專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法。
背景技術(shù)：
我國(guó)已加入WT0，農(nóng)業(yè)將面臨新的挑戰(zhàn)和發(fā)展機(jī)遇，農(nóng)副產(chǎn)品藥物殘留問(wèn)題越來(lái)越受到各國(guó)關(guān)注，提高我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的重要措施之一是降低農(nóng)產(chǎn)品有毒物質(zhì)的殘留量，而生物農(nóng)藥、生物肥料(簡(jiǎn)稱(chēng)生物藥肥)將為農(nóng)產(chǎn)品優(yōu)質(zhì)安全生產(chǎn)和降低有毒物質(zhì)殘留量提供支撐。生物藥肥是21世紀(jì)農(nóng)藥、肥料行業(yè)的新產(chǎn)業(yè)，代表著綠色農(nóng)業(yè)、生態(tài)農(nóng)業(yè)的新方向，其最大的優(yōu)勢(shì)在于能克服化學(xué)農(nóng)藥、化學(xué)肥料對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染和減少在農(nóng)副產(chǎn)品中有害物質(zhì)殘留量，同時(shí)推廣使用生物農(nóng)藥、生物肥料也將大幅度提高農(nóng)副產(chǎn)品的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益。蘇云金桿菌屬于芽孢桿菌屬(Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱(chēng)Bt)，是目前世界上用途最廣，開(kāi)發(fā)時(shí)間最長(zhǎng)，產(chǎn)量最大，應(yīng)用最成功的生物農(nóng)藥，占生物防治劑總量的90%以上。蘇云金桿菌殺蟲(chóng)譜很廣，能防治稻苞蟲(chóng)、稻縱卷葉螟、玉米螟、棉鈴蟲(chóng)、松毛蟲(chóng)、菜青蟲(chóng)、 小菜蛾、茶卷葉螟、煙青蟲(chóng)、茶毛蟲(chóng)等上百種害蟲(chóng)，可用于蔬菜、水稻、玉米、棉花、果樹(shù)、茶樹(shù)及林區(qū)等眾多植物。目前，Bt殺蟲(chóng)劑生產(chǎn)主要采用液體和固體兩種發(fā)酵方式。Bt殺蟲(chóng)劑的主流生產(chǎn)工藝是液體深層發(fā)酵，工藝復(fù)雜、設(shè)備投資大，發(fā)酵過(guò)程要求嚴(yán)格，發(fā)酵產(chǎn)品為液體，發(fā)酵完成后需要進(jìn)一步離心、濃縮、干燥等處理，生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生大量廢水。而且，蘇云金芽孢桿菌制劑的發(fā)酵生產(chǎn)多采用玉米粉、黃豆粉、淀粉等農(nóng)副產(chǎn)品，成本較高，限制了蘇云金芽孢桿菌制劑的大量生產(chǎn)與推廣應(yīng)用。Bt殺蟲(chóng)劑固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)工藝是針對(duì)液體發(fā)酵過(guò)程中存在的問(wèn)題發(fā)展起來(lái)的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其原料成本低，發(fā)酵過(guò)程不易大面積污染，發(fā)酵環(huán)境要求低，甚至可以是半開(kāi)放式發(fā)酵，因此投資較少；發(fā)酵產(chǎn)物為固體，直接烘干、粉碎后即可成為產(chǎn)品，生產(chǎn)過(guò)程中有效成份流失少，產(chǎn)品中不需要再加大量的助劑，易于運(yùn)輸儲(chǔ)存，尤其是生產(chǎn)過(guò)程中幾乎沒(méi)有廢水排放，不需要進(jìn)行污水處理，沒(méi)有三廢產(chǎn)生。目前，已有報(bào)道采用廢水污泥固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)Bt殺蟲(chóng)劑(K. Lachhab, R. D. Tyagi a, J. R. Vale' ro. Production ofBacillus thuringiensis biopesticides using wastewater sludge as a raw material :effect ofinoculum and sludge solids concentration. Process Biochemistry 37 (2001) 197-208)，但是還未見(jiàn)有報(bào)道用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)Bt生物農(nóng)藥或生物肥料。另外，殼寡糖(chitosan oligosaccharide),又稱(chēng)葡萄糖胺寡糖 (glucosamineoligosaccharide)，是殼聚糖降解以后，氨基葡萄糖通過(guò)β-(1，4)-糖苷鍵連接而成聚合度為2 10的產(chǎn)物，是自然界中迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一帶正電荷的動(dòng)物纖維，具有良好的水溶性和獨(dú)特的生理活性和功能。在農(nóng)業(yè)應(yīng)用上，殼寡糖對(duì)多種真菌、 細(xì)菌禾口病毒具有拮抗作用(Hiranso S，Nagao N. Effects of chitosan，pectic acid，lysozme, andchitinase on the growth of several phytopathogen. Agric Bio Chem, 1989,53(11) :3065-3066),能增強(qiáng)植物對(duì)病蟲(chóng)害的防御能力(Roby D，Gadelle A, Toppan A. Chitinoligosaccha rides as elicitors of chitinase activity in melon plants. Biochem Biophy ResCommun,1987,143 (3) :885 ；U sov A I. Oligosaccharins a new class of signalingmolecules in plants. Uspekhi Khimii，1993，62 (11) :1119-1144)，增殖土壤中的有益菌，刺激植物生長(zhǎng)，使農(nóng)作物和瓜果蔬菜增產(chǎn)，并且具有高效、低成本、無(wú)公害等特點(diǎn)。