本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

心葉紫金牛，又名走馬風、紅云草、紅鋪地毯，為紫金牛科紫金牛屬植物，是瑤藥“七十二風”中的走馬風。心葉紫金牛為廣西壯、瑤族常用藥材，以全株入藥，性涼，味苦，具有清熱解毒、鎮(zhèn)咳祛痰、活血止血、調(diào)經(jīng)通絡、消腫定痛的功效，用于治療吐血、便血、咯血、血崩、瘡癤、肺結(jié)核、慢性支氣管炎、咳嗽氣喘、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、產(chǎn)后惡露不盡、產(chǎn)后體弱、風濕痹痛、跌打損傷等癥。近年研究表明，心葉紫金牛還具有抗艾滋病毒、抑制胰島素降解和抗心率失常等作用。

心葉紫金牛為珍稀瀕危藥用植物，處于純野生狀態(tài)，多生于海拔230-860m的密林下、水旁和石縫間蔭濕處，地域分布零散且蘊藏量稀少。隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強，心葉紫金牛的市場需求量逐年攀升，野生資源遭到過度采挖，瀕臨枯竭。自然狀態(tài)下，心葉紫金牛主要依靠種子進行繁殖，但種子量極為稀少，且萌發(fā)慢、萌發(fā)率低，給科學研究和引種栽培帶來極大困難。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其利用心葉紫金牛莖段進行組織培養(yǎng)，可有效縮短種苗生產(chǎn)周期，降低種苗生產(chǎn)成本，且種苗質(zhì)量好、成活率高。

為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

a、繁殖復壯一體化培養(yǎng)：以心葉紫金牛的帶芽莖段為外植體，將所述外植體接種到繁殖復壯一體化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，先在培養(yǎng)溫度22-26℃，光照強度1400lux，光照時間8h/d的條件下培養(yǎng)15d，然后再在培養(yǎng)溫度25-28℃，光照強度3500-4500lux的自然光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)15d，獲得健壯的叢生芽，其中，繁殖復壯一體化培養(yǎng)基為：ms+1.0-2.0mg/lba+0.3-0.5mg/llfs+0.1-0.3mg/liba+0.1-1.0mg/lnaa；

b、生根煉苗同步化培養(yǎng)：將步驟a獲得的叢生芽接種到生根煉苗同步化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，在培養(yǎng)溫度22-26℃，光照強度1500lux，光照時間10h/d的條件下培養(yǎng)7d，待新根開始萌發(fā)后再轉(zhuǎn)入育苗大棚內(nèi)，在培養(yǎng)溫度23-30℃，相對濕度為60-80％，遮光度為20-40％的自然光照條件下培養(yǎng)25d，獲得適宜移栽的完整植株，其中，生根煉苗同步化培養(yǎng)基為：1/2ms+0.1-0.3mg/liba+0.5-1.5mg/lnaa+1.0-2.0mg/liaa+0.3-0.5mg/lmet；

c、移栽：將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，移栽至育苗床或育苗大棚繼續(xù)培養(yǎng)。

其中，ms為ms基本培養(yǎng)基，ba為6-芐基腺嘌呤，lfs為靈發(fā)素，iba為吲哚丁酸，naa為萘乙酸，iaa為吲哚乙酸，met為多效唑。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟a中外植體的獲取方法為：將帶腋芽的心葉紫金牛莖段消毒后接種到繁殖培養(yǎng)基中，獲得不定芽，將所述不定芽切割成1.0-2.0cm的帶芽莖段，即得所述外植體，其中，繁殖培養(yǎng)基為：ms+1.5mg/lba+0.3mg/llfs+0.5mg/liba。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟a中，所述外植體的接種方法為：將所述外植體平鋪在繁殖復壯一體化培養(yǎng)基的表面，并將1/2所述外植體壓入繁殖復壯一體化培養(yǎng)基內(nèi)。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟a中，繁殖復壯一體化培養(yǎng)基為：ms+1.5mg/lba+0.4mg/llfs+0.2mg/liba+0.5mg/lnaa。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟b中，生根煉苗同步化培養(yǎng)基為：1/2ms+0.2mg/liba+1.0mg/lnaa+1.5mg/liaa+0.4mg/lmet。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加2.0-3.0mg/l納米氧化鋅。

