專利名稱：甘薯商19的脫毒快繁技術(shù)及培養(yǎng)物質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)脫毒與快繁技術(shù)，確切地說是用 甘薯的莖尖分生組織組進(jìn)行脫毒、莖段無性組織培養(yǎng)進(jìn)行快繁，以及 組織培養(yǎng)擴(kuò)繁時(shí)所用的營養(yǎng)物質(zhì) 一 培養(yǎng)基的配比。
背景技術(shù)：
甘薯是一種介于糧食和蔬菜之間的食物，我國年產(chǎn)量居世界之首， 既可大規(guī)模集約化生產(chǎn)，也可小面積庭院栽培。僅商丘市及周邊地區(qū)
常年種植甘薯150萬畝，利用甘薯產(chǎn)后加工淀粉、粉絲、和粉條已成 為農(nóng)民脫貧致富的有效途徑。但由于我?guī)埣爸苓叺貐^(qū)甘薯栽培歷史悠
久，甘薯病毒危害相當(dāng)嚴(yán)重，田塊發(fā)病率iooy。，品種感病率iooy。。甘
薯感染病毒后，導(dǎo)致品種退化，產(chǎn)量下降30%以上，嚴(yán)重的田塊產(chǎn)量 下降50%以上，有的甚至絕收；感染病毒的甘薯薯皮粗糙、薯塊變小、 出干率和淀粉含量下降。甘薯病毒已成為導(dǎo)致甘薯種性退化產(chǎn)量下降 的重要原因，每年造成經(jīng)濟(jì)損失近億元。只有采用無性營養(yǎng)體進(jìn)行組 織培養(yǎng)脫毒快繁，才能保持原品種全部的遺傳性和實(shí)現(xiàn)該品種種質(zhì)的 一致性。
植物組織培養(yǎng)脫毒與快繁技術(shù)近幾年飛快發(fā)展，已廣泛應(yīng)用在花 弁、林果、蔬菜以及農(nóng)作物上。植物不同其培養(yǎng)方法也不同，即使是 一種植物，但品種不同培養(yǎng)方法亦不盡相同。也就是說在同一種植物 內(nèi)的每一個(gè)品種，都有它各自的生長發(fā)育規(guī)律，以及適宜生長發(fā)育所 需要的營養(yǎng)和環(huán)境條件。因此，甘薯商19的組織培養(yǎng)脫毒與快繁技術(shù), 適宜甘薯商19的莖尖分生組織培養(yǎng)和莖段組培快繁，最佳培養(yǎng)基和外 界環(huán)境條件，與其他植物的培養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件也是不同的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種甘薯的組培脫毒與快繁技術(shù)以及用于甘 薯組培快繁的培養(yǎng)物質(zhì)，通過無性營養(yǎng)體進(jìn)行組織培養(yǎng)脫毒快繁，一
是不受季節(jié)限制，實(shí)現(xiàn)多次、快速、高系數(shù)繁殖；二是可保證原品種 全部的遺傳性和該品種品質(zhì)的 一 致性。 本發(fā)明的組培繁育方法是
1、 分化培養(yǎng)
從正在生長的甘薯(育苗圃)植株中，選擇生長健壯，無病蟲， 具有本品種特征特性的植株，剪取帶有莖尖的莖蔓，去掉可見葉，在 流動(dòng)的自來水中沖洗，拮干水分。在無菌室內(nèi)的超凈工作臺(tái)上，用重 量百分比為75%的酒精浸泡20秒鐘，重量百分比為0. 1%的升汞溶液滅 菌8-12分鐘，無菌水沖洗5-7遍，在借助于60-80倍解剖鏡下，利用 解剖針剝離莖尖，所剝莖尖為0.1-0. 3亳米，含l-2個(gè)葉原基，快速 接種到分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；然后在溫度26士2。C，曰照時(shí)數(shù)12-14h, 光照強(qiáng)度2200-2500LX的條件下培養(yǎng)。20 d后重新轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中 繼續(xù)培養(yǎng)。40-50 d后培養(yǎng)瓶內(nèi)小苗長出5-7片葉，除去病苗弱苗， 其余的進(jìn)行編號(hào)并快繁一次。待苗子長出7-9片葉時(shí)即可以進(jìn)行病毒 檢測。
2、 莖尖苗帶毒檢測 ① 脫毒莖尖苗和在形態(tài)長勢(shì)上差異明顯，脫毒莖尖苗生長快，葉色 濃，植株健壯；帶毒莖尖苗長勢(shì)弱葉色淡，葉片上有花葉明脈或褪綠 斑。經(jīng)目測，把帶毒癥狀明顯的莖尖苗除去。
