專利名稱：利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物種苗繁殖技術(shù)，具體地說是利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
彩葉丁香(Syringa vulgaris L.)葉片帶有灑金斑點，在陽光照射下非常醒目。 它根系發(fā)達、植株長勢旺盛，萌蘗力和抗旱能力較強，并且冬天落葉遲，是不可多得的城市綠化美化樹種。但作為近幾年從歐洲引進的一個新品種，可供扦插、嫁接的數(shù)目少，既限制了其繁殖速度，也不利于其優(yōu)良性狀的保持，因而無法滿足日益增加的社會需求。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)彩葉丁香種苗是解決這一生產(chǎn)問題的有效途徑。然而同其它木本植物一樣，玻璃化是其組織培養(yǎng)需要解決的難題之一，而且對于彩葉丁香這類觀賞彩葉類樹種，由于其有不少遺傳學上的嵌合體，如一些鑲嵌色彩的種子，帶金邊、銀邊、花葉植物，在培養(yǎng)過程中，嵌合體各組分可能分離，使雜色體的植物將顯示出改變的形態(tài)或完全喪失雜色形狀，從而更加大了培養(yǎng)難度。只有通過改良培養(yǎng)條件，達到兼顧提高繁殖量、保持遺傳性狀和減少玻璃化的目的，才能通過批量組培實現(xiàn)彩葉丁香的快速繁殖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法，既可快速繁殖，又能保證其遺傳學特性、減少玻璃化發(fā)生率，以滿足城市綠化美化的需求。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法包括以下步驟(1)外植體的采集與消毒將除掉葉片的彩葉丁香的莖段依次進行清洗、紫外照射、酒精消毒，再放入0. 1% HgC12溶液消毒滅菌5min，所述消毒滅菌液中加入占滅菌液重量百分比0. 5%的吐溫-80，最后用無菌水沖洗，再切成帶2-3個腋芽的1 1. 5cm長的莖段；(2)將前步所得莖段接種到外植體誘導培養(yǎng)基MS+6-BA0. lmg/l+NAAO. 01mg/l, 彩葉丁香芽苗誘導30天至小芽長4-5cm長；(3)將前步所得小苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)20天，在組培的前10代，所述繼代培養(yǎng)基為MS+6-BAl. 0mg/l+NAA0. Img/1+Vc0. 5g/l ；從第11代起所述繼代培養(yǎng)基為:l/2MS+6-BA0. 5mg/l+NAA0. Img/1+Vc0. 5g/l ；從第 17 代起所述繼代培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5mg/l+NAA0. Img/1+Vc0. 5g/l+硫酸慶大霉素 4 萬單位 /1 ；(4)取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中1/2MS+NAA0. lmg/1，培養(yǎng)40天；(5)將培養(yǎng)瓶置于溫室中自然光煉苗2-3天后，將生根幼植株取出并在0. 的高錳酸鉀溶液中進行漂洗；(6)漂洗后的生根幼株種植于栽培基質(zhì)并放于大棚內(nèi)培養(yǎng)，單株套透明塑料袋，保持90%的相對濕度，光照強度為2000-40001UX ；—周后棄袋；所述栽培基質(zhì)為消毒滅菌后的草炭；當小苗長至20-30cm時移栽至大田苗圃進行栽植。本發(fā)明第(1)步中，在對外植體的滅菌中，在滅菌劑中加入吐溫-80可以降低植物材料表面的張力，達到更好的消毒效果，在0. 1% HgC12溶液中加入0. 的吐溫-80，污染率隨著吐溫-80的增加逐漸降低，而枯死率則隨吐溫-80的增加逐漸增高，即加入吐溫會對材料的傷害也在增加，所以應注意用量和滅菌時間。