專利名稱：一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有益微生物發(fā)酵劑在畜禽養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用，特別是一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
微生物技術(shù)被廣泛應(yīng)用于畜禽健康養(yǎng)殖領(lǐng)域，采用微生態(tài)工程原理，篩選出適合不同畜禽需要有益微生物菌株，經(jīng)過復(fù)配等工藝，制成微生態(tài)制劑，加入飲水或飼料中，起到抗病增產(chǎn)、除臭和改善肉質(zhì)的作用。目前，復(fù)合合微生物制劑被廣泛應(yīng)用于豬、牛、兔、狗、雞、鴨、鵝、鴿、魚、鱉、蝦等幾乎一切畜禽養(yǎng)殖。
對(duì)于復(fù)合微生物在畜禽養(yǎng)殖上所起的作用可歸類如下幾點(diǎn)(1)增加畜禽營(yíng)養(yǎng)，提高飼料利用率，提高生長(zhǎng)速度。(2)明顯增強(qiáng)畜禽免疫能力和抗病性，提高成活率。(3)改善肉的品質(zhì)，提高產(chǎn)品質(zhì)量。(4)增強(qiáng)母畜禽的繁殖機(jī)能.(5)可以清除糞尿惡臭，凈化生態(tài)環(huán)境，無環(huán)境污染。
隨著養(yǎng)殖規(guī)模和養(yǎng)殖數(shù)量的迅速增加，規(guī)?；B(yǎng)殖所帶來的環(huán)境污染、養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境惡化、疾病頻發(fā)以及對(duì)動(dòng)物福利的嚴(yán)重傷害等問題，困擾著廣大養(yǎng)殖企業(yè)。微生態(tài)制劑在抗病、改善凈化養(yǎng)殖環(huán)境方面的功效得到了特別關(guān)注。近年來興起的發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)就是微生態(tài)技術(shù)在養(yǎng)殖業(yè)的一個(gè)非常巧妙的應(yīng)用。
微生態(tài)發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)的原理是運(yùn)用特殊微生物通過發(fā)酵鋸末等原料制成微生物發(fā)酵墊料，以一定厚度鋪在豬圈里，豬在整個(gè)生長(zhǎng)階段都生活在這種發(fā)酵菌床上，其排泄物被菌床中的微生物迅速降解、消化，可以使豬舍內(nèi)沒有臭味，不用水沖洗圈舍，不造成環(huán)境污染，節(jié)約資源。豬舍中的有益微生物環(huán)境，抑制有害菌的繁殖，增強(qiáng)豬的免疫力，減少防疫用藥，增加成活率和出欄率，達(dá)到提高產(chǎn)品品質(zhì)和養(yǎng)殖效益的目的。養(yǎng)殖過程中的墊料和糞便直接生成高品質(zhì)有機(jī)肥，變廢為寶，增加收益。
目前這一養(yǎng)殖模式，在世界各國(guó)均得到越來越多的重視，各地的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)專家和科研工作者正投入大量的工作，研究開發(fā)適于本國(guó)本地區(qū)的微生態(tài)養(yǎng)豬模式，經(jīng)過初步的推廣應(yīng)用，均已取得一定的成功，受到養(yǎng)豬界的高度贊揚(yáng)。雖然這一模式現(xiàn)在還處在發(fā)展初期，并且還在不斷發(fā)展和完善當(dāng)中，但它的經(jīng)濟(jì)性、環(huán)保性已充分顯現(xiàn)。
微生態(tài)發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)由于其節(jié)能、減排、環(huán)保、安全、福利等優(yōu)勢(shì)，被政府及養(yǎng)殖戶廣泛認(rèn)可，但由于相關(guān)配套技術(shù)不到位，投入品價(jià)格過高增加應(yīng)用成本等因素，極大的限制了發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)的推廣應(yīng)用。目前生態(tài)發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)專用發(fā)酵劑商品化產(chǎn)品眾多，價(jià)格均偏高，每平方米墊料增加的發(fā)酵劑成本達(dá)到30-60元不等，而且產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，應(yīng)用效果也常常存在不穩(wěn)定的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響發(fā)酵床養(yǎng)殖的應(yīng)用效果和推廣應(yīng)用進(jìn)程。


發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)上述領(lǐng)域的缺陷，本發(fā)明提供一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑及其應(yīng)用，該發(fā)酵劑由四種有益微生物菌液組配而成，可用于畜禽養(yǎng)殖床、飼料添加劑等方面，其特點(diǎn)在于降低了用戶在發(fā)酵劑上的成本投入，且效果穩(wěn)定。
