殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法
【專利摘要】提供能夠提高殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法。使包含過(guò)氧化氫、以及含有黃芩或綠茶的過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的殺菌劑接觸口腔內(nèi)的牙齒、假牙等殺菌對(duì)象。然后，利用包含半導(dǎo)體激光器的發(fā)光單元，對(duì)殺菌對(duì)象照射具有350nm～500nm的波長(zhǎng)的光。從而，過(guò)氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進(jìn)行殺菌。
【專利說(shuō)明】殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]作為現(xiàn)有的殺菌方法，有使過(guò)氧化氫等氧化劑接觸殺菌對(duì)象、對(duì)殺菌對(duì)象照射400nm~100nm的波長(zhǎng)的光的方法(參照例如專利文獻(xiàn)I)。根據(jù)該方法，對(duì)過(guò)氧化氫照射400nm~100nm的波長(zhǎng)的光、使其產(chǎn)生輕自由基,能夠利用該輕自由基進(jìn)行殺菌。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0004]專利文獻(xiàn)
[0005]專利文獻(xiàn)1:日本特開(kāi)2008-284312號(hào)公報(bào)


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題
[0007]專利文獻(xiàn)I所述的方法存在如下課題:在存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶作用下，部分過(guò)氧化氫發(fā)生分解，因此對(duì)這些細(xì)胞、微生物的殺菌效果下降。
[0008]本發(fā)明正是著眼于這樣的課題而做出的，目的在于提供能夠提高殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法。
[0009]解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)手段
[0010]本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶，使生成具有高抗菌性的羥自由基的基質(zhì)即過(guò)氧化氫分解。本發(fā)明人等使用為過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性的細(xì)菌及真菌的金黃色葡萄球菌(Streptococcus aureus)ATCC12693及白色念珠菌(Candidaalbicans) JCM9061，對(duì)于它們與羥自由基的反應(yīng)測(cè)定DMPO-OH的變化并通過(guò)雙倒數(shù)作圖(Lineweaver-Burk Plot)進(jìn)行解析。將其結(jié)果不于圖1。
[0011]如圖1所示，發(fā)現(xiàn):菌的細(xì)胞數(shù)不同的所有直線在1/DMP0濃度的負(fù)數(shù)側(cè)相交，不僅金黃色葡萄球菌及白色念珠菌與羥自由基反應(yīng)，而且這些微生物所具有的過(guò)氧化氫酶也與過(guò)氧化氫反應(yīng)。予以說(shuō)明，若金黃色葡萄球菌及白色念珠菌僅與羥自由基反應(yīng)則菌的細(xì)胞數(shù)不同的所有直線在1/DMP0-OH濃度軸上相交，若過(guò)氧化氫酶僅與過(guò)氧化氫反應(yīng)則菌的細(xì)胞數(shù)不同的所有直線應(yīng)當(dāng)平行。
[0012]需要說(shuō)明的是，圖1所示的實(shí)驗(yàn)如下實(shí)施，即，在對(duì)金黃色葡萄球菌及白色念珠菌的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行各種改變的200 μ L(微升)菌液的各試樣中，加入25~300mM的自由基捕捉劑:DMP0 (5, 5-Dimethyl-pyrrolin-N-oxide, 5，5- 二甲基-吡咯啉-N-氧化物)50 μ L,再加入0.5Μ的過(guò)氧化氫450 μ L，然后照射波長(zhǎng)400±20nm的LED光I分鐘，I分鐘后進(jìn)行ESR (電子自旋共振)測(cè)定。
[0013]本發(fā)明人等由圖1所示的結(jié)果，獲得了通過(guò)加入過(guò)氧化氫酶活性抑制劑來(lái)降低細(xì)胞、微生物的過(guò)氧化氫酶活性，從而能夠進(jìn)行有效的羥自由基殺菌的見(jiàn)解，直至完成本發(fā)明。
[0014]即，本發(fā)明的殺菌劑的特征為，包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑。
[0015]本發(fā)明的口腔用殺菌劑的特征為，包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑。
[0016]本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑按照下述方式使用。首先，將本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑涂布或噴霧到殺菌對(duì)象上使其接觸殺菌對(duì)象。此時(shí)，由于包含過(guò)氧化氫酶活性抑制劑，因此即使殺菌對(duì)象中存在過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性細(xì)菌和真菌等細(xì)胞、微生物，也能夠降低它們的過(guò)氧化氫酶活性，能夠防止過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)。