② 由江蘇省甘薯中心進(jìn)行病毒檢測用血清學(xué)檢測法對(duì)商薯19莖 尖苗進(jìn)行檢測，脫去對(duì)甘薯為害嚴(yán)重的甘薯羽狀斑駁病毒、甘薯潛隱 病毒、甘薯類花葉病毒，莖尖脫毒苗占送檢苗的95.6%。
3、 增殖培養(yǎng)通過病毒檢測后，不符合標(biāo)準(zhǔn)的全部淘汰，剩下的無毒苗加速快
繁。在超凈工作臺(tái)上，將脫毒無菌苗剪成帶有1一2個(gè)節(jié)間的莖段轉(zhuǎn)接 到繼代與增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，PH5. 6-5. 8，在溫度26-28。C, 光照12-14h/d，光照強(qiáng)度2200-25001x，濕度65-70%的環(huán)境條件下進(jìn) 行培養(yǎng)。20-25d后可形成4-5叢生芽，28-35d生長高度5cm左右， 即可在同一培養(yǎng)基上繼代繁殖,繼代周期為25-28d。循環(huán)往復(fù)，增殖 倍數(shù)6以上。
4、生根培養(yǎng)
選取生長勢(shì)強(qiáng)、健壯的無菌芽苗切成含有1-2個(gè)節(jié)間的小段，長 1.0-1.5cm,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，25-28 d,有95%以上的植株長出3-5 條O. 3-3cm長的根，展開葉3-5片，待苗長至30-35 d時(shí)，即可煉苗 移栽。培養(yǎng)溫度"土2。C,濕度65-"%，光照強(qiáng)度MOO-2500LX,光 照時(shí)間12-14h/d。
5、煉苗與移栽
練苗前首先揭開培養(yǎng)瓶的封口膜，練苗時(shí)間5_7天，練苗時(shí)在保證 溫、濕度的條件下，逐步接近自然環(huán)境，以利提高成活率，然后小心 取出，用自來水沖洗凈苗基部的培養(yǎng)基，并滅菌，然后移栽到已滅過 菌的腐殖質(zhì)與碎爐渣以2: l的比例混合的基質(zhì)中，前期適當(dāng)遮陰并保 持濕度在90%,逐步降至70-75 %, 15天后去掉薄膜罩，定期殺菌， 7-10天一次，共計(jì)2-3次，成活率達(dá)95%以上.
本發(fā)明的培養(yǎng)物質(zhì)及配比 甘薯商19的脫毒快繁的培養(yǎng)物質(zhì)由基本培養(yǎng)基、生長調(diào)節(jié)劑加 椰汁、蔗糖和瓊脂組成分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代與增值培養(yǎng)基和生根 培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基為MS，基本培養(yǎng)基MS的配制方法為公知技術(shù)， 生長調(diào)節(jié)劑由6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 2.4-二氯苯氧乙酸(2M-D) 、a-奈乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、玉米素(ZT)組合而成。1、 分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基.l升加6-節(jié)基腺喋呤(6-BA )1. 0-3. 5mg、 a -奈乙酸(NAA ) 0. 5-3. Omg、 2.4-二氯苯氧乙酸 (2. 4-D ) 0. 2-2. 5mg 、玉米素(ZT) 0. 1-0. 3 mg,附加椰汁100-200 mg
、蔗糖30g、瓊脂6. 5g;
2. 繼代與增殖培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基1升加6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA )1. 0-3. 0mg 、 a -奈乙酸(NAA ) 0. 5-2. 0mg 、丐|哚丁酸(IBA ) 0.2-1.5 mg 、玉米素(ZT)O. 1-0. 3mg、蔗糖30g、瓊脂6g;
3.生根培養(yǎng)基1 / 2MS基本培養(yǎng)基1升加a -奈乙酸(NAA ) 0. 5-2. G mg、蔗糖20g、瓊脂6g。 本發(fā)明的積極效果是