一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑，其中的活性微生物包括酵母菌、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、納豆芽孢桿菌(Bacillus natto)和乳酸菌，所述酵母菌為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，所述乳酸菌為乳酸球菌(Lactococcuslactis)。
所述酵母菌為在液體培養(yǎng)基中按體積比0.01％接入酵母原菌，33℃～34℃下培養(yǎng)10～15小時(shí)制得菌液； 所述枯草芽孢桿菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接種二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌菌種液，31℃～32℃下，培養(yǎng)30～35小時(shí)所得的菌液； 所述納豆芽孢桿菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接種二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的納豆芽孢桿菌菌種液，31℃～32℃下，培養(yǎng)30～35小時(shí)所得的菌液； 所述乳酸菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接入二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的乳酸菌菌種液，36℃～37℃下，靜止培養(yǎng)30～40小時(shí)所得的菌液。
所述酵母菌、枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、乳酸菌四種菌的菌液按體積比3∶3∶3∶1混合。
所述復(fù)合微生物發(fā)酵劑在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于先對(duì)上述復(fù)合微生物發(fā)酵劑進(jìn)行擴(kuò)繁得到擴(kuò)繁菌劑，所述擴(kuò)繁步驟如下 (1)將紅糖與水按重量份比1∶10混合并攪拌至充分溶解，冷卻到34～36℃； (2)加入上述復(fù)合微生態(tài)發(fā)酵劑1份，充分?jǐn)嚢琛Ｖ糜?0～35℃環(huán)境中，每4～8小時(shí)攪拌一次，培養(yǎng)45～50個(gè)小時(shí)。
所述應(yīng)用指用于畜禽飲水，其特征在于使用的前10天，在飲水中按1％加入擴(kuò)繁菌劑，第10天后可加入量為0.3～0.5％。
所述應(yīng)用指所述擴(kuò)繁菌劑按0.5％添加到全價(jià)飼料中，所述添加指與全價(jià)料拌勻或噴施在全價(jià)料表面。
所述應(yīng)用指擴(kuò)繁菌劑按0.1％稀釋，噴施在畜禽作為消毒液進(jìn)行畜禽的養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)行消毒。
所述應(yīng)用指制作發(fā)酵飼料，按照飼料∶水∶擴(kuò)繁菌劑∶紅糖＝100∶60∶1∶1的體積比拌勻，裝入密封袋中避光發(fā)酵5-7天得到所述發(fā)酵飼料，按喂料量的10％將發(fā)酵飼料加入到全價(jià)料中，拌勻飼喂畜禽。
所述應(yīng)用指制作發(fā)酵床墊料，所述擴(kuò)繁菌劑與墊料的質(zhì)量體積比1kg∶5M3，所述墊料和菌劑常溫混合發(fā)酵，至墊料內(nèi)部溫度升到35℃以上后用于畜禽飼養(yǎng)，所述菌劑為擴(kuò)繁菌劑與水混合成，所述菌劑占?jí)|料重量的30～40％。
所述混合發(fā)酵先在圈底鋪20厘米厚的稻殼、玉米芯粉或/和軋短玉米秸桿，噴灑菌劑，再鋪10公分的鋸末、稻殼或/和花生殼，噴菌劑，以此循環(huán)鋪至80厘米深，最后一層鋪10厘米鋸末，表面噴菌劑，然后覆蓋麻袋或編織袋，待墊料下30公分溫度升到35℃以上即可。
本發(fā)明提供的一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑，為畜禽養(yǎng)殖提供了一種實(shí)用，高效的發(fā)酵劑，是四種有益菌的混合菌液，本發(fā)明通過對(duì)比優(yōu)選實(shí)驗(yàn)，選擇了好氧發(fā)酵抗逆性強(qiáng)的納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌 納豆芽孢桿菌具有耐酸、耐熱特性的有益菌，在胃酸下四小時(shí)存活率為100％，同時(shí)具有強(qiáng)力的病原菌抑制能力，是各種益菌當(dāng)中，對(duì)環(huán)境耐受力最好，且可以直達(dá)小腸的菌種之一，口服后可改變動(dòng)物腸道菌叢生態(tài)，幫助消化道機(jī)能正常化，以使排便順暢，維持體內(nèi)生理平衡的作用；可以產(chǎn)酸，調(diào)節(jié)腸道菌群，增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞免疫放應(yīng)；并能生成多種蛋白酶特別是堿性蛋白酶、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，降解植物性飼料中某些復(fù)雜的碳水化合物，從而提高飼料的轉(zhuǎn)化率。
