專利名稱：茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物快繁方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖。
背景技術(shù)：
茛力花(Acanthus mollis L.)為爵床科爵床屬多年生草本，常綠，是希臘的國(guó)花。 葉片碩大，長(zhǎng)可達(dá)60cm，葉面有光澤，深波紋狀。花苞長(zhǎng)達(dá)0. 5cm，紫紅色，花粉白色，開花時(shí) 節(jié)，花朵從紫紅色花苞中抽出，生動(dòng)乖巧，故俗名"金蟬脫殼"。穗狀花序，高聳艷麗，花序可 長(zhǎng)達(dá)1米，奪人眼球。寬大的翠綠葉片和挺拔的花序構(gòu)成了典雅大氣的風(fēng)韻，是一種雅俗共 賞的花卉。在5月下旬至7月上旬開花，花期兩個(gè)月左右，可進(jìn)一步豐富夏季景觀，提升園 林品質(zhì)，是良好的庭院及花壇背景植物，也可以孤植。 茛力花喜充分陽(yáng)光，喜排水良好的土壤，耐寒、耐熱、不擇土壤、具有良好的觀賞特 性和景觀效果，冬夏兩季均能在上海露地生長(zhǎng)，今后在上海及周邊地區(qū)具有良好的推廣及 應(yīng)用前景。茛力花目前國(guó)內(nèi)數(shù)量不多，引種價(jià)格昂貴，分株、切根等繁殖速度慢，年增殖系數(shù) 僅有5，繁殖周期長(zhǎng)，且受季節(jié)限制，不利于優(yōu)良種苗的推廣。因此我們采用了離體培養(yǎng)的方 式，探索其快速繁殖技術(shù)，解決茛力花在園林應(yīng)用中的瓶頸所在。目前，除了生物學(xué)觀察及 栽培方面，有零星報(bào)道之外，其系統(tǒng)的離體培養(yǎng)尚未見，開展茛力花離體培養(yǎng)的研究以及進(jìn) 一步抗逆植株的篩選工作，對(duì)推廣茛力花在綠地中的應(yīng)用具有開創(chuàng)性意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，可 在離體條件下快速繁殖茛力花，且生產(chǎn)的茛力花種苗品質(zhì)高， 一致性好。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采取的技術(shù)方案是一種茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖 的方法，取茛力花外植體經(jīng)初始培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)獲得試管苗，進(jìn)行移 栽，其中所用到的培養(yǎng)基及激素包括 MS培養(yǎng)基(Murashing and Skoog medium,以下簡(jiǎn)稱MS) ，MS配方中的藥品成分和 培養(yǎng)基的具體配制方法為現(xiàn)有公知技術(shù)，在此不再贅述。 附加的植物激素為6-芐基氨基嘌呤(benzylaminopurine，以下簡(jiǎn)稱為BA)、奈乙 酸(n即hthylene acetic acid，以下簡(jiǎn)稱為NAA)、噴哚乙酸(indole-3-acetic acid，以下 簡(jiǎn)稱為IAA);基本培養(yǎng)基中所用藥劑和各類激素均由sigma公司購(gòu)得。
快培方法包括下述步驟 第一步選擇生長(zhǎng)健壯，具有較好品質(zhì)特征且無(wú)病蟲害茛力花的短縮莖作為外植 體，短縮莖長(zhǎng)度為0. 5 lcm，切取包含生長(zhǎng)點(diǎn)外植體，為長(zhǎng)度0. 5 lcm，直徑0. 3 0. 6cm 的圓柱體，進(jìn)行清洗消毒處理后接種； 第二步在無(wú)菌環(huán)境下，切除外植體與消毒劑接觸過(guò)的切面，將外植體接種到初始 培養(yǎng)基中，進(jìn)行初始培養(yǎng)； 第三步將初始培養(yǎng)的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，該增殖培養(yǎng)基為MS+BA2. 5 3. 5mg L—丄+NAA0. 8 1. 5mg L—丄+蔗糖25 35g L—丄+瓊脂4 8g L—、誘導(dǎo)不定芽;
第四步將誘導(dǎo)出的叢生芽分切后，轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，以獲得株 高株型比較一致的試管苗用以生根培養(yǎng)； 第五步將經(jīng)壯苗培養(yǎng)生長(zhǎng)到1. 5cm以上的試管苗切割成單個(gè)不定芽并轉(zhuǎn)移至 生根培養(yǎng)基中獲得生根試管苗，該生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA3. 5 4. 5mg L—^蔗糖15 25g化—^瓊脂4 8g化—、待試管苗有3片以上葉片和2 3條根時(shí)，進(jìn)行下一步的移栽；