綜合分析，加入滅菌液的0.5%，即在 IOOml滅菌液中加入15滴吐溫-80，使藥劑更易于展布，更容易浸入到滅菌的材料表面。污染率隨滅菌時間的延長逐漸降低，而枯死率則隨滅菌時間的延長逐漸增高。綜合分析以上結(jié)果表明，用0. 1 % HgCl2，滅菌5min成活率可達80%，效果最好，時間太長，材料容易死亡， 時間太短滅菌不徹底，易造成污染。本發(fā)明第(2)步中，彩葉丁香腋芽在第10天就開始萌動，15天伸長并長出嫩葉，30 天莖段芽點誘導成高4-5cm，具有8余片葉子的芽苗。本發(fā)明第( 步中，按組培代數(shù)不同，選擇不同的培養(yǎng)基，以兼顧控制褐化、不影響增殖率和減少玻璃化三方面，從而達到效益最大化。本發(fā)明第(4)步中，取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，大約12d左右開始生根，培養(yǎng)40天后，根系主根粗壯，側(cè)根發(fā)達，苗壯，葉綠，長勢好，試管苗小苗長至5cm以上時，幾乎占滿整個接種瓶，這時即可進行移栽。本發(fā)明第( 步中，試管苗移栽前，煉苗2-3天，此時可適當加大光照，以提高小苗的木質(zhì)化程度。用0.1 %的高錳酸鉀溶液中進行漂洗，不僅可以洗去組培苗上的培養(yǎng)基而且也對小苗進行了殺菌處理并且沒有藥害的產(chǎn)生。本發(fā)明第(6)步中，棄袋后光照強度要逐漸加強，否則小苗易徒長，彩葉特性就會減弱。每周澆一次肥水，用通用肥N-P-K = 20-10-20，每天往小苗葉片上噴2次霧，以增加小苗的相對濕度。當小苗長至20-30cm時就可移栽至大田苗圃進行栽植。本發(fā)明利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖，通過消毒工藝的選擇，解決了控制褐化與提高增殖率之間的矛盾問題；通過對不同代數(shù)的繼代培養(yǎng)，選擇不同的培養(yǎng)基，有針對性地解決了快速繁殖與玻璃化率升高之間的矛盾問題，兼顧提高繁殖量、保持遺傳性狀和減少玻璃化的目的，通過批量組培實現(xiàn)彩葉丁香的快速繁殖，從而滿足城市綠化美化對彩葉丁香苗的需求。
具體實施例方式供試材料為由荷蘭引種栽培在我園內(nèi)的彩葉丁香(小步圓舞曲)，取材時間為選在5月-8月，植株生長旺盛時期，供試材料以當年生嫩枝作為外植體進行培養(yǎng)，要求新生枝生長健壯，葉片具有母本的優(yōu)良性狀，并且有飽滿而未萌發(fā)的腋芽。組織培養(yǎng)材料一般取自田間正常生長的植株，但生長在自然環(huán)境下的植物，不僅生長條件不清潔衛(wèi)生，而且容易受到病蟲害的侵襲，尤其是多年生的木本植物，組織表面和內(nèi)部都可能感染微生物。為了獲得健康、無菌的植物材料，有時需要在材料采集之前進行預處理，將植株栽培在特殊管理的大田和溫室中，或進行室內(nèi)盆栽。然后從溫室栽培的植株中取材。所謂特殊管理是生長環(huán)境要通風透氣，濕度要盡可能低，光線充足，遠離骯臟、污濁的環(huán)境，土壤要用藥物和蒸汽熏蒸消毒，或采用蛭石、珍珠巖等特殊基質(zhì)進行無土栽培。澆水不能從植株上面澆施，只能澆濕土壤。施肥要盡量用無機肥料，保持土壤清潔，降低病菌存活的幾率。同時要用防蟲網(wǎng)等設(shè)施，或定期噴施農(nóng)藥，確保植株不受病蟲害侵襲。在人工控制的環(huán)境條件下，促使母株的生長代謝活躍，外植體的生理狀態(tài)可能得到改善，有利于外植體的培養(yǎng)。同時方便取材，容易滅菌，降低污染率，提高成活率。培養(yǎng)條件所有培養(yǎng)基均添加3%的白砂糖和0. 5%瓊脂粉，PH值調(diào)至6. 0，高溫高壓滅菌，培養(yǎng)溫度為25士2°C，光照強度為3000-40001UX，光照時間為14_16h/d。