枯草芽孢桿菌，能耐氧化、耐擠壓耐高溫，能長(zhǎng)期耐60℃高溫，在120℃溫度下能存活20分鐘、耐酸堿，在酸性胃環(huán)境中能保持活性，可以耐唾液和膽汁的攻擊，是飼料微生物中可100％直達(dá)大小腸的活菌；能短期內(nèi)繁殖成高含菌量的優(yōu)勢(shì)種群，促進(jìn)有益厭氧微生物的繁殖，抑制有害細(xì)菌(大腸桿菌、沙門氏桿菌)的生長(zhǎng)；在快速繁殖過程中，產(chǎn)生大量多種維生素、有機(jī)酸、氨基酸、蛋白酶特別是堿性蛋白酶、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，能降解植物性飼料中復(fù)雜的有機(jī)物，從而促進(jìn)消化吸收，提高飼料利用率，防止動(dòng)物消化不良，出現(xiàn)“飼料便”等狀況發(fā)生；除臭驅(qū)蠅，減少污染，控制細(xì)菌性疾病，能減少糞便中氮、磷、鈣的排泄量，減少糞便臭味及有害氣體排放，表現(xiàn)為動(dòng)物糞便臭味逐步減輕，減少飼料蛋白質(zhì)分解為氨氣浪費(fèi)，從而起到清潔環(huán)境污染的作用。
考慮到本發(fā)明的復(fù)合微生物發(fā)酵劑的兼用性、對(duì)動(dòng)物的益生作用以及用于發(fā)酵床時(shí)維持墊料的酸堿度的因素，本發(fā)明加入了乳酸球菌和釀酒酵母進(jìn)行配伍共生。乳酸球菌是動(dòng)物體內(nèi)的常在菌，在動(dòng)物體內(nèi)通過生物拮抗、降低pH值、阻止和抑制致病菌的侵入和定植，降解亞硝氨、氨、吲哚、糞臭素等有害物質(zhì)，維持腸道中正常的生態(tài)平衡，活菌體內(nèi)和代謝產(chǎn)物中含有較高的SOD，能增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫，乳酸乳球菌產(chǎn)生的Nisin對(duì)鏈球菌、葡萄球菌、芽孢桿菌中的一些種、梭菌及其他乳酸菌有抑制作用，對(duì)維持發(fā)酵墊料的酸堿度，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)方面效果優(yōu)于其他乳酸菌。本發(fā)明所選釀酒酵母能很好地與乳酸球菌共生，配伍后對(duì)畜舍除臭和對(duì)動(dòng)物的益生效果更明顯，可以抑制治病性大腸桿菌K88、K99和987P，可以代謝產(chǎn)生免疫刺激劑，為動(dòng)物提供了外援性消化道微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，提高動(dòng)物對(duì)疾病的抵抗力。
同時(shí)本產(chǎn)品所含菌種均屬于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的可以應(yīng)用到畜牧養(yǎng)殖領(lǐng)域的菌種，功能定位明確，針對(duì)性強(qiáng)，應(yīng)用簡(jiǎn)單，既可作為發(fā)酵床專用發(fā)酵劑，又可以應(yīng)用于飼料添加，經(jīng)過對(duì)比試驗(yàn)及生產(chǎn)性觀察試驗(yàn)，本產(chǎn)品用于發(fā)酵床分解效率高，用于飼料添加劑對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)改善明顯，提高動(dòng)物抵抗力，顯著降低發(fā)病率，應(yīng)用效果穩(wěn)定。
本發(fā)明還提供了一種能降低畜禽養(yǎng)殖中復(fù)合微生物應(yīng)用成本的發(fā)酵劑，其特點(diǎn)在于，其中各種原料菌均為擴(kuò)繁代數(shù)較低的菌液，例如本發(fā)明的發(fā)酵劑中，酵母菌采用第一代擴(kuò)繁母菌菌液，其他三種菌均采用第三代以內(nèi)的擴(kuò)繁菌液，且嚴(yán)格控制各種原料菌發(fā)酵時(shí)間和溫度，這樣做的目的在于使發(fā)酵劑中的細(xì)菌具有較穩(wěn)定的增殖活力，因?yàn)槲⑸镌诙啻鷶U(kuò)繁或擴(kuò)繁時(shí)間太長(zhǎng)之后，再以其為母菌擴(kuò)繁得到的生產(chǎn)用菌劑，其活性及性質(zhì)都不難以保持高效穩(wěn)定；而本發(fā)明提供的是發(fā)酵劑中的微生物最多擴(kuò)繁過兩次，用戶可以買少量的本發(fā)明的發(fā)酵劑自行進(jìn)行發(fā)酵擴(kuò)繁得到大量的可直接使用且效果保證的復(fù)合微生物發(fā)酵劑，而所用的培養(yǎng)液成本低廉，這樣養(yǎng)殖戶花在微生物發(fā)酵劑上的成本幾乎可以忽略不計(jì)。