專利名稱：：包含思科姆金瓊脂糖的含有分泌細(xì)胞的大珠及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及提高瓊脂糖包被的含有分泌細(xì)胞的瓊脂糖大珠(macrobead)的質(zhì)量和數(shù)量的方法。這是通過使用下文所述的思科姆金(SeakemGold)瓊脂糖實(shí)現(xiàn)的。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)在已確定，胰島置換療法是一種治療多種疾病患者的可行方法。其中包括接受上腹部臟器摘除術(shù)的癌癥患者(Tzakis，等，Z^icW，336:402-405(1990));胰腺炎(Clayton,等，rmws/7/flw似ftVm，76:92-98(2003);Farney，等，Sw/^^j,110:427-437(1991);Fontes，等，rra朋//朋f24:2809(1992);Obenholzer,等，7>"sp/"wto^m,69:1115-1123(2000);Robertson,等，D/fl&tes,50:47-50(2001))和胰島素依賴性患者，在此胰島移植是一種治療選擇(Goss，等，7>"^/做似^"，74:1761-1766(2002);Ricordi,等，JV謹(jǐn)/7/朋她Vm,75:1524-1527(2003);Ryan，等，D/W"es,50:710-719(2001);Shapiro，等，五wg/./AfW,343:230-238(2000))。如上文所示，由于胰島在治療中的有用性，開發(fā)分離它們的方法當(dāng)然是有意義的。盡管有許多有關(guān)應(yīng)用自動(dòng)化方法分離胰島的報(bào)道(Brandhorst,等,五平C7/".^Of^cW"o/Z)/fl6etes,103Suppl.2:3-14(1995);Cui,等，CW/7hm^7/"W，6:48-54(2001);Marchetti,等，7)wisp/朋她V/1，52:209-213(1991);Miyamoto，等,O//T)wis/7/fl叫7:397-402(1998);Nielsen,等，Owi/;.M^/"52:127-135(2002);Swanson,等，Hm附.7nf附柳朋/,62:739-749(2001);Toomey,等,丑W./Sw^.，80:240-243(1993);Toso,等，CW/7>wis/7/"W，9:297-305(2000);Wennberg,等，7hm印/朋tiVoc.，33:2537(2001))，但胰島的分離仍然非常困難。例如，Bosta,等，/7wve幼》.M^/,43:555-566(1995);Krickhahn,等，CW/7hwis/7to，11:827-838(2002);Krickhahn，等,爿朋r腦s/to,6:48-54(2001);O，Neil,等，O//T)ww/;/flfi,,10:235-246(2001)以及White,等，丑wtii.及m，31:579-524(1999)均探討了與此相關(guān)的問題。制^^有分泌細(xì)胞和/或細(xì)胞器如癌細(xì)胞、胰島等的大珠是;^p的。參閱如美國專利No.6,818,230;6,808,705;RE38,027;6，303，151;6,224,912;5,888,497，和5，643，569,以及已公開的美國專利申請2005/0096561，所有這些均通過引用并入本文。在這些專利文獻(xiàn)中使用瓊脂糖包裹生物材料，之后將所得的結(jié)構(gòu)再包裹一層瓊脂糖。熟悉瓊脂糖的技術(shù)人員會(huì)了解，此材料有許多可用的類型和種類。一種這樣的瓊脂糖思科姆金描述于美國專利No.4,983,268，其公開內(nèi)^it過引用并入本文。目前需要上文列出的專利和申請中首先描述的材料的改進(jìn)形式。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，思科姆金瓊脂糖得到的產(chǎn)品出人意料地優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品o本發(fā)明的細(xì)節(jié)在下文的公開內(nèi)容中進(jìn)行描述圖l給出了關(guān)于實(shí)驗(yàn)和對照動(dòng)物平均每日葡萄糖水平的信息。