[0017]然后，對(duì)殺菌對(duì)象照射規(guī)定波長(zhǎng)的光。從而，過(guò)氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進(jìn)行殺菌。此時(shí)，能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物的過(guò)氧化氫酶活性，因此能夠防止通過(guò)過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的羥自由基減少。
[0018]由此，本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑，能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑防止產(chǎn)生羥自由基的過(guò)氧化氫與存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過(guò)氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實(shí)現(xiàn)的殺菌效果。
[0019]本發(fā)明的殺菌方法的特征為，使過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對(duì)象，對(duì)前述殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光。
[0020]本發(fā)明的殺菌方法，在使過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對(duì)象時(shí)，SP使殺菌對(duì)象中存在過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性細(xì)菌、真菌等細(xì)胞、微生物，也能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑降低它們的過(guò)氧化氫酶活性，能夠防止過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)。
[0021] 此外，通過(guò)對(duì)殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光,過(guò)氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進(jìn)行殺菌。此時(shí)，由于能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物的過(guò)氧化氫酶活性，因此能夠防止過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的輕自由基的減少。
[0022]從而，根據(jù)本發(fā)明的殺菌方法，能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過(guò)氧化氫與存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過(guò)氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實(shí)現(xiàn)的殺菌效果。
[0023]本發(fā)明的殺菌方法中，使過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對(duì)象的方法可以為涂布或噴霧本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑的方法、將殺菌對(duì)象浸潰在本發(fā)明的殺菌劑的溶液中的方法等任意方法。
[0024]本發(fā)明的殺菌裝置的特征為，具有過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫酶活性抑制劑和發(fā)光單元，所述發(fā)光單元設(shè)置為能夠?qū)佑|了前述過(guò)氧化氫和前述過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光。
[0025]本發(fā)明的殺菌裝置能夠適當(dāng)實(shí)施本發(fā)明的殺菌方法。根據(jù)本發(fā)明的殺菌裝置，能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過(guò)氧化氫與存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過(guò)氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實(shí)現(xiàn)的殺菌效果。
[0026]本發(fā)明的殺菌裝置中，過(guò)氧化氫及過(guò)氧化氫酶活性抑制劑也可以由本發(fā)明的殺菌劑或口腔用殺菌劑構(gòu)成。此外，本發(fā)明的殺菌裝置中，殺菌對(duì)象包括口腔內(nèi)的牙齒、假牙等，過(guò)氧化氫酶活性抑制劑也可以由包含過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的牙膏、漱口水等構(gòu)成。此時(shí)，在用該牙膏刷牙等、或用漱口水漱口之后，使殺菌對(duì)象接觸過(guò)氧化氫、利用發(fā)光單元照射光，從而使用。
[0027]本發(fā)明的殺菌方法及殺菌裝置中，照射光的發(fā)光單元只要能夠照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光即可，可以是任意發(fā)光單元，例如發(fā)熱燈、熒光燈、鹵素?zé)?、氙燈、LED (發(fā)光二極管)、半導(dǎo)體激光器等。所照射的光只要具有350nm~500nm的波長(zhǎng)即可，既可以為單一波長(zhǎng)，也可以包含多種波長(zhǎng)，還可以由規(guī)定帶寬的波長(zhǎng)構(gòu)成。