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，提供了復(fù)合微生物發(fā)酵劑中各種原料菌的優(yōu)選的發(fā)酵時(shí)間和溫度，本發(fā)明發(fā)明人通過一系列的對(duì)比試驗(yàn)，還得出了在上述其優(yōu)選的發(fā)酵時(shí)間和溫度下的得到各種原料菌菌液的最優(yōu)混合比例為酵母菌∶枯草芽孢桿菌∶納豆芽孢桿菌∶乳酸菌四種菌液按體積比3∶3∶3∶1，在這個(gè)比例下，能夠最大程度地發(fā)揮各種菌之間的協(xié)同作用，使本發(fā)明的復(fù)合微生物發(fā)酵劑的兼顧了分解效率高，用于飼料添加劑對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)改善最顯，提高動(dòng)物抵抗力、顯著降低發(fā)病率，應(yīng)用效果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明還提供上述復(fù)合微生物發(fā)酵劑在畜禽養(yǎng)殖發(fā)明的應(yīng)用方法，簡(jiǎn)明、經(jīng)濟(jì)、與本發(fā)明的發(fā)酵劑配套使用，能為廣大養(yǎng)殖戶在保證養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量的前提下極大限度地降低養(yǎng)殖成本。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供了本發(fā)明的復(fù)合微生物發(fā)酵劑在畜禽養(yǎng)殖各方面的應(yīng)用時(shí)的方法，但本發(fā)明的發(fā)酵劑的應(yīng)用不限于這些方法。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明采用的微生物菌種及其來源 釀酒酵母原菌(Saccharomyces cerevisiae CICC31011四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計(jì)院)。
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis CICC10036第一輕工業(yè)部發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所分離) 納豆芽孢桿菌菌株(Bacillus natto CICC20132上海市工業(yè)微生物研究所(B167)) 乳酸球菌(Lactococcus lactis CICC22861乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離(4.0610)) 以上四個(gè)菌株，本實(shí)驗(yàn)均有保存，自申請(qǐng)日起20年可向公眾發(fā)放，作為研究使用。
實(shí)施例1 (一)菌種的培養(yǎng) 1.酵母菌培養(yǎng)方法 培養(yǎng)液的配制酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.5％，生產(chǎn)罐中，加溫至90℃，在90℃以上保持2小時(shí)。然后冷卻至33℃左右。接入0.01％釀酒酵母原菌(Saccharomycescerevisiae CICC 31011四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計(jì)院)。
培養(yǎng)條件33℃～34℃下，攪拌培養(yǎng)12小時(shí)。
生產(chǎn)出的酵母菌液放入4℃冷藏待用。
2.枯草芽孢桿菌培養(yǎng)方法 2.1菌種的培養(yǎng) 2.1.1培養(yǎng)液的配制 平板固體培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.5％，葡萄糖0.5％，蛋白胨1％，Nacl 0.5％，瓊脂2％，加蒸餾水或無離子水稀釋，PH7.2。
液體培養(yǎng)基大豆蛋白胨2％，蔗糖2％，磷酸氫二鈉0.2％，磷酸二氫鈉0.1％，硫酸錳0.05％，氯化鈉0.2％，加蒸餾水或無離子水稀釋，放入三角瓶中，121℃高壓滅菌20分鐘。然后自然冷卻至30℃左右。
2.1.2菌種的擴(kuò)大培養(yǎng) 平板固體一級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)在無菌條件下，取一小塊凍干菌種(Bacillus subtilis CICC 10036第一輕工業(yè)部發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所分離)用0.5ml滅菌蒸餾水或無離子水稀釋溶解，然后把其均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，放入31℃～32℃恒溫箱中至48小時(shí)以上。在無菌條件下，把一級(jí)培養(yǎng)的菌種用滅菌蒸餾水或無離子水沖洗放入無菌容器中待用。
液體二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)在無菌條件下，把一級(jí)培養(yǎng)的菌液按0.5％接入液體培養(yǎng)基中，31℃～32℃下，180～200rpm培養(yǎng)33小時(shí)。
2.2生產(chǎn)用枯草芽孢桿菌液的方法 2.2.1培養(yǎng)液的配制 5％豆粕，蔗糖2％，玉米面0.5％，氯化鈉0.2％，磷酸氫二鈉0.2％，磷酸二氫鈉0.1，硫酸錳0.05％。用膠體磨把上述物質(zhì)磨至小于80目顆粒，放入生產(chǎn)罐中，加溫至90℃，在90℃以上保持2小時(shí)，然后冷卻至31℃左右。
2.2.2接種量 往生產(chǎn)罐中接入1％二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)菌種液。
2.2.3培養(yǎng)條件 31℃～32℃下，攪拌培養(yǎng)33小時(shí)。