優(yōu)選的是，所述的心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，步驟c中，育苗床或育苗大棚的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％。

本發(fā)明至少包括以下有益效果：

第一、通過生物技術(shù)對心葉紫金牛進行組織培養(yǎng)快速繁殖，能在短時間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的心葉紫金牛幼苗，顯著提高了心葉紫金牛種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要；

第二、通過繁殖復壯一體化培養(yǎng)、生根煉苗同步化培養(yǎng)兩步培養(yǎng)法進行心葉紫金牛的工廠化生產(chǎn)，縮短了培養(yǎng)時間，減少培養(yǎng)步驟，降低了培養(yǎng)成本，提高了心葉紫金牛組培種苗的生產(chǎn)效率；

第三、在繁殖復壯一體化培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得的叢生芽，其枝條健康粗壯、展葉良好、木質(zhì)化程度較高，接種到生根煉苗同步化培養(yǎng)基上生根情況良好，生根率在90％以上，移栽后成活率在91.3％以上；

第四、通過向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加2.0-3.0mg/l納米氧化鋅可有效促進生根，增強植株的抗逆性，提高移栽成活率；

第五、本發(fā)明具有生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本低，種苗質(zhì)量好、成活率高等優(yōu)點，可為心葉紫金牛的品種保護和人工繁殖提供技術(shù)支持。

本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。

需要說明的是，下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法，所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。

實施例1：

一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

a、繁殖復壯一體化培養(yǎng)：將帶腋芽的心葉紫金牛莖段消毒后接種到ms+1.5mg/lba+0.3mg/llfs+0.5mg/liba的繁殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得不定芽，將所述不定芽切割成1.0cm的帶芽莖段，將所述帶芽莖段平鋪在繁殖復壯一體化培養(yǎng)基的表面，并將帶芽莖段的1/2壓入繁殖復壯一體化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，先在培養(yǎng)溫度22℃，光照強度1400lux，光照時間8h/d的條件下培養(yǎng)15d，然后再在培養(yǎng)溫度25℃，光照強度3500lux的自然光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)15d，獲得健壯的叢生芽，其中，繁殖復壯一體化培養(yǎng)基為：ms+1.0mg/lba+0.3mg/llfs+0.1mg/liba+0.1mg/lnaa；

b、生根煉苗同步化培養(yǎng)：將步驟a獲得的叢生芽接種到生根煉苗同步化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，在培養(yǎng)溫度22℃，光照強度1500lux，光照時間10h/d的條件下培養(yǎng)7d，待新根開始萌發(fā)后再轉(zhuǎn)入育苗大棚內(nèi)，在培養(yǎng)溫度23℃，相對濕度為60％，遮光度為20％的自然光照條件下培養(yǎng)25d，獲得適宜移栽的完整植株，其中，生根煉苗同步化培養(yǎng)基為：1/2ms+0.1mg/liba+0.5mg/lnaa+1.0mg/liaa+0.3mg/lmet；

c、移栽：將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為92株，生根率為92％，將生根植株移栽至育苗床，在培養(yǎng)溫度25℃，相對濕度為85％，遮光度60％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為84株，成活率為91.3％。

其中，ms為ms基本培養(yǎng)基，ba為6-芐基腺嘌呤，lfs為靈發(fā)素，iba為吲哚丁酸，naa為萘乙酸，iaa為吲哚乙酸，met為多效唑。

實施例2：

一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

a、繁殖復壯一體化培養(yǎng)：將帶腋芽的心葉紫金牛莖段消毒后接種到ms+1.5mg/lba+0.3mg/llfs+0.5mg/liba的繁殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得不定芽，將所述不定芽切割成1.5cm的帶芽莖段，將所述帶芽莖段平鋪在繁殖復壯一體化培養(yǎng)基的表面，并將帶芽莖段的1/2壓入繁殖復壯一體化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，先在培養(yǎng)溫度24℃，光照強度1400lux，光照時間8h/d的條件下培養(yǎng)15d，然后再在培養(yǎng)溫度26℃，光照強度4000lux的自然光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)15d，獲得健壯的叢生芽，其中，繁殖復壯一體化培養(yǎng)基為：ms+1.5mg/lba+0.4mg/llfs+0.2mg/liba+0.5mg/lnaa；

