專利名稱：：甜高粱組織培養(yǎng)的方法及其專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種甜高粱組織培養(yǎng)的方法及其專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：高粱(Sorghumbicolor(L.)Moench)是世界范圍內(nèi)繼小麥、水稻、玉米和大麥之后位居第五位的重要谷物。長期以來，在亞洲、非洲和美洲的高溫少雨地區(qū)，高粱作為一種多用途作物而被廣泛種植，以提供糧食、飼料、燃料、釀酒以及工業(yè)用淀粉。由于化石能源資源的大量使用所帶來的能源資源枯竭、環(huán)境污染，以及面臨全球C02減排的巨大壓力，生物質(zhì)能源的需求在不斷增加。甜高粱作為高粱的一個變種，由于其莖稈汁液中富含糖分，生物量高，抗逆性強，已成為一種重要的能源作物正逐漸受到人們的極大關(guān)注。直到現(xiàn)在，對甜高粱農(nóng)藝性狀的改良主要還是通過傳統(tǒng)的植物育種方法，而遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的應(yīng)用必將極大地促進甜高粱的種質(zhì)改良。此外，甜高粱的遺傳轉(zhuǎn)化在甜高粱分子遺傳學(xué)和分子育種等基礎(chǔ)理論研究中也處于重要的地位。常用的基因槍或者農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法都依賴于植物組織培養(yǎng)技術(shù)，而高效的離體培養(yǎng)再生體系的建立是成功實現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化的前提和保證。高粱被認(rèn)為是組織培養(yǎng)及再生最困難的植物之一。因此，高粱的遺傳轉(zhuǎn)化研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他谷類作物。盡管國內(nèi)外有以高粱幼穗、幼胚、成熟種子、莖尖分生組織、成熟胚等作為外植體而建立高粱再生體系的報道，但由于基因型依賴性反應(yīng)、酚類或者色素物質(zhì)的產(chǎn)生，其再生效率低并遇到煉苗困難等問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、維生素C、2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、ZT(玉米素)、蔗糖和凝膠劑。上述MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示；表1.MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為0.3-lg/L，脯氨酸的終濃度為0.3-lg/L，PVP的終濃度為50-200mg/L，維生素C的終濃度為5_20mg/L，2，4_D的終濃度為1.Omg/L-4.Omg/L，ZT的終濃度為0.l_4mg/L，蔗糖的終濃度為20_40g/L。進一步，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為100mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，2，4_D的終濃度為1.Omg/L-4.Omg/L，ZT的終濃度為0.lmg/L-4mg/L，蔗糖的終濃度為30g/L。上述凝膠劑可以為瓊脂，瓊脂的用量以培養(yǎng)基能成為固體培養(yǎng)基為準(zhǔn)。該培養(yǎng)基中瓊脂的終濃度為8g/L，培養(yǎng)基的pH可為5.8。更進一步，上述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中2，4_D和ZT的終濃度分別是如下1)或2)或3)或4)或5):1)2，4-D為l-3mg/L，ZT為0.l_4mg/L;2)2，4-D為2.Omg/L，ZT為Omg/L;3)2，4-D為2.Omg/L，ZT為lmg/L;4)2，4-D為2.Omg/L，ZT為2.Omg/L;5)2，4-D為2.Omg/L，ZT為4.Omg/L。本發(fā)明的另一目的在于提供一種生產(chǎn)甜高粱再生苗的方法。本發(fā)明提供的方法，包括以下步驟1)將外植體置于上述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)，得到愈傷組織；2)將步驟1)中得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得到增殖的愈傷組織；3)將步驟2)中得到的增殖的愈傷組織置于再生分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到分化苗；4)將步驟3)中得到的分化苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到生根的再生苗。上述步驟1)和步驟2)的培養(yǎng)條件均為暗培養(yǎng)，溫度是25±1°C;步驟3)的培養(yǎng)條件為光照強度是25ymo1m—2s—、光照時間為16小時/天，溫度25±1°C;步驟4)的培養(yǎng)條件為光照強度是22ymo1m—2s—、光照時間為16小時/天，溫度25±rc。進一步，上述步驟2)的繼代培養(yǎng)基為上述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。進一步，上述步驟3)的再生分化培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、PVP、維生素C、6-BA(6-芐基氨基腺嘌呤)、KT(激動素)、IAA(吲哚乙酸)、蔗糖和凝膠劑。MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。再生分化培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為0.3-1.0g/L，脯氨酸的終濃度為0.3-1.0g/L，PVP的終濃度為5-50mg/L，維生素C的終濃度為5-20mg/L，6-BA的終濃度為0.5mg/L-3mg/L，KT的終濃度為0.lmg/L-lmg/L，IAA的終濃度為0.lmg/L-lmg/L，蔗糖的終濃度為20-40g/L。