生產(chǎn)出的芽孢桿菌液放入4℃冷藏待用。
3.納豆芽孢桿菌的培養(yǎng)方法 納豆芽孢桿菌菌株(Bacillus natto CICC20132 上海市工業(yè)微生物研究所(B167))納豆芽孢桿菌的培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.5％，葡萄糖0.5％，蛋白胨1％，Nacl0.5％，PH7.2 納豆芽孢桿菌的培養(yǎng)方法同枯草芽孢桿菌的生產(chǎn)程序。
4.乳酸球菌擴(kuò)大培養(yǎng)方法 4.1菌種的培養(yǎng) 4.1.1培養(yǎng)液的配制 平板固體培養(yǎng)基酪蛋白胨1％，牛肉提取物1％，酵母提取物0.5％，葡萄糖0.5％，乙酸鈉0.5％，檸檬酸二氫0.2％，K2HPO40.2％，MgSO4.7H2O 0.02％，MnSO4.H2O 0.05％，瓊脂15％克，PH6.8。
液體培養(yǎng)基酪蛋白胨1％，牛肉提取物1％，酵母提取物0.5％，葡萄糖0.5％，乙酸鈉0.5％，檸檬酸二氫0.2％，K2HPO40.2％，MgSO4.7H2O 0.02％，MnSO4.H2O 0.05％，PH6.8。加蒸餾水或無離子水稀釋，放入可密封的瓶中，121℃高壓滅菌20分鐘。然后自然冷卻至36℃左右。
4.1.2菌種的擴(kuò)大培養(yǎng) 平板固體一級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)在無菌條件下，取一小塊凍干菌種(Lactococcus lactis CICC 22861乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離(4.0610))用0.5ml滅菌蒸餾水或無離子水稀釋溶解，然后把其均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，放入36℃～37℃無氧恒溫箱中至36小時(shí)。在無菌條件下，把一級(jí)培養(yǎng)的菌種用滅菌蒸餾水或無離子水沖洗放入無菌容器中待用。
液體二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)在無菌條件下，把一級(jí)培養(yǎng)的菌液按1％接入液體培養(yǎng)基中，把容器封口，36℃～37℃下，厭氧培養(yǎng)36小時(shí)。
4.2生產(chǎn)用乳酸菌液的方法 4.2.1培養(yǎng)液的配制 胰蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，葡萄糖0.5％，乙酸鈉0.5％，檸檬酸二氫0.2％，K2HPO40.2％，MgSO4.7H2O 0.02％，MnSO4.H2O 0.05％，PH6.8。放入生產(chǎn)罐中，加溫至90℃，在90℃以上保持2小時(shí)，然后冷卻至36℃左右。
4.2.2接種量 往生產(chǎn)罐中接入1％二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)菌種液。
4.2.3培養(yǎng)條件 36℃～37℃下，靜止培養(yǎng)36小時(shí) 生產(chǎn)出的芽孢桿菌液放入4℃冷藏待用。
實(shí)施例2組配復(fù)合微生物發(fā)酵劑 步驟1.把實(shí)施例1中制得的菌液按如下體積比例混合 枯草芽孢桿菌∶納豆芽孢桿菌∶酵母菌∶乳酸菌＝3∶3∶3∶1比例混合，按照萬分之一體積質(zhì)量比加入穩(wěn)定劑，分裝封口，在避光條件下保存。
穩(wěn)定劑為磷酸二氫鈉∶磷酸氫二鈉按質(zhì)量比2∶1混合配制而得。
步驟2.產(chǎn)品檢測(cè) 酵母菌活菌數(shù)≥108 枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≥107 納豆芽孢桿菌活菌數(shù)≥107 乳酸菌活菌數(shù)≥107 實(shí)施例3、復(fù)合微生物發(fā)酵劑的應(yīng)用 步驟1擴(kuò)繁 1.取10公斤以上的容器，如水缸、塑料桶、不銹鋼桶均可，要清洗干凈，不要有任何油膩、化學(xué)物質(zhì)殘留。
2.將1公斤紅糖倒入10公斤水中，攪拌至充分溶解并煮沸，然后自然冷卻到35℃左右，加入實(shí)施例2制得的復(fù)合微生物發(fā)酵劑1公斤，充分?jǐn)嚢韬?，自然培養(yǎng)。
3.培養(yǎng)過程中，環(huán)境溫度保持在30～35℃，每4～8小時(shí)攪拌一次，48小時(shí)后就成為微生態(tài)制劑。
4.培養(yǎng)好的菌液攪拌后，可用小礦泉水瓶舀出一瓶靜置觀察，擴(kuò)繁效果較好的菌液，數(shù)小時(shí)后會(huì)在瓶底出現(xiàn)一薄層白色沉淀物。
(二)注意事項(xiàng) 1.培養(yǎng)過程中，容器口最好用紙或紗布蓋上扎緊，不要一直敞口，以減少其它雜菌污染。
2.氣溫低，培養(yǎng)時(shí)間要加長(zhǎng)，如果環(huán)境溫度低于22℃，菌種停止生長(zhǎng)。
3.微生態(tài)制劑原液或擴(kuò)大培養(yǎng)的菌劑在保存和培養(yǎng)過程中要避免陽光照射，因陽光中的紫外線會(huì)殺死益生菌。
4.培養(yǎng)好的菌劑最好在3～7天內(nèi)用完，如暫用不完，應(yīng)密封低溫保存，保存期不要超過30天，如出現(xiàn)惡臭不要使用。用戶可根據(jù)自己的養(yǎng)殖需要來確定培養(yǎng)數(shù)量，盡量不要長(zhǎng)時(shí)間保存。