第六步移栽前試管苗先置于自然環(huán)境下一周，再?gòu)呐囵B(yǎng)瓶中取出生根試管苗，對(duì) 所得的生根試管苗進(jìn)行清洗，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽至草炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中 進(jìn)行。 上述的初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均為無(wú)菌室內(nèi)光周 期為10 15h/d，光照強(qiáng)度1500 25001x，培養(yǎng)溫度為室溫。 在上述方案的基礎(chǔ)上，第一步中，所述的外植體為長(zhǎng)度在0.5 lcm，可以為0.5， 0. 6，0. 7，0. 8，0. 9或lcm，直徑為0. 3 0. 6cm，可以為0. 3，0. 4，0. 5或0. 6的圓柱體。
在上述方案的基礎(chǔ)上，第一步中，所述的清洗消毒處理的方法包括取茛力花短縮 莖，用水沖洗干凈，去除葉片和肉質(zhì)根，切成圓柱體，并使短縮莖的生長(zhǎng)點(diǎn)位于圓柱體的中 央，保留數(shù)片葉柄基部保護(hù)生長(zhǎng)點(diǎn)，先用60 80%濃度的酒精消毒30 60s，再用無(wú)菌水 沖洗3 4次，然后用加有2 4滴吐溫80的0. 1 0. 2%的升汞液浸泡15 30分鐘，無(wú) 菌水沖洗至無(wú)殘留無(wú)異味，得到無(wú)菌的外植體。 在上述方案的基礎(chǔ)上，第二步中，所述的初始培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 15 0. 25mg L—'+NAAO. 15 0. 25mg 1^+蔗糖25 35g 1^+瓊脂4 8g L—、
具體的，在初始培養(yǎng)基中，6-BA的激素濃度可以為0. 15，0. 18，0. 2，0. 22或 0. 25mg L-、 NAA的激素濃度可以為0. 15， 0. 18， 0. 2， 0. 22或0. 25mg L—、蔗糖的濃度可以 為25， 28， 30， 32或35g L—、瓊脂的濃度可以為4， 5， 6， 7或8g L-、 在初代培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)條件為無(wú)菌室內(nèi)光周期為10 15h/d，優(yōu)選12h/d，光照 強(qiáng)度1500 25001x，優(yōu)選20001x，培養(yǎng)溫度為室溫，優(yōu)選25°C ，培養(yǎng)周期為18 30天，較 佳的周期為22 28天，優(yōu)選25天。 在上述方案的基礎(chǔ)上，第三步增殖培養(yǎng)基中，具體BA的激素濃度可以為2. 5， 2. 8， 3，3. 2或3. 5mg L—、 NAA的激素濃度可以為0. 8， 1. 0， 1. 2或1. 5mg L—、蔗糖的濃度可以 為25， 28， 30， 32或35g L—、瓊脂的濃度可以為4， 5， 6， 7或8g L-、 所述的增殖培養(yǎng)基最佳的激素組合及濃度為MS+BA3mg L—^NAAlmg L—^蔗糖 30g L—^瓊脂6g L—1 ;在增殖培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)條件為無(wú)菌室內(nèi)光周期為10 15h/d，優(yōu) 選12h/d，光照強(qiáng)度1500 25001x，優(yōu)選20001x，培養(yǎng)溫度為室溫，優(yōu)選25°C ，培養(yǎng)周期為 18 35天，較佳周期為28 32天，優(yōu)選30天，由此茛力花試管苗的月增殖系數(shù)平均為
4. 65。 在上述方案的基礎(chǔ)上，第四步中，所述的壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 15 0. 25mg L—'+IBAO. 15 0. 25mg 1^+蔗糖25 35g 1^+瓊脂4 8g L—、
具體的，在壯苗培養(yǎng)基中，6-BA的激素濃度可以為0. 15，0. 18，0. 2，0. 22或 0. 25mg L—、 IBA的激素濃度可以為0. 15， 0. 18， 0. 2， 0. 22或0. 25mg L—、蔗糖的濃度可以 為25， 28， 30， 32或35g L—、瓊脂的濃度可以為4， 5， 6， 7或8g L—、