[0028]本發(fā)明的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法及殺菌裝置中，過(guò)氧化氫酶活性抑制劑優(yōu)選包含例如黃芩、綠茶、茴香、枇杷、甘草、蘆薈、鼠尾草、金縷梅、洋甘菊、迷迭香、蜜蜂花或桃。特別優(yōu)選包含過(guò)氧化氫酶活性抑制效果高的黃芩或綠茶。
[0029]本發(fā)明的殺菌劑的評(píng)價(jià)方法的特征為，對(duì)采集自接觸了本發(fā)明的殺菌劑后的殺菌對(duì)象的試樣和4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，進(jìn)行電子自旋共振(ESR)測(cè)定，基于所獲得的電子自旋共振(ESR)譜的線寬，測(cè)定前述試樣中包含的細(xì)胞或微生物的過(guò)氧化氫酶活性，對(duì)前述殺菌劑的殺菌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0030]由于過(guò)氧化氫酶催化過(guò)氧化氫分解為水和氧的反應(yīng)，因此本發(fā)明的殺菌劑的評(píng)價(jià)方法中，利用ESR測(cè)氧法測(cè)定該反應(yīng)所產(chǎn)生的氧，從而測(cè)定過(guò)氧化氫酶活性。此外，由于TEMPOL的ESR譜的線寬和過(guò)氧化氫酶濃度之間可以視為正相關(guān)關(guān)系，因此可以基于ESR譜的線寬測(cè)定試樣中包含的細(xì)胞或微生物的過(guò)氧化氫酶活性，對(duì)殺菌劑的殺菌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。需要說(shuō)明的是，殺菌劑可以為本發(fā)明的口腔用殺菌劑。
[0031]發(fā)明效果
[0032]根據(jù)本發(fā)明，可以提供能夠提聞殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為示出通過(guò)過(guò)氧化氫的光分解而生成的羥自由基和(a)金黃色葡萄球菌的反應(yīng)動(dòng)態(tài)解析、與(b)白色念珠菌的反應(yīng)動(dòng)態(tài)解析的圖。
[0034]圖2為示出基于本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑評(píng)價(jià)方法的、過(guò)氧化氫酶濃度和TEMPOL的ESR譜的線寬的關(guān)系的圖。
[0035]圖3為示出研究作為本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑的過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的用途的各種生藥的、過(guò)氧化氫酶活性的抑制作用的圖。
[0036]圖4為示出本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑的過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的、對(duì)金黃色葡萄球菌的基于黃芩的殺菌效果的增強(qiáng)效果的圖(圖中的H表示過(guò)氧化氫、L表示激光照射、O表示黃岑(lmg/mL)、+表示有、-表示無(wú))。
[0037]圖5為表示本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑的過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的、對(duì)金黃色葡萄球菌的基于黃芩濃度的殺菌效果的圖。
[0038]圖6為表示本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑的過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的對(duì)(a)金黃色葡萄球菌、(b)白色念珠菌的基于黃芩濃度的殺菌效果的圖，對(duì)(C)金黃色葡萄球菌、(d)白色念珠菌的基于綠茶濃度的殺菌效果的圖(圖中的H表示過(guò)氧化氫、L表示激光照射、+表不有、-表不無(wú))。

【具體實(shí)施方式】
[0039]下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評(píng)價(jià)方法進(jìn)行說(shuō)明。
[0040]本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌裝置具有本發(fā)明的殺菌劑和發(fā)光單元。
[0041]殺菌劑包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑。過(guò)氧化氫酶活性抑制劑包含黃芩或綠茶。
[0042]發(fā)光單元包含能夠照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器。
[0043]本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌方法優(yōu)選利用本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌裝置來(lái)實(shí)施。首先，使包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的殺菌劑接觸殺菌對(duì)象。此時(shí)，即使殺菌對(duì)象中存在過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性細(xì)菌、真菌等細(xì)胞、微生物，也能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑降低它們的過(guò)氧化氫酶活性，能夠防止過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)。