優(yōu)選實(shí)施方案實(shí)施例1根據(jù)Gazda等的公開專利申請2006/0121445中所述方法分離胰島，該申請公開于2006年6月8日，序列號11/273,737，其通過引用整體并入本文。但是，應(yīng)該注意，其它分離胰島的方法也是可能的，并且可以使用，因?yàn)楸景l(fā)明不依賴于特定的分離方法。在分離和評價(jià)之后，進(jìn)一步處理合適的胰腺。剪下腺體上的脂肪和結(jié)締組織，然后將16g不銹鋼鈍頭針插入主胰管。在30。C下以50ml/mm的速率輸注^^有濃度為1.5-2.0g/1的M^、蛋白酶P的HBSS溶液，以為每克胰腺提供2ml溶液。接下來，在30。C下，用500mlHBSS和2。/。PS與200ml膠原蛋白酶溶液一起浸沒胰腺。使用39。C的外循環(huán)7JC將該器官緩慢升溫到37。C，并保持消化溫度為3637。C。當(dāng)該器官看起來已解離、并對手施加的壓力的抵抗力很小時(shí)(約10~20分鐘總時(shí)間之后，在達(dá)到37°C之后大約510分鐘)，終止消化。收集消化物并離心，吸去上清，將所得沉淀懸浮在10。/。PS和器官保存溶液中。接著，在50ml試管中，以密度梯度為1.105、1.095、1.085、1.05g/cm3的不連續(xù)Ficoll、HBSS加2%PS純化胰島。4。C下以650g離心試管，收集含有胰島的層，并用添加10%PS的HBSS溶液洗三遍，其后借助解剖顯^t鏡將它們從非胰島組織中手工純化出來。重懸這些胰島，取兩份0.5ml的樣品用于計(jì)數(shù)胰島產(chǎn)量。所測試的10個(gè)g的平均產(chǎn)量為130,000EIN,平均每克消化后的組織為1,101EIN。所有樣本的純度均高于卯％。其中9個(gè)器官的胰島生存力高于89%。實(shí)施例2在分離胰島之后，測定多種參數(shù)，包括純度和生存力，如上文所述。通過用DTZ對約500EIN的胰島染色10分鐘來測定純度，然后使用解剖顯微鏡和數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)圖像分析。通過用二乙酸熒光素(FDA)和溴化乙錠(EB)染色樣品來測定生存力。詳細(xì)地說，將約500EIN加入1mlRPMI、10%PS、1%抗生素/抗霉劑("A/A")中。接著加入由10mgFDA和1ml丙酮制成的FDA染色劑20nl、由30nlEB和1mlPBS制成的EB200jil。將胰島在黑暗中染色7分鐘，然后在熒光顯微鏡下觀察10-50個(gè)胰島的隨,品并拍照，以使用標(biāo)準(zhǔn)圖像分析來測定其生存力。還通過將約500EIN置于酸醇提取液(7.2mlIN鹽酸，400ml100%變性乙醇)中來測量胰島的胰島素含量。將所述樣品保存在-20'C，并實(shí)施胰島素RIA。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例3本實(shí)施例及其后的實(shí)施例將闡明如上所述鑒定為有用并已分離的胰島是否能用于大珠中。將純化的胰島重懸在RPMI1640+10%PS+1%A/A中，至體積為2000EIN/ml。將這些胰島平均分配在管中，使得每管包含2000EIN的1ml懸液。經(jīng)重力沉降后，去除上清液，向每個(gè)樣品中加入0.5ml50。C的在極限必需培養(yǎng)基加2.5%HEPES緩沖液中制備的1.5%思M金瓊脂糖并均勻攪拌。接著，將懸液在無菌礦物油下排出，形成四個(gè)具有光滑表面和相同胰島分布的珠。取出大珠，洗兩遍(RPMI+5。/。PS+l。/。A/A)。將這些大珠在加濕的5%二氧化碳?xì)夥罩性谕瑯拥娜芤褐信囵B(yǎng)5~7天，之后用RPMI+1%A/A洗三遍，接著施加第二瓊脂糖包被層。為此，用移液器將0.5ml的MEM加HEPES緩沖液中的5%瓊脂糖轉(zhuǎn)移到無菌塑料勺中，將每個(gè)大珠滾動(dòng)3~5次以產(chǎn)生均勻的第二瓊脂糖包衣。在轉(zhuǎn)移進(jìn)無菌礦物油以產(chǎn)生光滑表面之后，取出大珠，用RPMI+2.5%PS+1。/oA/A洗兩遍，在371C下在加濕的5%二氧化碳加空氣中培養(yǎng)。當(dāng)然也可采用其他制備所述珠的方法。包含被包裹胰島的大珠經(jīng)測定可以保持生存力超過六個(gè)月，在此期間，^t射性免疫測定顯示它們能繼續(xù)產(chǎn)生高水平的胰島素。實(shí)施例4本實(shí)施例描述了證明豬胰島能在體內(nèi)發(fā)揮功能的實(shí)驗(yàn)。釆用7~9周齡的雄性非肥胖型糖尿病CB17-PrKdc<scid>/J小鼠。