優(yōu)選的壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 2mg L—'+IBA0. 2mg L—^蔗糖30g L—^瓊脂
6g*L—1 ;在壯苗培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)條件為無(wú)菌室內(nèi)光周期為10 15h/d，優(yōu)選12h/d，光照強(qiáng) 度1500 25001x，優(yōu)選20001x，培養(yǎng)溫度為室溫，優(yōu)選25°C ，培養(yǎng)周期為18 30天，較佳 周期為18 22天，優(yōu)選20天左右，由此試管苗長(zhǎng)至2cm高，比較整齊。
在上述方案的基礎(chǔ)上，在生根培養(yǎng)基中，具體NAA的激素濃度可以為3. 5， 3. 8， 4， 4. 2或4. 5mg L—1十蔗糖的濃度可以為15， 18， 20， 22或25g L—、瓊脂的濃度可以為4， 5， 6， 7或8g L-、 所述的生根培養(yǎng)基最佳的激素和礦質(zhì)元素及碳源組合機(jī)濃度值為 l/2MS+NAA4mg L—1十蔗糖20g L—1十瓊脂6g L—1 ;培養(yǎng)條件為無(wú)菌室內(nèi)光周期為10 15h/ d，優(yōu)選12h/d，光照強(qiáng)度1500 25001x，優(yōu)選20001x，培養(yǎng)溫度為室溫，優(yōu)選25°C，由此生 根率最高可達(dá)95%，平均生根條數(shù)為2. 37，誘導(dǎo)生成的根比較粗壯。 在上述方案的基礎(chǔ)上，第六步中，將生根試管苗至于自然環(huán)境中6 10天，一般為 一周，取出洗凈，用500 600倍托布津水溶液浸泡數(shù)秒，移栽到草炭與珍珠巖的混合基質(zhì) 中，一般草炭與珍珠巖的混合比例為l : 1，起始6 10天(一般為一周)內(nèi)采用噴霧保持 苗的葉面濕潤(rùn)，相對(duì)濕度為95%左右，并適當(dāng)遮陽(yáng)，其后(約二周后)按干透濕透的原則澆 水，逐漸加強(qiáng)光照至全光照。
本發(fā)明的有益效果是 本發(fā)明對(duì)加快茛力花的繁殖速度，一旦得到無(wú)菌苗后，可以利用無(wú)菌苗誘導(dǎo)出不 定芽，不定芽生根和移栽成活后，即再生為完整植株，形成了一個(gè)良好的生產(chǎn)體系，年繁殖
系數(shù)由自然狀態(tài)下的i : 5，提高到i : 16000000，成本由原來(lái)的8 io元每株，降低至
1 2元每株。且不受季節(jié)限制，環(huán)境易控，適合全國(guó)各地，解決了茛力花繁殖慢、種苗參差
不齊等問(wèn)題。直接器官發(fā)生的方式由于不經(jīng)過(guò)愈傷組織階段，可以減少變異植株的產(chǎn)生，為 快繁中保持種質(zhì)資源的優(yōu)良特性提供保障，生產(chǎn)得到的茛力花種苗品質(zhì)高， 一致性好，具有 廣闊的市場(chǎng)前景。
具體實(shí)施例方式
—種茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，去茛力花外植體經(jīng)初始培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、 壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)獲得試管苗，進(jìn)行移栽，包括下述步驟 第一步于天氣晴朗的中午，選擇生長(zhǎng)健壯，無(wú)病蟲害茛力花的短縮莖做為外植 體，短縮莖長(zhǎng)度為0. 5 lcm，茛力花短縮莖比較肥大，又深埋于地下，感染土壤中各種微生 物比較多，消毒非常困難，經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，得到以下最佳外植體處理方式自來(lái)水沖洗干凈， 去掉葉片和肥厚的肉質(zhì)根，切為直徑大約0. 5cm，高度大約0. 5cm的近圓柱狀，短縮莖生長(zhǎng) 點(diǎn)位于中央，并留2片極短的葉柄基部保護(hù)中間的生長(zhǎng)點(diǎn)，以減弱消毒處理時(shí)消毒液對(duì)生 長(zhǎng)點(diǎn)分生細(xì)胞的傷害。先用72%的酒精消毒408，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.2%升汞液(加 數(shù)滴吐溫80)浸15min，無(wú)菌水沖洗至消毒液無(wú)殘留。 第二步在無(wú)菌環(huán)境下，切除與消毒劑接觸過(guò)的外植體的切面，接種到初始培養(yǎng)基 MS+6-BA0. 2mg L—丄+NAAO. 2mg L—^蔗糖30g L—^瓊脂6g L—1上，培養(yǎng)基pH調(diào)為5. 8左