[0044]然后,利用發(fā)光單元對(duì)殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光。從而,過(guò)氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進(jìn)行殺菌。此時(shí)，由于能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物的過(guò)氧化氫酶活性，因此能夠防止過(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的羥自由基的減少。
[0045]從而，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式的殺菌劑、殺菌方法及殺菌裝置，能夠通過(guò)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過(guò)氧化氫與存在于殺菌對(duì)象中的細(xì)胞、微生物所具有的過(guò)氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過(guò)氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實(shí)現(xiàn)的殺菌效果。
[0046]實(shí)施例1
[0047]進(jìn)行求出過(guò)氧化氫酶活性和TEMPOL的ESR譜的線寬之間的關(guān)系的試驗(yàn)。將100 μ L的過(guò)氧化氫酶(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制)、25 μ L的TEMPOL (西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich Corporat1n)制)和125 μ L的過(guò)氧化氫(三德化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)分別用超純水稀釋并按照達(dá)到表1所示的最終濃度的方式混合，制備過(guò)氧化氫酶的最終濃度為0、0.25,0.5、1.0,2.0U/mL的5種混合液。對(duì)制備的混合液進(jìn)行ESR測(cè)定，將其測(cè)定結(jié)果示于圖2。
[0048][表 I]
份量敁終濃設(shè)
過(guò)氧化氫酶 100 μ!_ O, 0.25, 0.5, 1.0, and 2.0 U/m L
[0049]
TEMPOL25 μΙ_200 μΜ
過(guò)氧化氫125 μΙ_250 mM
[0050]如圖2所示，確認(rèn)TEMPOL的ESR譜的線寬和過(guò)氧化氫酶濃度之間可視為高的正相關(guān)關(guān)系。可以由該結(jié)果基于ESR譜的線寬測(cè)定被測(cè)試樣的過(guò)氧化氫酶活性。
[0051]實(shí)施例2
[0052]使用圖2的結(jié)果，對(duì)過(guò)氧化氫酶活性抑制劑帶來(lái)的過(guò)氧化氫酶活性的抑制作用進(jìn)行測(cè)定。將50 μ L的過(guò)氧化氫酶、25 μ L的TEMPOL、認(rèn)為具有過(guò)氧化氫酶活性的抑制作用的50 μ L生藥和125 μ L的過(guò)氧化氫分別用超純水(Mill1-Q水)稀釋并按照達(dá)到表2所示的最終濃度的方式混合，制備混合液。作為生藥，使用黃岑、綠茶、蜜蜂花(lemon balm)。此外，生藥使用的是為了去除不溶于水的物質(zhì)而用0.22 μ m的過(guò)濾器過(guò)濾后的物質(zhì)。此外，為了進(jìn)行比較，還制備了不加生藥的混合液試樣(Mill1-Q水:MQ)。
[0053][表2]

【權(quán)利要求】
1.一種殺菌劑，其特征在于，包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌劑，其特征在于，前述過(guò)氧化氫酶活性抑制劑包含黃芩或綠茶。
3.—種口腔用殺菌劑，其特征在于，包含過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑。
4.一種殺菌方法，其特征在于，使過(guò)氧化氫和過(guò)氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對(duì)象，對(duì)前述殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光。
5.一種殺菌裝置，其特征在于，具有:過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫酶活性抑制劑和發(fā)光單元，所述發(fā)光單元設(shè)置為能夠?qū)佑|了前述過(guò)氧化氫和前述過(guò)氧化氫酶活性抑制劑的殺菌對(duì)象照射具有350nm~500nm的波長(zhǎng)的光。
6.一種殺菌劑的評(píng)價(jià)方法，其特征在于， 對(duì)采集自接觸了權(quán)利要求1或2所述的殺菌劑的殺菌對(duì)象的試樣和4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，進(jìn)行電子自旋共振(ESR)測(cè)定，基于所獲得的電子自旋共振(ESR)譜的線寬，測(cè)定前述試樣中包含的細(xì)胞或微生物的過(guò)氧化氫酶活性，對(duì) 前述殺菌劑的殺菌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
【文檔編號(hào)】A01N25/22GK104053363SQ201180075289
【公開(kāi)日】2014年9月17日 申請(qǐng)日期:2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月1日
【發(fā)明者】菅野太郎, 中村圭祐, 豬飼纮代, 河野雅弘, 庭野吉己 申請(qǐng)人:株式會(huì)社Az