上述凝膠劑可為瓊脂，瓊脂的用量以培養(yǎng)基能成為固體培養(yǎng)基為準(zhǔn)。該培養(yǎng)基中瓊脂的終濃度具體為8g/L，培養(yǎng)基的pH可為5.8。進一步，再生分化培養(yǎng)基中水解酪蛋白、脯氨酸、PVP、維生素C、6-BA、KT、IAA和蔗糖的終濃度分別是水解酪蛋白為0.5g/L，脯氨酸為0.6g/L，PVP為10mg/L，維生素C為10mg/L，6-BA為2mg/L，KT為0.5mg/L，IAA為0.5mg/L，蔗糖為30g/L。進一步的，步驟4)的生根培養(yǎng)基是在1/2MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加NAA(萘乙酸)、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基。所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)與表1所示的MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)相同，所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度是所述MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度的一半，其余溶質(zhì)(微量元素、有機元素和鐵鹽)濃度不變。生根培養(yǎng)基中NAA的終濃度為0.lmg/L-2mg/L，蔗糖的終濃度為15g/L，瓊脂的終濃度可為8g/L;其中NAA的終濃度優(yōu)選為0.5mg/L，生根培養(yǎng)基的pH為5.8。進一步的，上述外植體為甜高粱幼穗。所述甜高粱幼穗是經(jīng)過預(yù)處理的，所述預(yù)處理是在甜高粱幼穗上加洗滌劑后在流動的自來水下沖洗30分鐘左右，再用75%(體積百分比)的乙醇滅菌約2-3分鐘，接著用0.1%(質(zhì)量百分比)的升汞滅菌10-15分鐘進行消毒，然后用無菌水沖洗至少一次。上述甜高粱幼穗是指幼穗分化第IV期-第VI期的幼穗。上述甜高粱是凱勒(Sorghumbicolor(L.)Moench'Keller，)。上述生產(chǎn)甜高粱再生苗的方法，還可以包括將步驟4)得到的再生苗煉苗后，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中生長培養(yǎng)，獲得再生植株。進一步的，基質(zhì)包括蛭石和泥土，所述蛭石和泥土的比例為1:1。更進一步的，生長培養(yǎng)的1-2周內(nèi)保持空氣濕度為80%以上。本發(fā)明的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基可有效地誘導(dǎo)甜高粱幼穗的愈傷組織。本發(fā)明的方法是用甜高粱幼穗進行組織培養(yǎng)得到再生體系的，本發(fā)明方法建立的再生體系再生效率高，可達到90%以上，并且非常穩(wěn)定，重復(fù)性良好，完全能滿足遺傳轉(zhuǎn)化對受體系統(tǒng)再生頻率的要求(80%以上)，生產(chǎn)的再生植株形態(tài)正常、一致，遺傳穩(wěn)定性好。圖1為甜高粱幼穗誘導(dǎo)的愈傷組織；圖2為甜高粱幼穗誘導(dǎo)的愈傷組織的再生分化的分化苗；圖3為再生分化苗的生根培養(yǎng)；圖4為移栽成活后的甜高粱再生植株。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。下述實施例中，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實施例1、甜高粱再生苗的獲得及其統(tǒng)計觀察—、甜高粱再生苗的獲得1、愈傷組織的制備及統(tǒng)計觀察1)外植體的預(yù)處理以甜高粱品種凱勒(Sorghumbicolor(L.)Moench'Keller')的幼穗(幼穗分化第IV期-第VI期)為外植體。預(yù)處理具體操作先挑選生長健壯的甜高粱植株，采取帶葉的10cm長度以下的甜高粱幼穗，加入洗滌劑將材料表面塵土清洗干凈后，在流動的自來水下沖洗30分鐘左右，然后于超凈工作臺中進行消毒處理，先用75%(體積百分比)的乙醇滅菌2-3分鐘，再用0.1%(質(zhì)量百分比)的升汞滅菌10-15分鐘，最后用無菌水清洗4-5次。2)愈傷組織的獲得將上述步驟1)中預(yù)處理好的外植體甜高粱幼穗剝?nèi)グ谟姿胪庵艿娜~組織，將幼穗的小枝梗從主穗軸上摘取，接種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，兩周后愈傷組織塊開始形成，可獲得愈傷組織。其中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、PVP、維生素C、2，4-D、ZT、蔗糖和瓊脂；其中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為100mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，2，4-D的終濃度為2.0mg/L，ZT的終濃度為0mg/L，蔗糖的終濃度為30g/L，瓊脂的終濃度為8g/L;該培養(yǎng)基的pH為5.8;其中MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。培養(yǎng)條件是暗培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度控制在25±1°C。3)統(tǒng)計觀察上述實驗重復(fù)3次，實驗結(jié)果如圖1和表2所示。由表2可知外植體對該愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基反應(yīng)良好，愈傷誘導(dǎo)效率高。表2.愈傷組織誘導(dǎo)率統(tǒng)計7重復(fù)外植體(個)I30II30in30愈傷組織(塊)愈傷組織誘導(dǎo)率(％)3010030100301002、繼代培養(yǎng)將上述步驟2)中得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每兩周繼代一次，培養(yǎng)一個月后，可得到大量增殖的愈傷組織。