nèi)在品質(zhì)的重要指標(biāo)。而當(dāng)歸中藁本內(nèi)酯的含量，也常被作為評(píng)價(jià)當(dāng)歸品質(zhì)的重要參數(shù)。通過采用指紋圖譜的方法，以阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量為參數(shù)，對(duì)施藥瑞香狼毒的當(dāng)歸試驗(yàn)組進(jìn)行了綜合品質(zhì)評(píng)價(jià)。
[0027]分析方法:從每試驗(yàn)組中，取大小適中的當(dāng)歸樣品陰干，粉碎，通過45目的篩子。取9克樣品粉末，加入50%(v/v)甲醇/水溶液180 mL，超聲提取45 min。將提取液離心15min,轉(zhuǎn)速6000 rpm,取上清液,再以0.45 μ m膜過濾后,備用。
`[0028]Agilent 1200系列高效液相色譜儀；C18反相色譜柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m,C18 Sinochrom填料)；流動(dòng)相A:0.5%(v/v)乙酸水溶液,流動(dòng)相B:甲醇；梯度條件:0 minB 30%, 20 min B 70%, 70 min B 100% ;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm，參比波長(zhǎng)為400 nm ;進(jìn)樣體積20 μ L ;流速0.6 mL/min ;柱溫30°C;聯(lián)苯為內(nèi)標(biāo)物。并對(duì)該方法進(jìn)行線性考察(r>0.9995)，精密度(RSD=2.1%)、重復(fù)性(RSD=2.3%)、穩(wěn)定性(RSD=0.6%)和回收率試驗(yàn)(回收率>98.5%，RSD=0.9%)。該方法穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好。每一組重復(fù)抽取3個(gè)樣本。
[0029]2.當(dāng)歸樣品中殘留檢測(cè)
2.1標(biāo)準(zhǔn)品的選擇
為了提高檢測(cè)靈敏度，選取制劑中最主要的3個(gè)成分的峰(狼毒色原酮、7-甲氧基狼毒素、狼毒素C保留時(shí)間分別為38.0、42.9和46.5 min的峰)為標(biāo)準(zhǔn)品。利用標(biāo)準(zhǔn)品單體繪制濃度曲線，確定最低檢測(cè)線為1.0X10_6。
[0030]2.2條件篩選和優(yōu)化
取待測(cè)當(dāng)歸陰干，粉碎，通過45目的篩子，備用。通過對(duì)當(dāng)歸樣品的提取溶劑、提取量液比、提取時(shí)間及色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)該方法進(jìn)行線性考察(r>0.9996)，精密度(RSD=L 1%)、重復(fù)性(RSD=2.1%)、穩(wěn)定性(RSD=0.4%)和回收率試驗(yàn)(回收率>98.0%，RSD=L 0%)。經(jīng)證實(shí)，該檢測(cè)方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可以用于制劑的殘留檢測(cè)。樣品處理方法為:取供試當(dāng)歸樣品約0.1 g，精密稱定，置于15 mL具塞試管中，精密加入10 mL甲醇，超聲45 min后,取1.25 mL于1.5 mL離心管中，離心5 min,取上清液微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，為待測(cè)液。
[0031]檢測(cè)條件為:0-10min，43%甲醇；10_20min，43% -58% 甲醇。
[0032]田間試驗(yàn)樣品測(cè)試結(jié)果表明，本發(fā)明所研制的殺線蟲劑能夠明顯提高當(dāng)歸中藥效成分阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量，并在當(dāng)歸樣品中無殘留，安全、有效、可靠。
