專利名稱：一種雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)生物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法。
背景技術(shù)：
鮭鱒魚是目前世界上主要養(yǎng)殖的魚類之一，自然條件下它們多生長于常年水溫不超過20°C、水質(zhì)為貧營養(yǎng)性、沒有化學(xué)污染和有機(jī)污染的低溫泉水或清澈的溪流中，因此又稱之為冷水性魚類。由于鮭科魚類對生存水質(zhì)有非常高的要求，略有污染即無法生存，所以鮭鱒魚體干凈，無任何污染，是名副其實(shí)的無公害綠色食品，吃起來放心。另外，鮭鱒魚是一種高蛋白、高脂肪、低膽固醇(膽固醇含量微乎其微)的魚類。和其它魚相比，鮭鱒魚含有一般魚類所缺乏的甘氨酸，維生素A、B的含量也高于其它魚類，微量元素鐵的含量更是 其它魚類所不及。鮭鱒魚肉質(zhì)鮮嫩，無邪味，無腥味，無需刮鱗，人每周吃兩次鮭鱒魚就可以預(yù)防血栓病的發(fā)生。意大利專家一項(xiàng)最新的研究結(jié)果表明，吃含有鮭鱒魚的保健品能夠大幅度減少心臟病患者突然死亡的風(fēng)險(xiǎn)。每天吃I克用鮭鱒魚魚油提煉的DHA，將會減少心臟病發(fā)作時(shí)突然死亡的風(fēng)險(xiǎn)。因此，鮭鱒魚是一種肉質(zhì)鮮美且具有保健價(jià)值的魚類。由于其自身的品質(zhì)和對生活環(huán)境的特殊要求，決定了它綠色、環(huán)保營養(yǎng)食品的性質(zhì)，因此頗受消費(fèi)者的青睞。鮭鱒魚是我國目前主要的冷水性養(yǎng)殖魚類，由于長期近親繁殖、缺乏系統(tǒng)選育等原因，導(dǎo)致養(yǎng)殖個(gè)體出現(xiàn)了性早熟、個(gè)體小型化、病害滋生等問題，不能滿足消費(fèi)者對大規(guī)格鮭鱒魚的需求，造成養(yǎng)殖效益下降。研究表明雜交能夠急劇的動搖遺傳的保守性，使雜種的遺傳性富于游動性，具有更大的可塑性，從而能迅速和顯著地提高雜種的生活力，進(jìn)而獲得雜種優(yōu)勢；雜種能豐富遺傳結(jié)構(gòu)，通過雜交將兩個(gè)以上遺傳基礎(chǔ)不同的品種或種以上個(gè)體的基因自由組合，出現(xiàn)新的遺傳類型，繼而人們可以選擇優(yōu)良的個(gè)體，培育成新品種。正常情況下，雌魚的性成熟比雄魚晚I年，由于性成熟又引起生產(chǎn)停滯、肉質(zhì)下降，為了避免因性成熟早而影響魚的產(chǎn)量和質(zhì)量，進(jìn)行雜交全雌性養(yǎng)殖是一個(gè)有效提高養(yǎng)殖效益的途徑。國內(nèi)對鮭鱒魚雜交苗種制備的研究主要集中在虹鱒與溪紅點(diǎn)鮭的雜交苗種制備、虹鱒與山女鱒的雜交苗種制備、虹鱒與金鱒的雜交苗種制備等，對鮭鱒魚全雌苗種制備的研究主要集中在虹鱒純種全雌苗種的制備方面，其方法為用人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育技術(shù)獲得全雌二倍體苗種，再通過投喂雄性激素誘導(dǎo)全雌二倍體苗種成為偽雄魚，培育至性成熟后利用原雌魚與假雄魚進(jìn)行人工繁殖。該方法操作相對繁瑣，需要先獲得全雌二倍體苗種，再對苗種進(jìn)行雄激素誘導(dǎo)，培育至性成熟，待偽雄魚性腺發(fā)育成熟后再進(jìn)行后續(xù)受精工作，整個(gè)過程耗時(shí)將近3年，因此該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且由于是純種繁育，故培育的種苗缺少雜交優(yōu)勢。金鱒(Oncorhynchus mykiss)體呈金黃色,是虹鱒的一個(gè)體色分離種，為常見的冷水性養(yǎng)殖魚類。目前對雜交全雌金鱒魚苗種的制備技術(shù)的研究尚未見有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雜交全雌金鱒魚苗種培育方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法，包括以下步驟I)用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚；2)使硬頭鱒親魚卵子與金鱒偽雄魚精子受精；3)受精卵孵化。其中，步驟I)所述性成熟期的金鱒親魚為3齡以上，體重彡2kg。
其中，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚的方法為，將含雄性激素40-100mg/kg的魚飼料投喂金鱒親魚70-100d ;之后，改用不含雄性激素的魚飼料投喂4-6個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚。進(jìn)一步地，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚的方法為，將含雄性激素40-50mg/kg的魚飼料投喂金鱒親魚85-90d ;之后，改用不含雄性激素的魚飼料投喂5個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚。優(yōu)選地，上述將含雄性激素40-50mg/kg的魚飼料投喂金鱒親魚的飼喂時(shí)間為90d。其中，步驟I)的雄性激素為17 a甲基睪丸酮(17 a-methyltestosterone)。進(jìn)一步地，所述17 a甲基睪丸酮添加入飼料前，用濃度> 60%的酒精進(jìn)行溶解，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :1 4ml。將溶解后的17 a甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后均勻噴灑于親魚飼料上，攪動，使混合均勻，備用。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法中，步驟2)所述金鱒偽雄魚精子是通過以下方法獲得的機(jī)械破碎偽雄魚精巢，獲得精液后，將精子激活液與偽雄魚精液按照體積比20-30 1混合進(jìn)行激活，所述精子激活液IL配方為NaCl 7. 60g, KCl 2. 98g，CaCl2 2H20 0. 37g, MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g，加蒸餾水至 1000ml，調(diào)節(jié) pH 值為8. 0-10. 0 ;激活條件為2-6°C激活3-4h。優(yōu)選地，將精子激活液與偽雄魚精液按照體積比25 1混合進(jìn)行激活，所述精子激活液PH值為9. 0 ;激活條件為4°C激活3h。干法受精法，取硬頭鱒雌魚卵與激活后的金鱒偽雄魚精液進(jìn)行受精。本發(fā)明方法中，步驟3)所述孵化條件為受精卵在8_10°C養(yǎng)殖用水中孵化45-65d。本發(fā)明方法中，所述金鱒為紅眼金鱒。本發(fā)明提供了上述方法在雜交全雌金鱒魚苗種育種工作中的應(yīng)用。本發(fā)明使用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚；使硬頭鱒親魚卵子與金鱒偽雄魚精子受精，孵化，獲得雜交全雌金鱒魚苗種。實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明方法制備的雜交全雌金鱒魚孵化期間受精卵發(fā)眼率為81%以上，苗種孵化率達(dá)到92%以上，得到的魚苗經(jīng)檢測，雌性率為100%，苗種金鱒率(體色為金黃色)達(dá)到90%以上，苗種培養(yǎng)30天增重率為122%以上，成活率達(dá)到98%以上。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚苗種培育方法與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種相比，既保持金鱒率不變，又獲得了具備雜交和全雌雙重優(yōu)勢的金鱒苗種，且制苗時(shí)間短，僅9個(gè)月左右，大大縮短了養(yǎng)殖周期，降低了養(yǎng)殖成本，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和市場價(jià)值。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。本發(fā)明的硬頭鱒親魚和紅眼金鱒親魚均為北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所由北歐瑪生物科技有限公司購買的發(fā)眼卵培育而成。17a甲基睪丸酮購自德國SIGMA公司，純度98%以上。本發(fā)明使用的精子激活液IL 配方為 NaCl 7. 60g，KCl 2. 98g，CaCl2 2H20 0. 37g，MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g，加蒸餾水至 1000ml。實(shí)施例I雜交全雌苗種培育方法(I)