實施例(1)外植體的采集與消毒首先除掉多余的葉片，只保留莖段，放在流水下用毛刷蘸肥皂水或洗衣粉進行刷洗，洗掉表面附著的塵土和細菌。然后在超凈臺上先用紫外燈照射10分鐘，再用75%的酒精消毒30秒。再放入0. l%HgC12溶液消毒滅菌5min，所述消毒滅菌液中加入占滅菌液重量百分比0. 5%的吐溫-80，最后用無菌水沖洗6 8次.每次2-3分鐘，消毒殺菌過程完成后，將莖段放在無菌濾紙中吸干，并將莖段兩頭切去一小段，以減少滅菌藥物的毒害。然后將其切成1 1. 5cm長的莖段(帶2-3個腋芽)，分別接種到外植體誘導培養(yǎng)基中。在如表1所示的對比試驗中，顯示吐溫-80在加入量為0. 5%時，效果最好。表 權(quán)利要求
1. 一種利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步驟(1)外植體的采集與消毒將除掉葉片的彩葉丁香的莖段依次進行清洗、紫外線照射、 酒精消毒，再放入0. 1 l^HgCl2溶液消毒滅菌5min，所述消毒滅菌液中加入占滅菌液重量百分比0.5%的吐溫-80，最后用無菌水沖洗，再切成帶2— 3個腋芽的1 1. 5cm長的莖段；(2)將前步所得莖段接種到外植體誘導培養(yǎng)基MS+6-BA0.lmg/l+NAAO. 01mg/l，彩葉丁香芽苗誘導30天至小芽長4-5cm長；(3)將前步所得小苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)20天，在組培的前10代，所述繼代培養(yǎng)基為MS+6-BAl. 0mg/l+NAA0. lmg/1+ VcO. 5g/l ；從第11代起所述繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0. 5mg/l+NAA0. lmg/1+ VcO. 5g/l ；從第 17 代起所述繼代培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5mg/l+NAA0. lmg/1+ VcO. 5g/l + 硫酸慶大霉素 4 萬單位 / 1 ；(4)取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中1/2MS+NAA0.lmg/1，培養(yǎng)40天；(5)將培養(yǎng)瓶置于溫室中自然光煉苗2-3天后，將生根幼植株取出并在0.的高錳酸鉀溶液中進行漂洗；(6)漂洗后的生根幼株種植于栽培基質(zhì)并放于大棚內(nèi)培養(yǎng)，單株套透明塑料袋，保持 90%的相對濕度，光照強度為2000-40001UX ； —周后棄袋；所述栽培基質(zhì)為消毒滅菌后的草炭；當小苗長至20 - 30cm時移栽至大田苗圃進行栽植。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進行快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步驟(1)外植體的采集與消毒；(2)將前步所得莖段接種到外植體誘導培養(yǎng)基誘導30天至小芽長4-5cm長；(3)將前步所得小苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)20天；(4)取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天；(5)將培養(yǎng)瓶置于溫室中自然光煉苗2-3天后，將生根幼植株取出并在0.1％的高錳酸鉀溶液中進行漂洗；(6)漂洗后的生根幼株種植于栽培基質(zhì)，當小苗長至20－30cm時移栽至大田苗圃進行栽植。本發(fā)明選擇的工藝兼顧提高繁殖量、保持遺傳性狀和減少玻璃化三個方面，通過批量組培實現(xiàn)彩葉丁香的快速繁殖。
文檔編號A01H4/00GK102405836SQ20111024643
公開日2012年4月11日 申請日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日
發(fā)明者付麗華, 崔青凱, 張燕, 李振勤, 王百田, 胡文芳, 趙好戰(zhàn) 申請人:北京林業(yè)大學