適應(yīng)一周后，動(dòng)物接受誘導(dǎo)糖尿病的275mg/kg鏈脲霉素。9天后，當(dāng)其血糖水平平均超過480mg/dl時(shí)，開始進(jìn)行胰島素療法。在施用炮跟霉素后的3435天，動(dòng)物接受大約1000EIN的豬胰島，所述胰島按照Bowen，等,/五矽.A/^/.5W.，58:441-447(1980)中的方法在血塊中移植，該文獻(xiàn)通過參考并入本文中。簡言之，將胰島從懸液中沉淀下來，吸去培養(yǎng)基。然后，從動(dòng)物體內(nèi)取約5~10jil血，加入胰島中，并使之凝結(jié)。用等體積的氯胺酮(167mg/dl)、曱苯漆溱(33mg/ml)和鹽水麻醉受體動(dòng)物。以0.5ml/100g的劑量皮下施用所述混合物。然后，在左肋切開一個(gè)小口以暴露腎，利用解剖顯^t鏡在腎嚢上切開一個(gè)小口，將腎嚢與腎分離開，將胰島/血塊置于嚢下，縫合切口，使動(dòng)物復(fù)原。在移植3839天后對動(dòng)物施行腎切除術(shù)。簡言之，在麻醉之后，暴露帶有移植物的腎，結(jié)扎腎血管，摘除每個(gè)動(dòng)物的腎。5天之后處死動(dòng)物，收集胰腺用于在組織學(xué)上證實(shí)胰島P細(xì)胞完全破壞。將組織樣品在10%中性緩沖的甲醛溶液中放置24小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到70%乙醇中。接下來，用石蠟包埋組織，用蘇木精和伊紅染色5nm的切片。使用標(biāo)準(zhǔn)方法對胰腺和帶移植物的腎的切片針對含有胰島素和胰高血糖素的細(xì)胞進(jìn)行染色，然后進(jìn)^ff研究。所有小鼠均在胰島移植后血糖恢復(fù)正常。在腎切除術(shù)后，所有小鼠在四天內(nèi)均變成高jMt。實(shí)施例5此實(shí)施例描述了設(shè)計(jì)用于確定瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠(由不同瓊脂糖制成)在受體動(dòng)物中引起組織反應(yīng)(即炎癥)程度的實(shí)驗(yàn)。使用兩種大鼠林系，即Wistar和SpragueDawley大鼠?？偣矞y試了29只大鼠(14只Wistar，15只SpragueDawley)。使用每個(gè)林系的3只大鼠測試本發(fā)明思^#金瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠。使用每個(gè)林系的3只大鼠測試瓊脂糖類型FMCHGT(P)和Amresco。使用2只Wistar大鼠以及4只SpragueDawley大鼠測試SigmaHV瓊脂糖。最后，使用3只Wistar大鼠以及2只SpragueDawley大鼠測試SigmaLV瓊脂糖珠。將每種類型共60個(gè)空^Mi^到大鼠的J^M腔中，兩只除外。兩只SpragueDawley大鼠接受54或59個(gè)SigmaHV瓊脂糖珠。觀察大鼠3個(gè)月，然后處死。取出各個(gè)器官以研究炎癥(脾、肝、腎、骨骼肌、胰腺和腸系膜)。使用美國獸醫(yī)病理學(xué)會(huì)(theAmericanCollegeofVeterinaryPathologists)^人可的標(biāo)準(zhǔn)通過炎癥來評價(jià)組織。所述評價(jià)使用6級尺度來評價(jià)炎癥，基本如下0=正常1=低度(少于10%的炎癥)2=輕度(10-25%的炎癥)3=中度(25-50%的炎癥)4=顯著(50-75%的炎癥)5=重度(多于75%的炎癥)評價(jià)每個(gè)動(dòng)物的組織，然后取平均值。結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>每一林系的平均嚴(yán)重程度得分總和<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>很明顯，本發(fā)明的瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠炎性最低。對狗進(jìn)行了額外的炎癥研究，其比較了本發(fā)明的珠和FMCHGT(P)瓊脂糖(FMCHGTP瓊脂糖)制成和用它包被的珠。同樣，本發(fā)明的瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠炎性更低。在另一研究中，狗接受本發(fā)明的瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠，其含有豬胰島。