5.微生態(tài)制劑原液只能擴(kuò)大培養(yǎng)一次，不可多代次擴(kuò)繁，以免影響使用效果。
(三)使用方法 擴(kuò)大培養(yǎng)的菌劑可用于豬、雞的生態(tài)養(yǎng)殖。使用前，要充分搖勻。
在使用益生菌的過程中，飼料和飲水不要添加任何抗生素，如果出現(xiàn)病畜，要單獨(dú)隔離治療。若需全群用藥，暫時(shí)停止使用益生菌，直至停藥。
1.飲水初次使用，前10天飲水加量1％，10天后可維持在0.3～0.5％。
2.拌料菌液按0.5％加入全價(jià)料中，拌勻飼喂，當(dāng)天喂，當(dāng)天拌。也可用稀釋液直接料面噴施。
3.噴霧按0.1％稀釋，作為消毒液進(jìn)行雞舍帶畜消毒，可起到降塵和凈化環(huán)境的作用。
4.制作發(fā)酵飼料按照飼料∶水∶菌液∶紅糖＝100∶60∶1∶1的比例將所有的原料拌勻，裝入密封袋中，置于避光溫暖的地方發(fā)酵5-7天，開袋觀物料清爽，無霉變，有酒香味表明發(fā)酵成功。按喂料量的10％加入到全價(jià)料中，拌勻飼喂。發(fā)酵飼料開封后盡快用完，冬季不超過兩天，夏季不超過1天。
5.用于發(fā)酵床墊料 1公斤擴(kuò)繁后的菌液可以制作5立方的墊料，不用額外添加玉米面、麥麩或者紅糖等輔料。制作方法如下采用簡(jiǎn)單平鋪法，先在圈底鋪20公分的稻殼或玉米芯粉或軋短玉米秸桿，噴灑菌液和水，其上再鋪10公分的鋸末或稻殼或花生殼，噴水和菌液，并做適當(dāng)攪拌，使水分均勻。以此類推直到鋪滿圈體，80公分深，最后一層鋪鋸末10公分，其上噴水和菌液，攪拌使水分分布均勻，其上覆蓋麻袋或編織袋。3-7天后墊料下30公分溫度升到35℃以上就可以進(jìn)豬飼養(yǎng)。注擴(kuò)繁菌劑加上噴的水的總重量為墊料重量的30％～40％。
6以上用法可單獨(dú)使用，也可以組合使用。
長(zhǎng)期使用益生菌，可以達(dá)到增強(qiáng)免疫力，抑制細(xì)菌性疾病的發(fā)生，減少死淘，改善養(yǎng)殖環(huán)境，降低畜舍惡臭，并通過減少養(yǎng)殖用藥，達(dá)到提高肉質(zhì)品質(zhì)和安全的目的，從而提高養(yǎng)殖效益。
實(shí)施例4應(yīng)用實(shí)例及效果比較 1 材料與方法 選用棉桿粉、鋸末、稻殼為主要原料進(jìn)行配比，制作發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料 菌劑選取市面銷售較好的發(fā)酵床專用菌劑2種，標(biāo)識(shí)為菌劑1號(hào)(主要菌種組成為乳酸桿菌、芽孢桿菌、酵母菌、光合菌)、菌劑2號(hào)(主要成分為酵母菌、乳酸菌、光合菌、放線菌、霉菌)，與本發(fā)明實(shí)施例2制得的復(fù)合微生物發(fā)酵劑經(jīng)實(shí)施例3的方法擴(kuò)繁后得到的微生物制劑(3號(hào)菌劑)進(jìn)行對(duì)比研究。
三種菌劑的使用比例及方法同實(shí)施例3<使用方法>5所描述的方法。
試驗(yàn)動(dòng)物大長(zhǎng)、長(zhǎng)白二元雜交豬107頭，平均體重68公斤，飼養(yǎng)期30天 試驗(yàn)設(shè)計(jì)需要6個(gè)豬欄，菌種的評(píng)價(jià)試驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，3種菌劑×2個(gè)重復(fù)，共六個(gè)圈舍。
分組見下表1 2動(dòng)物飼養(yǎng)與墊料管理要求 自由落料食槽，自由采食，按欄計(jì)錄每日供料量。自動(dòng)飲水器自由飲水。每頭試驗(yàn)豬均要做好耳號(hào)標(biāo)記，單只稱重。飼料營(yíng)養(yǎng)水平一致，免疫程序相同。
3測(cè)定指標(biāo) 生產(chǎn)性能指標(biāo)日增重、日耗料、料重比 發(fā)酵墊料床運(yùn)行狀況 溫度測(cè)定每周分別測(cè)定發(fā)酵床表面和深度10cm、30cm、50cm的溫度，每圈選取5個(gè)點(diǎn)；同時(shí)測(cè)定圈舍內(nèi)外溫度、濕度。
墊料含水量與碳氮比的樣品同時(shí)采集，采用國(guó)標(biāo)法《飼料中水分的測(cè)定方法》檢測(cè)墊料中的水分含量。
細(xì)菌總數(shù)與碳氮比的樣品同時(shí)采集，采用血球板計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌總數(shù)pH值 4數(shù)據(jù)分析 采用spss10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，對(duì)試驗(yàn)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
5研究結(jié)果及分析 5.1墊料床生產(chǎn)性能研究測(cè)定 試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，不同菌劑制作的墊料床對(duì)育肥豬的生產(chǎn)性能影響存在明顯差異，研究所選3種商品菌劑，其中3號(hào)菌劑具有較好的生產(chǎn)性能，其日增重和日耗料以及料重比指標(biāo)均明顯優(yōu)于其它兩種菌，見表2。料重比分別比1號(hào)和2號(hào)菌降低14.2％和9.0％。