殼寡糖不但可以誘導(dǎo)植物的抗病性(Inui H,Yamaguchi Y5Hirano S. Elicitor actions οfN-acetyIchitooligosaccha rides and laminarioligosaccha rides for chitinase and L-phenylalanine ammonia-lyase induction in rice suspension culture. Biosci， Biotech and B iochem，1997，61 (6) :975-978)，抑制多種病原微生物的生長(zhǎng)，其施用后可被土壤中的微生物降解，對(duì)土壤環(huán)境不造成影響，它還能提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，改善作物品質(zhì)、提高食品營(yíng)養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，殼寡糖作為一種新型綠色農(nóng)藥和生物肥料在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明的方法，包括以下步驟1)前處理生物殘?jiān)?，得無(wú)菌培養(yǎng)物料；2)固態(tài)發(fā)酵，將蘇云金芽孢桿菌種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，在發(fā)酵的8 11小時(shí)，采用降低初始發(fā)酵溫度2 5°C的變溫發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間35 50小時(shí)， 采用變溫發(fā)酵的原因是Bt菌固態(tài)發(fā)酵在進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，極易產(chǎn)熱，引起物料局部溫度的急速升高，而固態(tài)發(fā)酵本身的傳熱速度較慢，因此，過(guò)高的溫度一方面會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)體的死亡，抑制蘇云金桿菌的生長(zhǎng)，另一方面會(huì)使菌體產(chǎn)生Cry-的突變體，從而導(dǎo)致沒(méi)有晶體蛋白的芽孢產(chǎn)生，所以采用變溫發(fā)酵可以有效避免過(guò)高溫度造成的不利影響，提高發(fā)酵效率；3)發(fā)酵物料經(jīng)干燥、粉碎后，添加殼寡糖粉末，混合均勻，得生物藥肥產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明提供的方法，所述的生物殘?jiān)ü邭堅(jiān)?工廠(chǎng)榨取果蔬汁后的殘?jiān)?、蘆筍下腳料(蘆筍加工過(guò)程中產(chǎn)生的筍莖、筍根或筍皮)、蘆筍渣(蘆筍下加料提取蘆筍皂苷后的殘?jiān)?、海帶渣(提取海帶多糖后的殘?jiān)?、銀杏葉(銀杏葉提取有效成分后的殘?jiān)?。根據(jù)本發(fā)明提供的方法，優(yōu)選所述殼寡糖粉末的添加比例是1 5%。根據(jù)本發(fā)明提供的方法，優(yōu)選所述的殼寡糖粉末為聚合度為2 10的水溶性殼寡糖。根據(jù)本發(fā)明的方法，其特征中，在步驟1)中，生物殘?jiān)?jīng)粉碎，過(guò)篩，調(diào)節(jié)物料的初始含水量，添加無(wú)機(jī)鹽，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)PH，經(jīng)濕熱滅菌，冷卻備用，其粉碎粒度為 20 40目，初始含水量為45% 85%，初始pH為7. O 7. 4，固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中物料pH值難于在線(xiàn)監(jiān)測(cè)與控制，因此，物料的初始PH值調(diào)節(jié)至7. O 7. 4，以滿(mǎn)足Bt菌的生長(zhǎng)需求。 優(yōu)選地，所述無(wú)機(jī)鹽為選自 KH2PO4 0. 075 ~ 0. 2% ；MgSO4 · 7Η20 0. 075 ~ 0. 2% ；MnSO4 · H2O 0. 002% ；FeSO4 · H2O 0. 002% ；ZnSO4 · H2OO. 002%, CaCO3 0. 5 1. 0%中的一種或多種。
根據(jù)本發(fā)明的方法，其中，蘇云金芽孢桿菌液體培養(yǎng)基為牛肉膏0.3%，蛋白胨 l%,NaCl 0. 2%，pH值7.0 7. 2 ；培養(yǎng)條件為溫度30°C、轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中，在步驟幻中，發(fā)酵條件為溫度30 32°C、濕度85 95%、發(fā)酵物料體積與每分鐘通入空氣的體積比為1 1 1 2，采用往復(fù)式滾動(dòng)攪拌槳對(duì)發(fā)酵物料進(jìn)行攪拌，攪拌槳對(duì)發(fā)酵物料進(jìn)行攪拌，使物料攪拌均勻，利于傳質(zhì)傳熱。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中，在步驟2)中，按照10 15% V/W的接種量將種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，種子液與物料的混合過(guò)程中，將物料干燥或半干燥狀態(tài)高溫高壓滅菌，然后將培養(yǎng)7 8小時(shí)的Bt種子液添加無(wú)菌水稀釋?zhuān)倥c無(wú)菌的干燥或半干燥物料充分混勻，以達(dá)到Bt菌在物料中均勻分布的效果。根據(jù)本發(fā)明的方法，物料的顆粒大小與形狀既影響傳質(zhì)、傳熱也影響B(tài)t對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的充分利用，因此，生物殘?jiān)姆鬯榱６冗_(dá)到20 40目，耦合通氣、攪拌、調(diào)節(jié)濕度可達(dá)到最佳發(fā)酵效果。因此，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例的用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法可包括以下步驟1)生物殘?jiān)那疤幚砩餁堅(jiān)?蘆筍下腳料、蘆筍渣、海帶渣、果蔬殘?jiān)?粉碎至20 40目，加水調(diào)節(jié)物料的初始含水量為45% 85%，添加無(wú)機(jī)鹽，充分?jǐn)嚢杌靹颍?調(diào)節(jié)pH為7. 0 7. 