右，一個(gè)試管接種一個(gè)，避免交叉感染，于光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為20001x，培養(yǎng)溫度為 25t:的無(wú)菌室內(nèi)培養(yǎng)25天；
5
無(wú)菌操作室在使用前30分鐘，打開紫外燈和超凈工作臺(tái)，紫外燈在關(guān)閉10分鐘
后，才可進(jìn)行接種操作；接種用具在12rc條件下高壓滅菌35分鐘，培養(yǎng)基在12rc條件下
高壓滅菌18分鐘。 第三步采用MS為基本培養(yǎng)基，附加激素6-BA、 NAA、 IAA，共設(shè)計(jì)了 12種培養(yǎng)基 配方。將生長(zhǎng)健壯一致的無(wú)菌苗分別轉(zhuǎn)到上述培養(yǎng)基中，培養(yǎng)l個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。表l結(jié) 果表明，茛力花增殖需要濃度較高的細(xì)胞分裂素，當(dāng)BA為lmg L—1時(shí)，增殖速度非常緩慢， 當(dāng)BA濃度為3mg L—1時(shí)，對(duì)茛力花叢生芽的增殖效果最好，而當(dāng)濃度達(dá)到5mg L—1時(shí)，茛 力花又非常容易出現(xiàn)玻璃化的畸形現(xiàn)象。添加生長(zhǎng)素對(duì)茛力花的增殖有促進(jìn)作用，NAA和 IAA二者相比，NAA對(duì)茛力花叢生芽增殖的效果略好于IAA。綜合考慮激素種類和濃度， MS+BA3mg L—^NAAlmg L—^蔗糖30g L—^瓊脂6g L—1培養(yǎng)基是茛力花增殖的最佳培養(yǎng) 基，在該培養(yǎng)基上茛力花的月增殖系數(shù)為4. 65，產(chǎn)生的叢生芽發(fā)育正常，葉色濃綠，長(zhǎng)勢(shì)旺 盛，無(wú)玻璃化現(xiàn)象，可以做為茛力花擴(kuò)繁增殖的培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)的周期為30天。
表1不同激素及其濃度對(duì)芽增殖的影響
培養(yǎng)基(mg*L—')接種數(shù)增殖苗數(shù)增殖系數(shù)
MS +BA 120271.35
MS +BA 320623. 10
MS +BA 520603. 00
MS +BA 1+ NAA 0. 520311.55
MS +BA3+腸0.520814. 05
MS +BA 5+隱0. 520532. 65
MS +BA 1+ NAA 120412. 05
MS +BA3+ NAA 120934. 65
MS +BA 5+腸120572.85
MS +BA 1+薩20321.60
MS +BA 3+ IAA 120633. 15
MS +BA 5+ IAA 120482.40 注增殖系數(shù)=增殖苗數(shù)/接種數(shù) 各培養(yǎng)基均包含蔗糖30g L—1和瓊脂6g L—1 。 第四步在增殖培養(yǎng)基上，茛力花試管苗生長(zhǎng)高度參差不齊，將叢生芽分切后，轉(zhuǎn) 移至壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA 0. 2mg L-丄+IBA 0. 2mg L—^蔗糖30g L-^瓊脂6g L-1中培養(yǎng)
20天左右，試管苗普遍長(zhǎng)至2cm高時(shí)，就可以用來(lái)誘導(dǎo)生根。 第五步大量元素減半的1/2MS比MS更有利于生根，表2結(jié)果表明，蔗糖含量為 20g L—1時(shí)，也能夠提高生根率及平均生根數(shù)。當(dāng)NAA濃度為2mg L—1時(shí)，生根率比較低；當(dāng)上調(diào)至6mg L—1時(shí)，生根率雖然可以達(dá)到100%，但是在試管苗的基部容易出現(xiàn)愈傷化 組織，不利于后期的移栽；當(dāng)NAA濃度為4mg L—1時(shí)，生根率最高達(dá)到95%，平均生根條數(shù) 為2. 37，誘導(dǎo)生成的根比較粗壯，沒(méi)有玻璃化等不良現(xiàn)象。茛力花生根最適培養(yǎng)基確定為 l/2MS+NAA4mg L—蔗糖20g L-^瓊脂6g L-、
表2不同培養(yǎng)基對(duì)根誘導(dǎo)的影響
培養(yǎng)基接種數(shù)生根試管苗數(shù)生根率％平均生根數(shù)
MS +NAA 2mg.L—1208401.00
1/2MS +NAA 2mg*l/12012601. 17
1/2MS +NAA 2mg吃、蔗糖20g*l/'2015751.33