在2.5年后處死所述動(dòng)物，只觀察到低度的炎癥。相比于未移植的對照動(dòng)物，腹膜和腸系膜看起來非常正常。實(shí)施例6在這些實(shí)驗(yàn)中，將體外培養(yǎng)的含有胰島的思##金瓊脂糖大珠與對照(空)大珠進(jìn)行比較。如上文實(shí)施例3中所述，制備包裹在思,(Seakem)瓊脂糖中的腹島。使用12只雄性自發(fā)性糖尿病BB大鼠作為受試動(dòng)物。所有的動(dòng)物均為10-15周齡，并已顯示出臨床糖尿病跡象3-16天。在到達(dá)后20-21天，用以2.2-2.3ml/kg體重的劑量皮下施用的氯胺酮/甲苯瘞溱/NaCl麻醉所述BB大鼠。麻醉之后，使所述動(dòng)物接受含有胰島的大^Ni^物，其劑量等價(jià)于每日所需胰島素的1.0倍，或者接受與此數(shù)量相當(dāng)?shù)目沾笾?。移植之后，觀察動(dòng)物，每天記錄臨床觀察，包括一般狀況(好、良或差)、體重、血糖、尿糖、和尿酮。在;M9f究全程中收集血清樣品，以用于測定胰島素、胰高血糖素和豬c肽。使用放射性免疫測定測量這些參數(shù)。還實(shí)施了腹膜內(nèi)葡萄糖耐量測試。移植97天后，對所述動(dòng)物進(jìn)行完整的尸體剖檢。麻醉動(dòng)物，放血，暴露^M腔。在研究的97天全程中，6只接受了含胰島的思^f瓊脂糖珠的動(dòng)物均不需要施用胰島素。而接受空大珠的動(dòng)物則相反。在研究開始后兩天開始對這些動(dòng)物施用外源胰烏素，因?yàn)檠撬缴?00-500mg/dl。這些對照動(dòng)物中的兩只在研究的第三天死亡，推測是由于胰島素缺乏。相比于對照，在接受了含胰島的思科姆瓊脂糖珠的動(dòng)物中平均每日血糖水平顯著更低。同時(shí)，六只測試動(dòng)物甚至在沒有進(jìn)行胰島素治療時(shí)也顯示出非常窄的每日血糖偏差范圍。一個(gè)月后，這些接受了胰島的動(dòng)物變成中度高血糖，但是顯示出有限的血糖波動(dòng)(約100mg/dl)。而對照則相反，其顯示出劇烈的變化，約400-500mg/dl,即便j!施用了2-3U/天的外源胰島素。開始時(shí)，對所有動(dòng)物實(shí)施腹膜內(nèi)葡萄糖耐量測試，以證實(shí)I型糖尿病的臨床診斷。在移植8天和90天后也進(jìn)行了此測試。移植前5天，對葡萄糖負(fù)荷的應(yīng)答不明顯，但是在移植后第8天，含胰島大珠的受者顯示出對葡萄糖負(fù)荷的明顯應(yīng)答，即血糖開始時(shí)升高，然后回復(fù)到正常血糖。高血糖在接受空大珠的動(dòng)物中也沒有被抑制，即^A同時(shí)進(jìn)行了如上文所述的胰島素治療。移植后卯天進(jìn)行另一次腹膜內(nèi)葡萄糖耐量測試。接受了胰島大珠的大鼠再次重建了基線血糖，但是起始血糖水平明顯更高，即約400mg/dl。接受了空大珠的大鼠不能重建基線錄。對豬C肽的測定在移植之前的研究動(dòng)物或在空大珠受者中未檢測到該肽。相反，在植入了胰島大珠的大鼠血清中常規(guī)檢測到所述肽，在移植后21天的平均水平為0.8800.249ng/ml，在研究終止時(shí)為0.6620.160ng/dl。還檢測了研究動(dòng)物的糖尿、酮尿和對施用碳酸氫鹽的需要。在移植前沒有顯著差異；但是，在移植之后，胰島大珠的受者糖尿(56個(gè)樣本中的37個(gè)，相對于81個(gè)中的67個(gè))和酮尿(64個(gè)樣本中的20個(gè)，相對于54個(gè)中的32個(gè))的發(fā)生顯著較少。對碳酸氫鹽治療的需要也顯著降低(2個(gè)治療，相對于26個(gè))。實(shí)施例7接下來的實(shí)驗(yàn)證明包入了胰島的思科姆瓊脂糖大珠可在體外長期培養(yǎng)，并仍然保持其功能。在這些實(shí)驗(yàn)中，使用滿足與上文實(shí)施例6相同標(biāo)準(zhǔn)的12只的一組糖尿病BB大鼠，還使用了23只7周齡Wistar-Furth大鼠。此第二組大鼠作為正常對照。通it^靜脈對這些Wistar-Furth大鼠中的5只注射65mg/kg鏈脲霉素，以誘導(dǎo)糖尿病。當(dāng)觀察到兩次連續(xù)的血糖讀數(shù)>500mg/dl時(shí)，大鼠開始接受胰島素治療，如下文所述。在到達(dá)后20-21天，4吏用肌內(nèi)施用的0.1ml/100g劑量的氯胺酮/(60mg/ml)、甲苯蓉噢(6mg/ml)/布托啡諾(3mg/ml)來麻醉動(dòng)物o麻醉后，所有BB大鼠接受含有胰島的思科姆瓊脂糖珠，如上文所述。