其中繼代培養(yǎng)基與愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基一樣，即為同一培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)條件也和上述步驟2)—樣。3、再生分化培養(yǎng)獲得分化苗及其統(tǒng)計觀察1)再生分化培養(yǎng)獲得分化苗將上述步驟2中繼代培養(yǎng)得到的愈傷組織接種到再生分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每兩周繼代培養(yǎng)一次，培養(yǎng)一個月后，可獲得再生苗。其中，再生分化培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、6-BA、KT、IAA、蔗糖和瓊脂；其中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為10mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，6-BA的終濃度為2mg/L，KT的終濃度為0.5mg/L，IAA的終濃度為0.5mg/L，蔗糖的終濃度為30g/L，瓊脂的終濃度為8g/L，該培養(yǎng)基的pH為5.8;其中MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。培養(yǎng)條件是將培養(yǎng)瓶放置在光照強度為25iimo1m-2s-l的條件下培養(yǎng)，光照時間為16小時/天，培養(yǎng)室溫度控制在25±rc。2)統(tǒng)計觀察對再生分化培養(yǎng)的愈傷組織的再生分化情況進行觀察，并統(tǒng)計再生分化率，實驗重復(fù)3次，實驗觀察如圖2所示，統(tǒng)計結(jié)果見下表3。由表3可知愈傷組織在該培養(yǎng)基上可以獲得高效再生分化。表3.再生分化率統(tǒng)計重復(fù)IIIIII愈傷組織(塊)303030再生分化苗數(shù)(株)292828再生分化率(％)96.793.393.34、生根培養(yǎng)得到再生苗及其統(tǒng)計觀察81)生根培養(yǎng)得到再生苗將上述步驟3中芽分化良好的分化苗轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，兩周以后，可獲得生根良好的再生苗。其中，生根培養(yǎng)基是在1/2MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加NAA、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中NAA的終濃度為0.5mg/L，蔗糖的終濃度為15g/L，瓊脂的終濃度為8g/L;此生根培養(yǎng)基的pH為5.8;所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)與表1所示的MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)相同，所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度是所述MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度的一半，其余溶質(zhì)濃度不變。培養(yǎng)條件為光照強度是22iimo1m—2s—、光照時間為16小時/天，溫度25±1°C。2)統(tǒng)計觀察對上述生根培養(yǎng)得到再生苗的生根情況進行觀察，并統(tǒng)計其生根率。實驗重復(fù)3次，實驗觀察如圖3所示，統(tǒng)計結(jié)果見下表4。由表4可知再生分化苗在該生根培養(yǎng)基上可以較好地生根。表4.生根率的統(tǒng)計重復(fù)IIIIII再生分化苗數(shù)(株)202020誘導(dǎo)生根的苗數(shù)(株)161816生根率(％)8090805、煉苗移栽獲得再生植株及其統(tǒng)計觀察1)煉苗移栽獲得再生植株將上述步驟4得到的已生根的再生苗煉苗后，再將再生苗從培養(yǎng)瓶中取出，并將殘留在再生苗根系的培養(yǎng)基沖洗干凈，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中進行生長培養(yǎng)，便可獲得再生植株。其中，煉苗的具體步驟為將裝有再生苗的培養(yǎng)瓶的封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)，溫度為25士rC，光照強度為25iimo1m—2s—1的條件下，煉苗2天。移栽用的基質(zhì)為蛭石和泥土的混合物，其中蛭石和泥土的比例為1:l，移栽后進行生長培養(yǎng)的1-2周內(nèi)要求保持空氣濕度為80%以上。2)統(tǒng)計觀察對以上煉苗移栽獲得再生植株的煉苗移栽情況進行觀察，并統(tǒng)計其成活率。實驗重復(fù)3次，實驗觀察如圖4所示，統(tǒng)計結(jié)果見下表5。由表5可知經(jīng)煉苗移栽后，已生根的再生分化苗全部移栽成活。表5.成活率統(tǒng)計重復(fù)IIIIII已生根的再生苗數(shù)(株)151515移栽成活的再生植株數(shù)(株)151515成活率(％)100100100實施例2、甜高粱再生苗的獲得本實施例與實施例1的區(qū)別在于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其余步驟完全相同本實施例的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、維生素C、2，4-D、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基，其中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為100mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，2，4-D的終濃度為2.Omg/L，ZT的終濃度為1.Omg/L，蔗糖的終濃度為30g/L，瓊脂的終濃度為8g/L;該培養(yǎng)基的pH為5.8;其中MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。