4，經(jīng)濕熱滅菌20 30分鐘后，冷卻至30°C左右備用；2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)從蘇云金芽孢桿菌斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)Bt菌苔，接種到IOOmL滅菌的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中(牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，NaCl 0.2%, PH7. 0 7. 2)，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度30°C、轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)7 8小時(shí)， 作為Bt菌種子液；3)固態(tài)發(fā)酵按照10 15% (V/W)的接種量將種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中， 攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30 32°C、濕度85 95%、通氣量1 1 1 2，在發(fā)酵的8 11小時(shí)，采用降低初始發(fā)酵溫度2 5°C的變溫發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間35 50小時(shí)；4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)50 60°C通風(fēng)干燥、粉碎至200目、添加1 5%
殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。我國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，每年有10億噸左右的農(nóng)業(yè)廢棄物產(chǎn)生，過(guò)量的農(nóng)業(yè)廢棄物以及果蔬加工過(guò)程產(chǎn)生的殘?jiān)?，已?jīng)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染和資源浪費(fèi)，生物殘?jiān)馁Y源化利用一直是我國(guó)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的需要。果蔬殘?jiān)⑻J筍下腳料、蘆筍渣以及海帶渣和銀杏葉殘?jiān)壬餁堅(jiān)写罅康陌被帷⒌鞍踪|(zhì)、維生素以及礦物元素等，可滿(mǎn)足蘇云金芽孢桿菌的生長(zhǎng)，應(yīng)用于發(fā)酵蘇云金芽孢桿菌具有成本低廉、工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，設(shè)備投資少，生產(chǎn)過(guò)程無(wú)“三廢”產(chǎn)生，發(fā)酵原料自身也可作為綠色肥料，不污染環(huán)境，利于蘇云金芽孢桿菌制劑的大量生產(chǎn)與應(yīng)用。另外，殼寡糖具有獨(dú)特的調(diào)節(jié)植物代謝、提高植物抗病蟲(chóng)害以及改善作物品質(zhì)等優(yōu)良特性，在Bt固體發(fā)酵產(chǎn)物中添加殼寡糖，使其藥效、肥效都大幅提高，所以，本發(fā)明提供的以生物殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏实姆椒?，既具有廣譜殺蟲(chóng)、抑制病毒效果，又具有調(diào)節(jié)植物代謝、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的功能，具有肥效一體化的功效，實(shí)現(xiàn)了生物農(nóng)藥、生物肥料的有機(jī)結(jié)合。
綜上，本發(fā)明提供的一種以生物殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏实姆椒ǎ哂幸韵聝?yōu)點(diǎn)·1、提供的生產(chǎn)原料為生物殘?jiān)蟻?lái)源豐富，成本較低，可大幅度降低Bt殺蟲(chóng)劑的生產(chǎn)成本；2、果蔬殘?jiān)?、蘆筍下腳料、蘆筍渣以及海帶渣中仍然含有大量的氨基酸、蛋白質(zhì)、 維生素以及礦物元素等，能夠滿(mǎn)足蘇云金芽孢桿菌的生長(zhǎng)需求；3、利用果蔬殘?jiān)⑻J筍下腳料、蘆筍渣以及海帶渣為原料固態(tài)發(fā)酵Bt生物農(nóng)藥， 工藝簡(jiǎn)單、發(fā)酵物料得到全利用；4、果蔬殘?jiān)?、蘆筍下腳料、蘆筍渣以及海帶渣等殘?jiān)陨砜勺鳛榫G色肥料、發(fā)酵后兼得殺蟲(chóng)效果，添加殼寡糖后，產(chǎn)品的藥效、肥效都將大幅提高；5、工藝流程簡(jiǎn)單、設(shè)備投資少，生產(chǎn)過(guò)程無(wú)“三廢”產(chǎn)生，既節(jié)能節(jié)水，又不污染環(huán)境；6、生產(chǎn)的生物藥肥既具有廣譜殺蟲(chóng)、抑制病毒效果，又具有調(diào)節(jié)植物代謝、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的功能，實(shí)現(xiàn)了生物農(nóng)藥、生物肥料的有機(jī)結(jié)合。


圖1根據(jù)本發(fā)明的方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例中所使用的殼寡糖的聚合度為2-10。實(shí)施例1、以蘆筍下腳料為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理蘆筍下腳料經(jīng)過(guò)粉碎至20目，調(diào)節(jié)蘆筍下腳料的初始含水量 % 65%,添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0.2%、MgSO4 · 7H20 0.1%, CaCO3 1.0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) PH為7. 0，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)從蘇云金芽孢桿菌斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)Bt菌苔，接種到IOOmL滅菌的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中(牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，NaCl 0.2%, PH7. 