所述大鼠分成3組，每組4只，接受體外培養(yǎng)了9周、40周或67周的大珠。所施用的大珠的量相當(dāng)于動(dòng)物每日胰島素需求的1.0倍。五只Wistar-Furth大鼠接受體外培養(yǎng)了7.8-11.5周的大珠，劑量與BB大鼠相同。即每只Wistar-Furth大鼠約45-49個(gè)大珠，每只BB大鼠56-60個(gè)。在實(shí)驗(yàn)過程中，大鼠平均增重約75g。因此，在第一次^后第97天對BB大鼠進(jìn)行補(bǔ)充^。大鼠^前的平均胰島素需求是0.0083U胰島素/g體重。由此值計(jì)算出需要另外的17個(gè)含胰島大珠，以每24小時(shí)產(chǎn)生39.19mU胰島素。如下文所說明的，由于在第二次;tfUV之前從每只大鼠中移出了4個(gè)珠，因此施用培養(yǎng)了19周的21個(gè)大珠。Wistar-Furth大鼠未接受第二次;^。在實(shí)施例7中實(shí)施的多種測定在此處也使用相同方法實(shí)施。在移植后201-202天，也如上文所述的進(jìn)行完整的尸體剖檢。圖1中顯示平均每日血糖水平。^后，所有BB大鼠中恢復(fù)正常血糖(100-200mg/dl)約一個(gè)月。此后，BB大鼠發(fā)生中度高iMt(200-400mg/dl)，這一情況在研究的剩余時(shí)間內(nèi)一直持續(xù)。中度高血糖的產(chǎn)生和達(dá)到最大體重同時(shí)發(fā)生。在研究的剩余時(shí)間內(nèi)體重保持一致，而血糖水平在300-400mg/dl之間波動(dòng)。在接受含胰島思科姆金大珠的3組大鼠之間沒有觀察到平均每日J(rèn)MI水平的差異，不管珠的體外培養(yǎng)時(shí)間是多少。已誘導(dǎo)出糖尿病的Wistar-Furth大鼠也顯示約一個(gè)月的正常血糖，之后觀察到中度高血糖。應(yīng)該注意，如上文所述，研究的第97天對BB大鼠中進(jìn)行了第二次;^。這一第二次植入未影響每日血糖值。還測定了豬C肽，并在所有的3組BB大鼠中都檢測到了。在實(shí)驗(yàn)最初88天中，平均豬C肽水平從0.6-0.9ng/ml降至0.2-0.4ng/ml。在第116天，在第二次;^之后，該肽的水平提高到平均為0.3-0.7ng/ml，尸體剖檢時(shí)在腹膜液中觀察到了40倍的提高。在研究全程中對所有接受胰島大^入的大鼠進(jìn)行葡萄糖負(fù)荷操作。經(jīng)過不同培養(yǎng)時(shí)間的大珠在移植后應(yīng)答葡萄糖負(fù)荷的能力沒有觀察到差異。具體而言，所有BB大鼠的血糖水平約為初始值100-200mg/dl的兩倍。12只動(dòng)物中的10只在120分鐘內(nèi)回復(fù)到基幾j6l^。此應(yīng)答與正常Wistar-Furth動(dòng)物中所觀察到的相似。所有的研究動(dòng)物最終確實(shí)都變?yōu)橹卸雀哐?，但是移植后?05天的葡萄糖負(fù)荷顯示血糖最初升高，然后回復(fù)到基線血糖。在移植后第200天，施用葡萄糖之后只是在基線JMI上略有增加，然后就回復(fù)到基線JMI。與上文Transplantation中Jain等的工作相比，這些研究的結(jié)果顯示，含有胰島的思科姆金瓊脂糖珠出人意料的優(yōu)于Jain等所報(bào)道的。例如，在Jain等的才艮道中，40%的受試動(dòng)物在第200天之前死亡，而使用本發(fā)明大珠的死亡率是O。另夕卜，本文所實(shí)現(xiàn)的結(jié)果是使用Jain等所報(bào)道的珠量的一半實(shí)現(xiàn)的。另外，在本文未詳細(xì)說明的結(jié)果中，在尸體剖檢之后測定了所回收的大珠的胰島素產(chǎn)生水平，其顯著高于Jain等所報(bào)道的尸體剖檢之后所回收大珠的水平。實(shí)施例8進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以比較本發(fā)明的珠與FMCHGT(P)瓊脂糖制成和包被的珠的強(qiáng)度。在這些測試中，將珠單個(gè)置于壓迫設(shè)備中，該設(shè)備具有上板和下板。上板以12英寸/分鐘的速率向下移動(dòng)，壓*直至其破裂。以lbf測定壓力(最大壓縮時(shí))。對于HGT(P),最大壓力范圍是0.714lbf至3.183lbf，平均為1.958，標(biāo)準(zhǔn)差為0.5444。