b、生根煉苗同步化培養(yǎng)：將步驟a獲得的叢生芽接種到生根煉苗同步化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，在培養(yǎng)溫度24℃，光照強度1500lux，光照時間10h/d的條件下培養(yǎng)7d，待新根開始萌發(fā)后再轉(zhuǎn)入育苗大棚內(nèi)，在培養(yǎng)溫度26℃，相對濕度為70％，遮光度為30％的自然光照條件下培養(yǎng)25d，獲得適宜移栽的完整植株，其中，生根煉苗同步化培養(yǎng)基為：1/2ms+0.2mg/liba+1.0mg/lnaa+1.5mg/liaa+0.4mg/lmet；

c、移栽：將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為90株，生根率為90％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度28℃，相對濕度為90％，遮光度67％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為85株，成活率為94.4％。

其中，ms為ms基本培養(yǎng)基，ba為6-芐基腺嘌呤，lfs為靈發(fā)素，iba為吲哚丁酸，naa為萘乙酸，iaa為吲哚乙酸，met為多效唑。

實施例3：

一種心葉紫金牛的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

a、繁殖復壯一體化培養(yǎng)：將帶腋芽的心葉紫金牛莖段消毒后接種到ms+1.5mg/lba+0.3mg/llfs+0.5mg/liba的繁殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得不定芽，將所述不定芽切割成2.0cm的帶芽莖段，將所述帶芽莖段平鋪在繁殖復壯一體化培養(yǎng)基的表面，并將帶芽莖段的1/2壓入繁殖復壯一體化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，先在培養(yǎng)溫度26℃，光照強度1400lux，光照時間8h/d的條件下培養(yǎng)15d，然后再在培養(yǎng)溫度28℃，光照強度4500lux的自然光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)15d，獲得健壯的叢生芽，其中，繁殖復壯一體化培養(yǎng)基為：ms+2.0mg/lba+0.5mg/llfs+0.3mg/liba+1.0mg/lnaa；

b、生根煉苗同步化培養(yǎng)：將步驟a獲得的叢生芽接種到生根煉苗同步化培養(yǎng)基內(nèi)，接種完畢后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室中，在培養(yǎng)溫度26℃，光照強度1500lux，光照時間10h/d的條件下培養(yǎng)7d，待新根開始萌發(fā)后再轉(zhuǎn)入育苗大棚內(nèi)，在培養(yǎng)溫度30℃，相對濕度為80％，遮光度為40％的自然光照條件下培養(yǎng)25d，獲得適宜移栽的完整植株，其中，生根煉苗同步化培養(yǎng)基為：1/2ms+0.3mg/liba+1.5mg/lnaa+2.0mg/liaa+0.5mg/lmet；

c、移栽：將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為94株，生根率為94％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度30℃，相對濕度為95％，遮光度75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為87株，成活率為92.6％。

其中，ms為ms基本培養(yǎng)基，ba為6-芐基腺嘌呤，lfs為靈發(fā)素，iba為吲哚丁酸，naa為萘乙酸，iaa為吲哚乙酸，met為多效唑。

實施例4：

在實施例1的基礎(chǔ)上，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加2.0mg/l納米氧化鋅。將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為95株，生根率為95％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為90株，成活率為94.7％。

實施例5：

在實施例1的基礎(chǔ)上，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加2.5mg/l納米氧化鋅。將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為99株，生根率為99％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為97株，成活率為98.0％。

實施例6：

在實施例1的基礎(chǔ)上，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加3.0mg/l納米氧化鋅。將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為94株，生根率為94％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為88株，成活率為93.6％。

實施例7：

在實施例1的基礎(chǔ)上，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加1.5mg/l納米氧化鋅。將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為92株，生根率為92％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為83株，成活率為90.2％。

實施例8：

在實施例1的基礎(chǔ)上，步驟b中，還包括，向生根煉苗同步化培養(yǎng)基中添加3.5mg/l納米氧化鋅。將步驟b獲得的完整植株取出，洗凈根部殘留培養(yǎng)基，統(tǒng)計植株生根率，100株植株中，生根植株為88株，生根率為88％，將生根植株移栽至育苗大棚，在培養(yǎng)溫度25-30℃，相對濕度為85-95％，遮光度60-75％下繼續(xù)培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計成活植株為77株，成活率為87.5％。

盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)。