[0033]本發(fā)明研制了一種新型有效、綠色環(huán)保的植物源殺線蟲劑，有效地降低當(dāng)歸麻口病的發(fā)病率和危害程度，提高當(dāng)歸的產(chǎn)量和品質(zhì)，同時(shí)將瑞香狼毒變害為寶，為我國(guó)西部草原毒草災(zāi)害防控及草場(chǎng)生態(tài)恢復(fù)開辟一條積極的開發(fā)利用途徑，對(duì)我國(guó)農(nóng)業(yè)線蟲病防治和畜牧業(yè)發(fā)展具有重要意義。
【具體實(shí)施方式】
[0034]實(shí)施例1
制備2%制劑，方法如下:
將瑞香狼毒根經(jīng)過晾干、粉碎、過篩，用10倍質(zhì)量的乙醇浸泡反復(fù)提取3次，每次24小時(shí)；提取液經(jīng)過過濾、減壓濃縮、干燥，制得瑞香狼毒提取物；
用水或乙醇水溶液將瑞香狼毒提取物助溶，再將硅藻土加入其中，通過攪拌、減壓干燥，利用粉碎機(jī)粉碎，過45目篩，制得顆粒均勻的殺線蟲劑。其中制劑中瑞香狼毒根提取物以及硅藻土配比組成，以質(zhì)量百分含量計(jì)為瑞香狼毒根提取物含量為2%，硅藻土含量為98%。
[0035]在當(dāng)歸主要種植區(qū)甘肅省定西市岷縣秦許鄉(xiāng)隨機(jī)選擇連續(xù)的6壟地進(jìn)行了當(dāng)歸種植田間試驗(yàn)。每壟地均長(zhǎng)8m，依次分別為對(duì)照組(CK)、2%制劑施藥組。在當(dāng)歸移栽期，將制劑3 g均勻撒在當(dāng)歸苗的根周圍3 cm處。
[0036]外觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):
麻口病分級(jí):病害面積小于1/3為一級(jí)；1/3和2/3之間為二級(jí)；大于2/3為三級(jí)。
[0037]品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn):大于100g為一級(jí)；50g到100g之間為二級(jí)；50g以下為三級(jí)。
[0038]葉斑病分級(jí):病害面積小于1/3為一級(jí)；1/3和2/3之間為二級(jí)；大于2/3為三級(jí)。
[0039]產(chǎn)量、當(dāng)歸麻口病防治結(jié)果及品質(zhì)評(píng)價(jià)結(jié)果見下表:
【權(quán)利要求】
1.一種防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑，其特征在于殺線蟲劑由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比組成，各組分以及含量用質(zhì)量百分含量計(jì)為瑞香狼毒提取物含量為2-15%，硅藻土含量為85-98% ;依次按下列方法來制備: A、將瑞香狼毒經(jīng)過晾干、粉碎、過篩，用乙醇浸泡反復(fù)提??；提取液經(jīng)過過濾、減壓濃縮、干燥，制得瑞香狼毒提取物； B、用水或乙醇水溶液將瑞香狼毒提取物助溶，再將硅藻土加入其中，通過攪拌、減壓干燥，利用粉碎機(jī)粉碎，過45目篩，制得顆粒均勻的殺線蟲劑。
2.在A步驟中，瑞香狼毒與乙醇的質(zhì)量比為1:6-20。
3.如權(quán)利要求1所述的防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑，其特征在于A步驟中，瑞香狼毒與乙醇的質(zhì)量比為1:6-20。
4.如權(quán)利要求1所述的防治當(dāng)歸麻口病的植物源殺線蟲劑，其特征在于A步驟中，反復(fù)提取的次數(shù)為2至5次，每次提取時(shí)間為20至30小時(shí)。
5.—種如權(quán)利要求1所述的殺線蟲劑作為防治當(dāng)歸麻口病，其特征在于對(duì)當(dāng)歸麻口病有抑制作用，在當(dāng)歸移栽期及生長(zhǎng)期過程中，施用于當(dāng)歸種植周圍1-8 cm處土壤中，每株植物施藥量在2-6 g。`
【文檔編號(hào)】A01N65/08GK103766410SQ201210413564
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2012年10月26日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月26日
【發(fā)明者】秦波, 劉權(quán), 燕志強(qiáng), 金輝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所