0 7. 2)，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度30°C、轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)7 8小時(shí)， 作為Bt菌種子液；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度90%、通氣量1 1，在發(fā)酵的8小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至觀(guān)！，發(fā)酵時(shí)間45小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 2 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例2、以蘆筍下腳料為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理蘆筍下腳料經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)蘆筍下腳料的初始含水量 % 70%,添加 KH2PO4 0. 075%、MgSO4 · 7H20 0.2%、CaCO3 0. 5%充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) pH 為 7. 2，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度32°C、濕度85%、通氣量1 2，在發(fā)酵的11小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)60°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 5 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例3、以蘆筍殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏?1)原料的前處理蘆筍渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)蘆筍殘?jiān)某跏己繛?5%， 添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2% ；MgSO4 · 7H20 0. 2% ；MnSO4 · H2O 0. 002% ；FeSO4 · H2OO. 002% ； ZnSO4 · H2O 0. 002 %、CaCO3 1.0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)pH為7. 4，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度95%、通氣量1 1.2，在發(fā)酵的10小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至沈°〇， 發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加
4%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例4、以蘆筍殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏?1)原料的前處理蘆筍渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)蘆筍殘?jiān)某跏己繛?0%， 添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 075% ；MgSO4 ·7Η20 0. 075% ；MnSO4 ·Η20 0. 002% ；FeSO4 ‘H2OO. 002% ； ZnSO4 · H2O 0. 002%、CaCO3 0. 5%,充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)pH為7. 0，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度85%、通氣量1 1.5，在發(fā)酵的9小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C， 發(fā)酵時(shí)間37小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)60°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加
5%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例5、以海帶殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏?1)原料的前處理海帶渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，初始含水量調(diào)節(jié)至80%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 1 %, MgSO4 · 7H20 0. 1 %, MnSO4 · H2O 0. 002% ；FeSO4 · H2O 0. 002% ；ZnSO4 · H2O 0. 002%, CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)pH為7. 0，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度95%、通氣量1 2，在發(fā)酵的8小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間50小時(shí)；(4)發(fā)酵基質(zhì)后處理發(fā)酵物料經(jīng)50°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 2.5%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例6、以海帶殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏?1)原料的前處理海帶渣經(jīng)過(guò)粉碎至20目，初始含水量調(diào)節(jié)至70%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2% ；MgSO4 · 7H20 0. 