1. 利用甘薯"商薯19"的莖尖脫毒、莖段快繁，解決了年復(fù)一 年用薯塊、薯蔓繁殖導(dǎo)致甘薯病毒病嚴(yán)重、使新育品種品質(zhì)變劣、種 質(zhì)退化、產(chǎn)量降低等難題；脫毒后在保持原品種特征特性的基礎(chǔ)上， 純化了種質(zhì)，增強(qiáng)了品種的抗疫性，提高了品質(zhì)和產(chǎn)量，增產(chǎn)35%以 上，并且薯皮光滑，薯塊耐儲(chǔ)存；
2. 快繁克服了傳統(tǒng)的繁殖秧蔓速度慢的弊端，1年內(nèi)1個(gè)生長點(diǎn) 或1個(gè)莖段可增殖70-80萬個(gè)，1個(gè)人1年內(nèi)可快繁10—15萬個(gè)與母 體生理特征完全一致的小植株，可實(shí)現(xiàn)工廠化育苗、高效率生產(chǎn)；
3. 可人為的控制培養(yǎng)生長條件，不受自然條件的影響，取材量小， 培養(yǎng)材料經(jīng)濟(jì)，生長周期短，繁殖系數(shù)大，管理方便，利于產(chǎn)業(yè)化生 產(chǎn)；
4. 培養(yǎng)基質(zhì)是腐殖質(zhì)與碎爐渣以2: l的比例混合的物質(zhì)，既經(jīng)濟(jì) 又有效，降低了生產(chǎn)成本；
5. 采用甘薯脫毒苗三級(jí)育苗體系和無病毒甘薯種苗的繁殖更新， 有效地防止了品種退化，確保了種質(zhì)純度。
具體實(shí)施方式
本實(shí)施例是用國審甘薯品種"商薯19"進(jìn)行組培快繁的實(shí)例。
該品種為春、夏薯型，適宜種植范圍廣，產(chǎn)量3000 — 5000 kg/畝，出 干率33%左右，淀粉含量高達(dá)30%以上。脫毒后比對(duì)照徐薯18 (脫毒) 增產(chǎn)38. 9%。
1. 分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)
從正在生長的植株中，選擇生長健壯，無病蟲，具有本品種特征 特性的植株，剪取帶有莖尖的莖蔓，去掉可見葉，在流動(dòng)的自來水中 沖洗20-30 mis,拮干水分待用。在無菌室內(nèi)的超凈工作臺(tái)上，用重 量百分比為75%的酒精浸泡20秒鐘，0. 1%的升汞溶液滅菌8-12分鐘， 無菌水沖洗5-7遍，在借助于60-80倍解剖鏡下，利用解剖針剝離莖 尖，所剝莖尖為0.1-0. 3亳米， 一般帶l-2個(gè)葉原基，快速接種到分 化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA) 3mg/L+a-奈乙酸(NAA ) 1. 5mg/L+2.4-二氯苯氧乙酸(2. 4-D) lmg/L+玉米素(ZT ) 0. 2mg/L+ 椰汁120mg/L +蔗糖30g/L+瓊脂6. 5g/L中，封口后作好標(biāo)記，然后在 溫度26±2°C,曰照時(shí)數(shù)1611,光照強(qiáng)度2000-"00LX的條件下培養(yǎng)。 20 d后重新轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。40-50 d后培養(yǎng)瓶內(nèi)小苗長 出5-7片葉，除去病苗弱苗，其余的進(jìn)行編號(hào)并快繁一次。待苗子長 出7-9片葉時(shí)即可以進(jìn)行病毒檢測。
2、 增殖培養(yǎng)
通過病毒檢測后，不符合標(biāo)準(zhǔn)的全部淘汰，剩下的無毒苗加速快 繁。在超凈工作臺(tái)上，將脫毒無菌苗剪成帶有1一2個(gè)節(jié)間的莖段轉(zhuǎn)接 到增殖培養(yǎng)基MS+6-芐基腺嘌呤(6-BA) 2. 0mg/L+a -奈乙酸(NAA) lmg/L +吲噪丁酸(IBA ) 0. 5 mg/L +玉米素(ZT ) 0. 2mg/L+蔗糖30g/L+ 瓊脂6g/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，PH 5.6-5.8,在溫度26-28°C,光照 12-14h/d,光照強(qiáng)度2200-25Q01x，濕度65-70°/。的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)。28-"d左右叢生芽生長高度5cm左右，即可在同一培養(yǎng)基上繼代 繁殖，繼代周期為25-28d。循環(huán)往復(fù)，增殖倍數(shù)6以上。