表2使用不同發(fā)酵劑制作的發(fā)酵床對(duì)豬生產(chǎn)性能的影響
5.2墊料運(yùn)行過程中活菌總數(shù)的變化規(guī)律 對(duì)養(yǎng)殖過程中各種墊料中活菌總數(shù)的變化規(guī)律進(jìn)行了跟蹤測(cè)定，測(cè)定方法是血球板計(jì)數(shù)。
取樣方法在每個(gè)欄舍內(nèi)按照5點(diǎn)采樣的原則采集樣品，直接取0-15厘米表層充分混勻后，按照四分法，取1份裝袋，用于指標(biāo)的測(cè)定。
數(shù)據(jù)分析顯，見表3，墊料中總菌數(shù)隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，平均每周每克墊料增加1.5-2.5億活菌。
表3不同發(fā)酵劑制作的墊料中活菌總數(shù)隨時(shí)間變化測(cè)定值(億/克)
數(shù)據(jù)顯示不同菌劑制作的墊料活菌總數(shù)的變化規(guī)律基本一致，但菌數(shù)存在差異，菌劑3墊料活菌含量明顯高于菌劑2和1，菌劑2活菌數(shù)最低。說明不同菌劑存在差異，菌劑3活性更強(qiáng)，繁殖力抗逆性均明顯由于另外兩種菌劑。
后期活菌總數(shù)的巨大波動(dòng)是因?yàn)闇y(cè)定方法不同導(dǎo)致的試驗(yàn)誤差，非墊料床實(shí)際情況。5.3墊料養(yǎng)殖過程中墊料床溫度的變化規(guī)律 表4不同菌種制作的墊料床各位置各深度墊料溫度平均值(℃)
不同菌劑的墊料床遵循相同變化規(guī)律，1#和3#菌劑床溫度測(cè)定值基本一致，而2號(hào)菌劑床溫明顯偏低，全期平均偏低2.7度。說明不同菌劑制作墊料床確有差異。墊料床的溫度積溫反映其中微生物繁殖繁殖的活躍程度，床溫較高的發(fā)酵床對(duì)豬糞便的酵解能力較高，這與墊料中總菌數(shù)的測(cè)定結(jié)果相符。說明本發(fā)明菌劑的活躍程度較高，糞便酵解能力較強(qiáng)。
5.4墊料應(yīng)用過程中pH值的變化 試驗(yàn)對(duì)墊料養(yǎng)殖過程中墊料pH值的變化進(jìn)行了跟蹤監(jiān)測(cè)，每周取樣，樣品中稱取1.0克，置于100ml燒杯中，加40ml去離子水。浸漬30min后用Thermo Orion酸度計(jì)測(cè)定溶液pH值。結(jié)果如下 表5不同菌劑制作的發(fā)酵床pH變化
墊料的pH值反映墊料中的酸堿性，酸性過高過低均不利于墊料中細(xì)菌的繁殖和生長(zhǎng)，不同的菌種組合可能在墊料中形成較好的共生自穩(wěn)態(tài)，維持較適宜的酸堿性，保證自身的正常生長(zhǎng)和繁殖。
從表5中的數(shù)據(jù)顯示，排除測(cè)定或取樣誤差，60天左右3種菌劑的pH沒有明顯差異，但隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，2號(hào)菌劑pH明顯高于3號(hào)菌和1號(hào)菌，反應(yīng)出2號(hào)菌的酵解能力不如3號(hào)菌。
5.5墊料應(yīng)用過程中水分含量的變化 墊料的含水量很大程度上決定著墊料床應(yīng)用的成功與否，含水量太低，不僅會(huì)導(dǎo)致菌劑活性降低，而且大量的粉塵會(huì)增加豬罹患呼吸道疾病。而水分過高，又會(huì)細(xì)菌繁殖受到嚴(yán)重抑制，床面承載能力迅速降低，最終導(dǎo)致墊料床全面潰敗。因此確切了解發(fā)酵床運(yùn)行的適宜含水量，對(duì)于床面的養(yǎng)護(hù)至關(guān)重要。
表6不同菌種的墊料床水分變化(％)
研究發(fā)現(xiàn)，墊料床制作初期含水量60％左右，隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，墊料中的水分不斷蒸發(fā)，含水量逐漸下降，4-5周以后，含水量基本維持在40％-50％，豬的糞尿水分與發(fā)酵床蒸發(fā)水分達(dá)到了基本平衡，床面狀況較好。
不同菌劑對(duì)墊料的含水量存在一定的影響，在同樣的飼養(yǎng)密度下，2號(hào)菌組有一個(gè)圈出現(xiàn)水分升高，說明墊料的承載力明顯下降，處于崩潰的邊緣，而1號(hào)菌和3號(hào)菌水分比較適宜，沒有死床的風(fēng)險(xiǎn)。
結(jié)論 通過試驗(yàn)研究表明，采用本發(fā)明研制的復(fù)合微生物發(fā)酵劑，不僅可以顯著提高豬的生產(chǎn)性能，而且可以維持發(fā)酵床墊料正常的發(fā)酵狀態(tài)，保證糞尿的高效酵解，降低墊料的養(yǎng)護(hù)和使用成本。這在生產(chǎn)應(yīng)用上具有十分重要的意義。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑，其中的活性微生物包括酵母菌、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、納豆芽孢桿菌(Bacillus natto)和乳酸菌，所述酵母菌為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，所述乳酸菌為乳酸球菌(Lactococcus lactis)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物發(fā)酵劑，所述酵母菌為在液體培養(yǎng)基中按體積比0.01％接入酵母原菌，33℃～34℃下培養(yǎng)10～15小時(shí)制得菌液；