對于本發(fā)明的產(chǎn)品，其范圍是2.322lbf至6.418lbf，平均為4.282，標(biāo)準(zhǔn)差為1.096。顯然，本發(fā)明的珠比其它瓊脂糖-瓊脂糖包被的珠更堅(jiān)固。前述實(shí)施例描述了本發(fā)明的多個(gè)特征，其涉及含有分泌細(xì)胞的被瓊脂糖包被的瓊脂糖大珠，其中所使用的瓊脂糖是思科姆金瓊脂糖。如本文所述的術(shù)語"大珠"指基本為球形的結(jié)構(gòu)，其直徑為約4至約10-12mm,最優(yōu)選直徑為約6至約8mm。第二瓊脂糖層優(yōu)選厚度為約0.05至約5mm，更優(yōu)選厚度為約0.5mm至約5mm，更優(yōu)選約1.0至約3mm，最優(yōu)選厚度為約1.0至約2.0mm。第二瓊脂糖層可以但不必須是思科姆金瓊脂糖。"大珠"作為優(yōu)選結(jié)構(gòu)使用；但是，任何包裹分泌細(xì)胞的固體瓊脂糖結(jié)構(gòu)(優(yōu)選包被第二瓊脂糖層)均是本發(fā)明的特征。所述分泌細(xì)胞可有所不同。可以包裹任何產(chǎn)生所需分泌產(chǎn)物的細(xì)胞或細(xì)胞器。胰島、癌細(xì)胞和干細(xì)胞是可這樣使用的材料類型示例。每個(gè)珠可含有不同數(shù)目的細(xì)胞器，例如，對于胰島為約50個(gè)至約5000個(gè)胰島，更優(yōu)選約100個(gè)至約2500個(gè)胰島，更優(yōu)選約250個(gè)至約1000個(gè)，最優(yōu)選約475個(gè)至約550個(gè)胰島。特別優(yōu)選約500個(gè)胰島。本發(fā)明的其它方面對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是很明顯的，不需要進(jìn)一步說明。所使用的術(shù)語和表述用于描述而非限制，使用這些術(shù)語和表述并不旨在排除任何所示及所述特征的等價(jià)形式或其部分，應(yīng)該理解，在本發(fā)明的范圍內(nèi)可能有多種改變。權(quán)利要求1.一種生產(chǎn)包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠的方法，其包括(a)將分泌細(xì)胞懸浮在思科姆金瓊脂糖中，(b)由步驟(a)的懸浮分泌細(xì)胞形成珠，(c)在潤濕空氣中孵育步驟(b)的珠，(d)使用瓊脂糖包被步驟(c)的珠，以形成包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠。2.權(quán)利要求l的方法，其還包括在5。/。瓊脂糖中滾動(dòng)步驟(c)的珠，使所述滾動(dòng)的珠與礦物油接觸以及洗滌所述滾動(dòng)的珠，以形成所述包被有瓊脂糖的思，金瓊脂糖分泌細(xì)胞大珠。3.權(quán)利要求l的方法，其中所述分泌細(xì)胞是胰島。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述胰島是人胰島。5.權(quán)利要求3的方法，其中所述胰島是牛胰島。6.權(quán)利要求3的方法，其中所述胰島是豬胰島。7.權(quán)利要求3的方法，其中所述珠含有約50至約5000個(gè)胰島。8.權(quán)利要求3的方法，其中所述珠含有約100至約2500個(gè)胰島。9.權(quán)利要求3的方法，其中所述珠含有約475至約550個(gè)胰島。10.權(quán)利要求1的方法，其中所述4^是直徑約4mm至約12mm的大珠。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述大珠的直徑為約4mm至約10mm。12.權(quán)利要求10的方法，其中所述大珠的直徑為約4mm至約8mm。13.權(quán)利要求10的方法，其中所述大珠的直徑為約6mm至約8mm。14.權(quán)利要求1的方法，其包括用約0.05mm至約50mm的瓊脂糖層包被所it^。15.權(quán)利要求14的方法，其包括用約1.0mm至約3.0mm的瓊脂糖層包被所ii^t。16.權(quán)利要求14的方法，其包括用約1.00mm至約2.0mm的瓊脂糖層包被所述珠。17.—種包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)M。18.根據(jù)權(quán)利要求17的包被有瓊脂糖的思^金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所*含有胰島。