2% ；MnSO4 · H2O 0. 002% ；FeSO4 · H2O 0. 002% ；ZnSO4 · H2O 0. 002%, CaCO3 0. 5%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)pH為7. 4，濕熱滅菌20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度32°C、濕度95%、通氣量1 2，在發(fā)酵的9小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間50小時(shí)；(4)發(fā)酵基質(zhì)后處理發(fā)酵物料經(jīng)50°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 3.5%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例7、以銀杏葉殘?jiān)鼮樵现苽渖锼幏?1)原料的前處理銀杏葉渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)初始含水量為65%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2%,MgSO4 ·7Η20 0. 1%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) pH 為 7. 0，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度90%、通氣量1 1，在發(fā)酵的8小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 3 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例8、以蘋(píng)果渣為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理蘋(píng)果渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)初始含水量為45%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2%,MgSO4 ·7Η20 0. 1%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹颍{(diào)節(jié) pH 為 7. 0，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度95%、通氣量1 1，在發(fā)酵的8小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間35小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 3 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例9、以橙渣為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理橙渣經(jīng)過(guò)粉碎至20目，調(diào)節(jié)初始含水量為50%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 15%、MgSO4 ·7Η20 0. 15%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) pH 為 7. 0，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度85%、通氣量1 1，在發(fā)酵的10小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至觀(guān)！，發(fā)酵時(shí)間35小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 2.5%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。
實(shí)施例10、以桔渣為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理桔渣經(jīng)過(guò)粉碎至20目，調(diào)節(jié)初始含水量為45%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 15%、MgSO4 ·7Η20 0. 15%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹颍{(diào)節(jié) ρΗ 為 7. 2，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度85%、通氣量1 1，在發(fā)酵的9小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間35小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 2.5%殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例11、以西紅柿渣為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理西紅柿渣經(jīng)過(guò)粉碎至40目，調(diào)節(jié)初始含水量為55%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2%,MgSO4 ·7Η20 0. 1%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) ρΗ 為 7. 0，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度95%、通氣量1 1.8，在發(fā)酵的9小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C， 發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 1 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。