實驗結(jié)果見表6，從表6可以看出，與實施例1相比，實施例2同樣可以獲得高愈傷組織誘導(dǎo)率、再生分化率，生根率及移栽成活率。表6.實施例2甜高粱幼穗的組織培養(yǎng)效果重復(fù)IIIIII外植體(個)303030愈傷組織(塊)303030愈傷組織誘導(dǎo)率(％)100100100再生分化苗數(shù)(株)272827再生分化率(％)9093.3卯誘導(dǎo)生根的苗數(shù)(株)252425生根率(％)92.685.792.6已生根的再生苗數(shù)(株)202020移栽成活的再生植株數(shù)(株)202020成活率(％)100100100實施例3、甜高粱再生苗的獲得本實施例與實施例1的區(qū)別在于采用的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基不同，其余步驟完全相同本實施例的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加水解酪蛋白、脯氨酸、PVP、維生素C、2，4-D、ZT、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基，其中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為10mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，2，4-D的終濃度為2.Omg/L，ZT的終濃度為2.Omg/L，蔗糖的終濃度為30g/L，瓊脂的終濃度為0.8%;該培養(yǎng)基的pH為5.8;其中MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。實驗結(jié)果見表7，從表7可以看出，與實施例1、實施例2相比，實施例3同樣可獲得高愈傷組織誘導(dǎo)率、再生分化率，生根率及成活率。10表7.實施例3甜高粱幼穗的組織培養(yǎng)效果重復(fù)iIIIII外植體(個)303030愈傷組織(塊)303030愈傷組織誘導(dǎo)率(％)100100100再生分化苗數(shù)(株)292728再生分化率(％)96.7卯93.3誘導(dǎo)生根的苗數(shù)(株)272627《賸93.196.396.4已生根的再生苗數(shù)(株)202020移栽成活的再生植株數(shù)(株)202020成活率(％)100100腦實施例4、甜高粱再生苗的獲得本實施例與實施例1的區(qū)別在于以下一點，其余步驟完全相同1、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加水解酪蛋白、脯氨酸、PVP、維生素C、2，4-D、ZT、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基，其中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，PVP的終濃度為10mg,/L，維生素C的終濃度為lOmg,U，4-D的終濃度為2.Omg/L，ZT的終濃度為4.Omg/L，蔗糖的終濃度為30g,ZL，瓊脂的終濃度為8g/L;該培養(yǎng)基的pH為5.8;其中MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。將實驗結(jié)果見表8，從表8可以看出，與實施例1、實施例2和實施例3相比，實施例4同樣可獲得高愈傷組織誘導(dǎo)率、再生分化率，生根率及成活率。表8.實施例4甜高粱幼穗的組織培養(yǎng)效果重復(fù)IIIIII外植體(個)303030愈傷組織(塊)303030愈傷組織誘導(dǎo)率(％)100100100再生分化苗數(shù)(株)282728再生分化率(％)93.39093.3誘導(dǎo)生根的苗數(shù)(株)262526《撒92.992.692.9己生根的再生苗數(shù)(株)202020移栽成活的再生植株數(shù)(株)202020成活率(％)1001001001權(quán)利要求一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，它是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、2，4-D、ZT、蔗糖和凝膠劑；所述MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示；所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為0.3-1.0g/L，脯氨酸的終濃度為0.3-1.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮的終濃度為50-200mg/L，維生素C的終濃度為5-20mg/L，2，4-D的終濃度為1.0mg/L-4.0mg/L，ZT的終濃度為0.1-4mg/L，蔗糖的終濃度為20-40g/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為0.6g/L，聚乙烯吡咯烷酮的終濃度為100mg/L，維生素C的終濃度為10mg/L，2，4-D的終濃度為1.0mg/L-4.Omg/L，ZT的終濃度為0.1-4mg/L，蔗糖的終濃度為30g/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基中2，4-D和ZT的終濃度分別是如下1)或2)或3)或4)或5):1)2，4-D為l-3mg/L，ZT為0.l-4mg/L;2)2，4-D為2.Omg/L，ZT為Omg/L;3)2，4-D為2.Omg/L，ZT為lmg/L;4)2，4-D為2.Omg/L，ZT為2.Omg/L;5)2，4-D為2.Omg/L，ZT為4.Omg/L。4.