MS +NAA 4mg'l/12011551.55
1/2MS +NM 4mg'i;2015751.93
1/2MS +NAA 4mg'L、蔗糖20g*L-'2019952. 37
MS +NAA 6mg*L—12017852. 06
1/2MS +NAA 6mg'l/12019952.26
1/2MS +NAA 6mg'l/'+蔗糖20g.l/'20201003.00 注生根率=生根試管苗數(shù)/接種數(shù)
平均生根數(shù)=生根總條數(shù)/生根試管苗數(shù)
各培養(yǎng)基均包含瓊脂6g L—1 。 第六步將茛力花生根試管苗置于自然環(huán)境一周后，再?gòu)钠恐腥〕?，用自?lái)水洗凈 根部的培養(yǎng)基，洗時(shí)注意保護(hù)根不被折斷，并且要徹底洗凈根上的瓊脂，以免腐爛而影響成 活率；用500倍托布津水溶液浸泡根部數(shù)秒鐘，然后移栽到草炭珍珠巖=1 : l的基質(zhì) 中。移栽一周內(nèi)，采用噴霧保持葉面濕潤(rùn)狀態(tài)，相對(duì)濕度控制在95 %左右，并適當(dāng)遮陽(yáng)，二周 后按干透濕透的原則澆水，逐漸加強(qiáng)光強(qiáng)至全光照。茛力花成活率可以達(dá)到90%。
采用本發(fā)明所提供的方法，對(duì)加快茛力花的繁殖速度，是一種很有效的途徑，一旦 得到無(wú)菌苗后，可以利用無(wú)菌苗誘導(dǎo)出不定芽，不定芽生根和移栽成活后，即再生為完整植
株，形成了一個(gè)良好的生產(chǎn)體系。年繁殖系數(shù)由自然狀態(tài)下的i : 5，提高到i : 16000000，
成本由原來(lái)的8 10元每株，降低至1 2元每株。且不受季節(jié)限制，環(huán)境易控，適合全國(guó) 各地，解決了茛力花繁殖慢、種苗參差不齊等問(wèn)題。直接器官發(fā)生的方式由于不經(jīng)過(guò)愈傷組 織階段，可以減少變異植株的產(chǎn)生，為快繁中保持種質(zhì)資源的優(yōu)良特性提供保障，生產(chǎn)得到 的茛力花種苗品質(zhì)高，一致性好，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
權(quán)利要求
一種茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，取茛力花外植體經(jīng)初始培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)獲得試管苗，進(jìn)行栽種，其特征在于包括下述步驟第一步取茛力花短縮莖作為外植體，并對(duì)外植體進(jìn)行清洗消毒處理；第二步將外植體接種到初始培養(yǎng)基中，進(jìn)行初始培養(yǎng)，獲得初代培養(yǎng)的無(wú)菌苗；第三步將初代培養(yǎng)的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，該增殖培養(yǎng)基為MS+BA2.5～3.5mg·L-1+NAA0.8～1.5mg·L-1+蔗糖25～35g·L-1+瓊脂4～8g·L-1，誘導(dǎo)不定芽；第四步將誘導(dǎo)出的叢生芽分切后，轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)；第五步將經(jīng)壯苗培養(yǎng)生長(zhǎng)到1.5cm以上的試管苗分切后，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中獲得生根試管苗，該生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA3.5～4.5mg·L-1+蔗糖15～25g·L-1+瓊脂4～8g·L-1；第六步對(duì)所得的生根試管苗進(jìn)行清洗，移至基質(zhì)中進(jìn)行栽種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于所述的初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均為無(wú)菌室內(nèi)光周期為10 15h/d，光照強(qiáng)度1500 25001x，培養(yǎng)溫度為室溫。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第一步中，切取包含生長(zhǎng)點(diǎn)外植體，為長(zhǎng)度0. 5 lcm，直徑0. 3 0. 