實(shí)施例12、以胡蘿卜渣為原料制備生物藥肥(1)原料的前處理胡蘿卜渣經(jīng)過(guò)粉碎至20目，調(diào)節(jié)初始含水量為65%，添加無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4 0. 2%,MgSO4 ·7Η20 0. 1%,CaCO3 1. 0%，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié) ρΗ 為 7. 0，濕熱滅菌 20 30分鐘后，得無(wú)菌培養(yǎng)物料，冷卻至30°C左右備用；(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)同實(shí)施例1 ；(3)固態(tài)發(fā)酵將Bt種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，攪拌混勻，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為溫度30°C、濕度90%、通氣量1 1，在發(fā)酵的9小時(shí)，降低發(fā)酵溫度至27°C，發(fā)酵時(shí)間35小時(shí)；(4)發(fā)酵物料后處理發(fā)酵物料經(jīng)55°C通風(fēng)干燥、氣流粉碎，過(guò)200目標(biāo)準(zhǔn)篩、添加 5 %殼寡糖粉末，充分混勻，得產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟1)前處理生物殘?jiān)脽o(wú)菌培養(yǎng)物料；2)固態(tài)發(fā)酵，將蘇云金芽孢桿菌種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，在發(fā)酵的8 11小時(shí)，采用降低初始發(fā)酵溫度2 5°C的變溫發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為35 50小時(shí)；3)發(fā)酵物料經(jīng)干燥、粉碎后，添加殼寡糖粉末，混合均勻，得生物藥肥產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物殘?jiān)ü邭堅(jiān)?、蘆筍下腳料、蘆筍渣、海帶渣、銀杏葉渣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述殼寡糖的添加比例是1 5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述得殼寡糖粉末是聚合度為2 10的水溶性殼寡糖粉末。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，生物殘?jiān)?jīng)粉碎，過(guò)篩，調(diào)節(jié)物料的初始含水量，添加無(wú)機(jī)鹽，充分?jǐn)嚢杌靹?，調(diào)節(jié)PH，經(jīng)濕熱滅菌，冷卻備用，其粉碎粒度為20 40目，初始含水量為45% 85%，初始pH為7. 0 7. 4。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述無(wú)機(jī)鹽為選自KH2PO40.075 0.2%; MgSO4 ·7Η20 0. 075 ~ 0. 2% ；MnSO4 .H2O 0. 002% ；FeSO4 .H2O 0. 002% ；ZnSO4 .H2O 0. 002% ； CaCO3 0. 5 1. 0%中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟幻中，發(fā)酵條件為溫度30 32°C，濕度85 95%，發(fā)酵物料體積與每分鐘通入空氣的體積比為1 1 1 2，采用往復(fù)式滾動(dòng)攪拌槳對(duì)發(fā)酵物料進(jìn)行攪拌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，按照10 15%V/W的接種量將種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，種子液與物料的混合過(guò)程中，將物料干燥或半干燥狀態(tài)高溫高壓滅菌，然后將培養(yǎng)7 8小時(shí)的Bt種子液添加無(wú)菌水稀釋?zhuān)倥c無(wú)菌的干燥或半干燥物料充分混勻。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供一種用生物殘?jiān)虘B(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物藥肥產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明的方法包括以下步驟1)前處理生物殘?jiān)?)固態(tài)發(fā)酵，將蘇云金芽孢桿菌種子液接種到無(wú)菌培養(yǎng)物料中，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，在發(fā)酵的8～11小時(shí)，采用降低初始發(fā)酵溫度2～5℃的變溫發(fā)酵；3)添加殼寡糖粉末，得生物藥肥產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明的方法具有成本低廉、工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備投資少，生產(chǎn)過(guò)程綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，而且，根據(jù)本發(fā)明的方法將殼寡糖粉末添加到發(fā)酵產(chǎn)物中，得到的生物藥肥既具有廣譜殺蟲(chóng)、抑制病毒效果，又具有調(diào)節(jié)植物代謝、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的功能，具有肥效一體化的功效，實(shí)現(xiàn)了生物農(nóng)藥、生物肥料的有機(jī)結(jié)合。
文檔編號(hào)C05G3/02GK102190534SQ20101018692
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月12日
發(fā)明者王曉東, 袁曉凡, 趙兵, 趙慶生 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所