3、 生根培養(yǎng)
選取生長勢(shì)強(qiáng)、健壯的無菌芽苗切成含有1-2個(gè)節(jié)間的小段長 1. 0-1.5cm轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1 / 2MS+a -奈乙酸(NAA ) lmg/L+蔗糖 20g/L+瓊脂6g/L中，25-28 d有95U乂上的植株長出3-5條0. 3-3cm 長的根，展開葉3-5片，待苗長至30-35 d時(shí)，即可煉苗移栽。培養(yǎng) 溫度G6土"。C，濕度65_75%，光照強(qiáng)度2200-2500LX，光照時(shí)間 12-14h/d。
4、 煉苗與移栽
練苗前首先揭開培養(yǎng)瓶的封口膜，練苗時(shí)間5-7天，練苗時(shí)在保 證溫、濕度的條件下，逐步接近自然環(huán)境，以利提高成活率，然后小 心取出，用自來水沖洗凈苗基部的培養(yǎng)基，并滅菌，然后移栽到已滅 過菌的腐殖質(zhì)與碎爐渣以2: l的比例混合的基質(zhì)中，前期適當(dāng)遮陰并 保持濕度在90%,逐步降至70-75 %, 15天后去掉薄膜罩，定期殺菌， 7-10天一次，共計(jì)2-3次，成活率達(dá)95%以上.
釆取組織培養(yǎng)脫毒和快速繁殖新技術(shù)，對(duì)脫毒甘薯進(jìn)行無性繁殖， 是解決生產(chǎn)和巿場對(duì)其大量需求的一個(gè)有效途徑。同時(shí)對(duì)促進(jìn)農(nóng)民增 收、農(nóng)業(yè)增效具有很大的意義。
權(quán)利要求
1、甘薯商19的脫毒快繁技術(shù)，其具體步驟是(1)、分化培養(yǎng)從正在生長的植株中，選擇生長健壯，無病蟲，具有本品種特征特性的植株，剪取帶有莖尖的莖蔓，去掉可見葉，在流動(dòng)的自來水中沖洗，拮干水分，在無菌室內(nèi)的超凈工作臺(tái)上，用用重量百分比為75％的酒精浸泡20秒鐘，重量百分比為0.1％的升汞溶液滅菌8-12分鐘，無菌水沖洗5-7遍，在倍解剖鏡下，利用解剖針剝離莖尖，所剝莖尖為0.1-0.3毫米，帶1-2個(gè)葉原基，快速接種到分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，然后在溫度26±2℃，日照時(shí)數(shù)12-14h，光照強(qiáng)度2200-2500LX的條件下培養(yǎng)，20天后重新轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，40-50天后培養(yǎng)瓶內(nèi)小苗長出5-7片葉，除去病苗弱苗，其余的進(jìn)行編號(hào)并快繁一次，待苗子長出7-9片葉時(shí)即可以進(jìn)行病毒檢測；(2).莖尖苗帶毒檢測先目測，把帶毒癥狀明顯的莖尖苗除去，用血清學(xué)檢測法對(duì)商薯19莖尖苗進(jìn)行檢測，脫去對(duì)甘薯為害嚴(yán)重的甘薯羽狀斑駁病毒、甘薯潛隱病毒、甘薯類花葉病毒；(3)、增殖培養(yǎng)通過病毒檢測后，不符合標(biāo)準(zhǔn)的全部淘汰，剩下的無毒苗加速快繁，在超凈工作臺(tái)上，將脫毒無菌苗剪成帶有1-2個(gè)節(jié)間的莖段轉(zhuǎn)接到繼代與增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，PH 5.6-5.8，在溫度26-28℃，光照12-14h/d，光照強(qiáng)度2000-25001x，濕度65-70％的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)，20-25天后可形成4-5叢生芽，28-35天生長高度5cm左右，即可在同一培養(yǎng)基上繼代繁殖，繼代周期為25-28天；(4)、生根培養(yǎng)選取生長勢(shì)強(qiáng)、健壯的無菌芽苗切成含有1-2個(gè)節(jié)間的小段，長1.0-1.5cm，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，25-28天，有95％以上的植株長出3-5條0.3-3cm長的根，展開葉3-5片，待苗長至30-35時(shí)，即可煉苗移栽，培養(yǎng)溫度26±2℃，濕度65-75％，光照強(qiáng)度2200-2500LX，光照時(shí)間12-14h/d；(5)、煉苗與移栽練苗前首先揭開培養(yǎng)瓶的封口膜，練苗時(shí)間5-7天，練苗時(shí)在保證溫、濕度的條件下，逐步接近自然環(huán)境，以利提高成活率，然后小心取出，用自來水沖洗凈苗基部的培養(yǎng)基，并滅菌，然后移栽到已滅過菌的腐殖質(zhì)與碎爐渣以2∶1的比例混合的基質(zhì)中，前期適當(dāng)遮陰并保持濕度在90％，逐步降至70-75％，15天后去掉薄膜罩，定期殺菌，7-10天一次，共計(jì)2-3次。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘薯商19的脫毒快繁技術(shù)，其脫毒快 繁的培養(yǎng)物質(zhì)由基本培養(yǎng)基、生長調(diào)節(jié)劑加椰汁、蔗糖和瓊脂組成分 化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代與增值培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成，基本培養(yǎng)基 為MS,生長調(diào)節(jié)劑由6-芐基腺嘌呤(6-BA ) 、 2. 4-二氯苯氧乙酸 (2. 4-D)、 a-奈乙酸(NAA)、吲噪丁酸(IBA)、玉米素(ZT)組合而成；(D、分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基1升加6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA )1.0-3. 5mg、 a-奈乙酸(NAA ) 0. 5-3. Omg、 2.4-二氯苯氧乙酸 (2. 4-D ) 0. 2-2. 5mg 、玉米素(ZT) 0. 1-0. 3 mg,附加椰汁100-200 mg 、蔗糖3Gg、瓊脂6. 5g;(2).繼代與增殖培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基1升加6-節(jié)基腺嘿呤 (6-BA ) 1. 0-3. Omg、 a-奈乙酸(MA ) 0. 5-2. Omg 、 口引噪丁酸(IBA )0.2-1.5 mg 、玉米素(ZT)O. 1-0. 3mg、蔗糖30g、瓊脂6g;(3).生根培養(yǎng)基1 / 2MS基本培養(yǎng)基1升加a -奈乙酸(NAA ) 0. 5-2.0 mg、蔗糖20g、瓊脂6g。
全文摘要
甘薯商19的脫毒快繁技術(shù)是從正在生長的植株中，選擇生長健壯，無病蟲，具有本品種特征特性的植株，剪取帶有莖尖的莖蔓，去掉可見葉，消毒滅菌，利用解剖針剝離莖尖含1-2個(gè)葉原基，快速接種到分化與誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；通過病毒檢測后，將脫毒無菌苗剪成帶有1-2個(gè)節(jié)間的莖段轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中；選取生長勢(shì)強(qiáng)、健壯的無菌芽苗切成含有1-2個(gè)節(jié)間的小段轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根后進(jìn)行練苗。本技術(shù)莖尖脫毒、莖段快繁，解決了用薯塊、薯蔓繁殖導(dǎo)致甘薯病毒病嚴(yán)重、使新育品種品質(zhì)變劣、種質(zhì)退化、產(chǎn)量降低等難題；可人為的控制培養(yǎng)生長條件，不受自然條件的影響，取材量小，培養(yǎng)材料經(jīng)濟(jì)，生長周期短，繁殖系數(shù)大，管理方便，利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101611697SQ20091006550
公開日2009年12月30日 申請(qǐng)日期2009年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月13日
發(fā)明者劉廣卿, 呂樹立, 周玉玲, 姜曙光, 孫鳳嶺, 孫喜云, 左雙喜, 張福娟 申請(qǐng)人:周玉玲