6cm的圓柱體，進(jìn)行清洗消毒處理后接種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第一步中，所述的清洗消毒處理的方法包括取茛力花短縮莖，用水沖洗干凈，去除葉片和肉質(zhì)根，切成圓柱體，并使短縮莖的生長(zhǎng)點(diǎn)位于圓柱體的中央，保留數(shù)片葉柄基部保護(hù)生長(zhǎng)點(diǎn)，先用60 80%濃度的酒精消毒30 60s，再用無(wú)菌水沖洗3 4次，然后用加有2 4滴吐溫80的0. 1 0. 2%的升汞液浸泡15 30分鐘，無(wú)菌水沖洗至無(wú)殘留，得到無(wú)菌的外植體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第二步中，所述的初始培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 15 0. 25mg *L—"+NAAO. 15 0. 25mg *L—"+蔗糖25 35g*L—'+瓊脂4 8g'L—、
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體快繁培養(yǎng)方法，其特征在于第三步中，所述的增殖培養(yǎng)基為MS+BA3mg L—丄+磁lmg L—^蔗糖30g L—^瓊脂6g L-、
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第四步中，所述的壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 15 0. 25mg *L—"+IBA0. 15 0. 25mg *L—"+蔗糖25 35g*L—'+瓊脂4 8g'L—、
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第五步中，所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA4mg L—^蔗糖20g L—^瓊脂6g L—、
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于第六步中，將生根試管苗至于自然環(huán)境中6 10天，取出洗凈，用500 600倍托布津水溶液浸泡數(shù)秒，移栽到草炭與珍珠巖的混合基質(zhì)中，起始6 10天內(nèi)保持苗的葉面濕潤(rùn)并適當(dāng)遮陽(yáng)，其后按干透濕透的原則澆水，逐漸加強(qiáng)光照至全光照，進(jìn)行栽種。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的茛力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于所述初代培養(yǎng)的周期為22 28天，增殖培養(yǎng)的周期為28 32天，壯苗培養(yǎng)的周期為18 22天。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種莨力花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法包括下述步驟取短縮莖作為外植體，并對(duì)外植體進(jìn)行清洗消毒處理；將外植體接種到初始培養(yǎng)基中，進(jìn)行初始培養(yǎng)；將初代培養(yǎng)的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，該增殖培養(yǎng)基為MS+BA 2.5-3.5mg·L-1+NAA 0.8-1.5mg·L-1+蔗糖25-35g·L-1+瓊脂4-8g·L-1，誘導(dǎo)不定芽；將誘導(dǎo)出的叢生芽分切后，轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)；試管苗分切后，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA3.5-4.5mg·L-1+蔗糖15-25g·L-1+瓊脂4～8g·L-1；生根試管苗清洗，移至基質(zhì)中栽種。優(yōu)點(diǎn)是年繁殖系數(shù)提高到1∶16000000，成本降低至1～2元每株，且不受季節(jié)限制，環(huán)境易控，減少變異植株的產(chǎn)生，種苗品質(zhì)高，一致性好。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101699990SQ20091019915
公開日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日
發(fā)明者呂秀立, 孫偉墨, 錢又宇 申請(qǐng)人:上海市園林科學(xué)研究所;上海城投綠化科技發(fā)展有限公司