19.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思自金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所述胰島是人胰島。20.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所述胰島是牛胰島。21.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所述胰島是豬胰島。22.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思^Mf金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其含有約50至約5000個(gè)胰島。23.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其含有約100至約2500個(gè)胰島。24.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思,金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其含有約475至約550個(gè)胰島。25.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思,金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其直」徑為約4mm至約12mm。26.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思##金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其直;徑為約4mm至約10mm。27.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思^Mf金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其直徑為約4mm至約8mm。28.權(quán)利要求18的包被有瓊脂糖的思^t金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其直《圣為約6mm至約8mm。29.權(quán)利要求17的包被有瓊脂糖的思科姆金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所述珠包,皮有約0.05mm至5.0mm的J京月旨糖層。30.權(quán)利要求17的包被有瓊脂糖的思,金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所^JK包被有約1.0mm至3.0mm的J京月旨糖層。31.權(quán)利要求17的包被有瓊脂糖的思^Ht金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠，其中所述珠包被有約1.0mm至2.0mm的多京月旨糖層。32.—種治療受試者的方法，所述受試者患有由分泌細(xì)胞功能受損所引起的疾病，所述方法包括以足以緩解所述疾病的量施用權(quán)利要求17的包被有瓊脂糖的思,金瓊脂糖分泌細(xì)胞珠。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述疾病是胰島素依賴性糖尿病。34.權(quán)利要求32的方法，其中所i^含有胰島。35.權(quán)利要求34的方法，其中胰島是人胰島。36.權(quán)利要求34的方法，其中所述胰島是豬胰島。37.權(quán)利要求34的方法，其中所述胰島是牛胰島。38.權(quán)利要求32的方法，其中所述珠置于所述受試者的腹膜腔內(nèi)。全文摘要本發(fā)明描述了包被有瓊脂糖的含有分泌細(xì)胞的珠結(jié)構(gòu)的制備和用途。所述珠由特定瓊脂糖即思科姆金瓊脂糖制成，直徑優(yōu)選為4mm-12mm，其中優(yōu)選含有胰島。文檔編號A01N65/00GK101272690SQ200680035237公開日2008年9月24日申請日期2006年9月14日優(yōu)先權(quán)日2005年9月26日發(fā)明者勞倫斯·加茲達(dá),巴里·史密斯申請人:羅格森研究所