一種生產(chǎn)甜高粱再生苗的方法，包括以下步驟1)將外植體置于權(quán)利要求1-3中任一所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)，得到愈傷組織；2)將步驟1)中得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得到增殖的愈傷組織;3)將步驟2)中得到的增殖的愈傷組織置于再生分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到分化苗；4)將步驟3)中得到的分化苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到生根的再生苗。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟l)和步驟2)的培養(yǎng)條件均為暗培養(yǎng)，溫度是25士rc;步驟3)的培養(yǎng)條件為光照強度是25ymo1m—2s—、光照時間為16小時/天，溫度25±rc;步驟4)的培養(yǎng)條件為光照強度是22ymo1m—2s—、光照時間為16小時/天，溫度25士rc。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于所述步驟2)的繼代培養(yǎng)基為權(quán)利要求1-3中任一所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；所述步驟3)的再生分化培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、6-BA、KT、IAA、蔗糖和凝膠劑；所述MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示；所述再生分化培養(yǎng)基中水解酪蛋白的終濃度為O.3-1.0g/L，脯氨酸的終濃度為0.3-1.Og/L，聚乙烯吡咯烷酮的終濃度為5-50mg/L，維生素C的終濃度為5-20mg/L，6-BA的終濃度為0.5mg/L-3mg/L，KT的終濃度為0.lmg/L-lmg/L，IAA的終濃度為0.lmg/L-lmg/L，蔗糖的終濃度為20-40g/L。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的再生分化培養(yǎng)基中水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、6-BA、KT、IAA和蔗糖的終濃度分別是水解酪蛋白為0.5g/L，脯氨酸為0.6g/L，聚乙烯吡咯烷酮為10mg/L，維生素C為10mg/L，6-BA為2mg/L，KT為0.5mg/L，IAA為0.5mg/L，蔗糖為30g/L。8.根據(jù)權(quán)利要求4-7中任一所述的方法，其特征在于所述步驟4)的生根培養(yǎng)基是在1/2MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加NAA、蔗糖和瓊脂得到的培養(yǎng)基；所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)與表1所示的MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)相同，所述1/2MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度是所述MS基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)中的大量元素的濃度的一半，其余溶質(zhì)濃度不變；所述生根培養(yǎng)基中NAA的終濃度為0.lmg/L-2mg/L，蔗糖的終濃度為15g/L，瓊脂的終濃度為8g/L;其中NAA的終濃度優(yōu)選為0.5mg/L。9.根據(jù)權(quán)利要求4-8中任一所述的方法，其特征在于所述外植體為甜高粱幼穗；所述甜高粱幼穗是指幼穗分化第IV期-第VI期的幼穗；所述甜高粱是凱勒(Sorghumbicolor(L.)Moench'Keller，)。10.根據(jù)權(quán)利要求4-9中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括將步驟4)得到的再生苗煉苗后，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中生長培養(yǎng)，獲得再生植株；所述基質(zhì)包括蛭石和泥土，所述蛭石和泥土的比例為1:1;所述生長培養(yǎng)的l-2周內(nèi)保持空氣濕度為80%以上。全文摘要本發(fā)明公開了一種甜高粱組織培養(yǎng)的方法及其專用培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的專用培養(yǎng)基是甜高粱幼穗組織培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)的專用培養(yǎng)基，是在MS基本培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，添加水解酪蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、維生素C、2，4-D、ZT、蔗糖和凝膠劑得到的培養(yǎng)基；其中水解酪蛋白的終濃度為0.3-1g/L，脯氨酸的終濃度為0.3-1g/L，PVP的終濃度為150-200mg/L，維生素C的終濃度為5-20mg/L，2，4-D的終濃度為1.0mg/L-4.0mg/L，ZT的終濃度為0.1mg/L-4mg/L，蔗糖的終濃度為20-40g/L。本發(fā)明的方法是利用甜高粱幼穗為外植體建立組織培養(yǎng)體系，得到再生植株。本發(fā)明的方法及專用培養(yǎng)基可得到穩(wěn)定，重復(fù)性良好的高效再生體系。文檔編號A01H4/00GK101766122SQ20091024463公開日2010年7月7日申請日期2009年12月31日優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日發(fā)明者劉宣雨,劉樹君,宋松泉,趙利銘申請人:中國科學(xué)院植物研究所