I、用純度為65%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :2ml，溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后，用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為60mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)100d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂4個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為95%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為8. 5的精子激活液稀釋(V/V=l: 20)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入有魚卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比150:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)3次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)45天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到82%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到93%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例2雜交全雌苗種培育方法(2)I、用純度為70%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :1ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后，用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為20mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. Ikg,性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)120d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為74%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為8. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 20)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比140:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4 次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到85%，苗種孵化率達(dá)到94%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到94%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例3雜交全雌苗種培育方法(3)I、用純度為60%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img 2ml溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為40mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. 15kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)93d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為99%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3. 5h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比145:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入9°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)53天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到90%，苗種孵化率達(dá)到96%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到98%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例4雜交全雌苗種培育方法(4)I、用純度為70%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :3ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為50mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。 2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. Ikg,性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)90d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為100%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3. 5h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比150:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入10°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到88%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到97%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例5雜交全雌苗種培育方法(5)I、用純度為75%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :4ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為100mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)70d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂6個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為85%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為10. 0的精子激活液稀釋(v/v=l 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為4h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入有魚卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比130:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)5次，清洗。
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3、將受精卵清洗干凈后即可放入9°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)52天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到81%，苗種孵化率達(dá)到92%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到90%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例6雜交全雌苗種培育方法(6)I、用純度為65%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :2ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為80mg/kg。反復(fù)攪動，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. 2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)80d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚飼料繼續(xù)飼喂6個(gè)月。在經(jīng)過17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長于下頜，下頜前端向上突起的投喂過17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚即為假性雄魚(偽雄魚)。檢測發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚，偽雄魚的出現(xiàn)率為86%。取出偽雄魚的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 30)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為4h。魚卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚采用擠壓法將魚卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚精液倒入有魚卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比130:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)3次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚苗。孵化出的魚苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。
采用該方法處理得到的雜交全雌魚受精卵發(fā)眼率達(dá)到85%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到93%。本發(fā)明方法說明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢。實(shí)施例7本發(fā)明培育的雜交全雌苗種生長速度和成活率實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用魚取實(shí)施例1-6培育得到的雜交全雌金鱒苗種，每個(gè)實(shí)施例取6000尾。純種硬頭鱒和純種金鱒各6000尾。平均規(guī)格為I. 5 I. 8g/尾魚苗。2、方法在水溫8°C條件下，將上述魚苗按品種不同和制備批次不同，分別放養(yǎng)在8個(gè)養(yǎng)殖池中，放養(yǎng)密度為3000尾/m2。投喂北京漢業(yè)科技有限公司的苗種料，每天投喂5次，投餌量為5%，水交換量為I次/2h。觀察并記錄30天各魚苗的體重和增長情況。結(jié)果見表I。
表I不同魚苗飼喂30天增長速度比較(X土SD)
權(quán)利要求
1.一種雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法，其特征在于，包括以下步驟 1)用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚； 2)使硬頭鱒雌魚親魚卵子與金鱒偽雄魚精子受精； 3)受精卵孵化。
2.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述性成熟期的金鱒親魚為3齡以上，體重彡2kg。
3.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚的方法為，將含雄性激素40-100mg/kg的魚飼料投喂金鱒親魚70-100d ;之后，改用不含雄性激素的魚飼料投喂4-6個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚。
4.如權(quán)利要求3所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚的方法為，將含雄性激素40-50mg/kg的魚飼料投喂金鱒親魚85-95d ;之后，改用不含雄性激素的魚飼料投喂5個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚。
5.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)的雄性激素為17α甲基睪丸酮。
6.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟2)所述金鱒偽雄魚精子是通過以下方法獲得的機(jī)械破碎偽雄魚精巢，獲得精液后，將精子激活液與偽雄魚精液按照體積比20-30 :1 進(jìn)行激活，所述精子激活液 IL 配方為 NaCl 7. 60g，KCl 2. 98g，CaCl2 ·2Η20 O. 37g，MgCl2 · 6H20 0. 31g，NaHCO3 0. 21g 加蒸餾水至 1000ml，調(diào)節(jié) pH 值為 8. 0-10. 0 ;激活條件為2_6°C 激活 3-4h。
7.如權(quán)利要求6所述的培育方法，其特征在于，將精子激活液與偽雄魚精液按照體積比25 1進(jìn)行激活，所述精子激活液pH值為9. O ;激活條件為4°C激活3h。
8.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟3)所述孵化條件為受精卵在8-10°C養(yǎng)殖用水中孵化45-65d。
9.如權(quán)利要求1-8任一所述的培育方法，其特征在于，所述金鱒為紅眼金鱒。
10.權(quán)利要求1-9任一所述方法在雜交全雌金鱒魚苗種育種工作中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雜交全雌金鱒魚苗種的培育方法。本發(fā)明使用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的金鱒親魚獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚；使硬頭鱒親魚卵子與金鱒偽雄魚精子受精，孵化，獲得雜交全雌金鱒魚苗種。孵化期間受精卵發(fā)眼率為81%以上，苗種孵化率達(dá)到92%以上，得到的魚苗經(jīng)檢測，雌性率為100%，苗種金鱒率(體色為金黃色)達(dá)到90%以上，苗種培養(yǎng)30天增重率為122%以上，成活率達(dá)到98%以上。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚苗種培育方法與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種相比，既保持金鱒率不變，又獲得了具備雜交和全雌雙重優(yōu)勢的金鱒苗種，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和市場價(jià)值。
文檔編號A01K61/00GK102812913SQ20121032075
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月31日
發(fā)明者徐紹剛 申請人:北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所