所述枯草芽孢桿菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接種二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌菌種液，31℃～32℃下，培養(yǎng)30～35小時(shí)所得的菌液；
所述納豆芽孢桿菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接種二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的納豆芽孢桿菌菌種液，31℃～32℃下，培養(yǎng)30～35小時(shí)所得的菌液；
所述乳酸菌為在液體培養(yǎng)基中按1％接入二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的乳酸菌菌種液，36℃～37℃下，靜止培養(yǎng)30～40小時(shí)所得的菌液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合微生物發(fā)酵劑，所述酵母菌、枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、乳酸菌四種菌液按體積比3∶3∶3∶1混合。
4.權(quán)利要求1或2或3所述的復(fù)合微生物發(fā)酵劑在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于先對(duì)所述復(fù)合微生物發(fā)酵劑進(jìn)行擴(kuò)繁得到擴(kuò)繁菌劑，所述擴(kuò)繁步驟如下
(1)將紅糖與水按重量份比1∶10混合并攪拌至充分溶解，冷卻到34～36℃；
(2)加入所述復(fù)合微生態(tài)發(fā)酵劑1份，充分?jǐn)嚢?，置?0～35℃環(huán)境中，每4～8小時(shí)攪拌一次，培養(yǎng)45～50個(gè)小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，指用于畜禽飲水，其特征在于使用的前10天，在飲水中按1％加入擴(kuò)繁菌劑，第10天后可加入量為0.3～0.5％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，指所述擴(kuò)繁菌劑按0.5％加入全價(jià)料中，所述加入指與全價(jià)料拌勻或噴施在全價(jià)料表面。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，指所述擴(kuò)繁菌劑按0.1％稀釋，噴施在畜禽的養(yǎng)殖環(huán)境中進(jìn)行消毒。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，指按照飼料∶水∶擴(kuò)繁菌劑∶紅糖＝100∶60∶1；1的體積比拌勻，裝入密封袋中避光發(fā)酵5-7天得到發(fā)酵飼料，按喂料量的10％將所述發(fā)酵飼料加入到全價(jià)料中，拌勻飼喂畜禽。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，指制作發(fā)酵床墊料，所述擴(kuò)繁菌劑與墊料原料的質(zhì)量體積比1kg∶5M3，所述墊料原料和菌劑常溫混合發(fā)酵，至墊料原料堆內(nèi)部溫度升到35℃以上后用于畜禽飼養(yǎng)，所述菌劑為擴(kuò)繁菌劑與水混合成，所述菌劑占?jí)|料重量的30～40％。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，所述混合發(fā)酵指先在圈底鋪20厘米厚的稻殼、玉米芯粉或/和軋短玉米秸桿，噴灑菌劑，再鋪10公分的鋸末、稻殼或/和花生殼，噴菌劑，以此循環(huán)鋪至80厘米厚，最后鋪10厘米厚的鋸末，表面噴菌劑，然后覆蓋麻袋或編織袋，待墊料下30公分溫度升到35℃以上即可。
全文摘要
本發(fā)明“一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑及其應(yīng)用”，屬于有益微生物制劑的低成本化應(yīng)用。一種復(fù)合微生物發(fā)酵劑，其中的活性微生物包括酵母菌、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、納豆芽孢桿菌(Bacillus natto)和乳酸菌，所述酵母菌為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，所述乳酸菌為乳酸球菌(Lactococcus lactis)。可用于畜禽養(yǎng)殖床、飼料添加劑等方面，其特點(diǎn)在于降低了用戶在發(fā)酵劑上的成本投入，且效果穩(wěn)定。
文檔編號(hào)A01K1/015GK101760431SQ20101003372
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2010年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月5日
發(fā)明者王海宏, 潘裕華, 劉華貴, 耿愛蓮, 張劍, 初芹, 肖銀花 申請(qǐng)人:北京市農(nóng)林科學(xué)院