一種蜜蜂巢脾多糖提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蜂產(chǎn)品領(lǐng)域，尤其涉及一種蜜蜂巢脾多糖提取物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蜜蜂巢脾是蜜蜂生活、貯存食物、繁衍育子的場所，是一種天然的產(chǎn)物。它含有樹 月旨、油脂、生物堿、鞣質(zhì)、有機酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、酶類、昆蟲激素、多糖以及苷類等多種生物 活性成分。作為我國傳統(tǒng)的動物中藥，根據(jù)近年來的研究表明蜜蜂巢脾具有治療鼻炎、急性 乳腺炎、乙型肝炎等疾病的效果。
[0003] 巢脾隨著繁育蜜蜂世代的增加，成分也變得相當(dāng)復(fù)雜。老巢脾含有大量蜜蜂生產(chǎn) 和代謝的各種產(chǎn)物，如繭衣、蜂膠、蜂王漿、花粉、蜂蜜等物質(zhì)。蜜蜂老巢脾的化學(xué)成份也較 為復(fù)雜，研究發(fā)現(xiàn)蜜蜂巢脾水浸膏中含有多糖、生物堿、酶類、生物激素等成分。近年來，多 糖所具有的各種生理功能逐漸為人們所重視，如增強免疫力、降低血糖濃度、降血脂、抗腫 瘤、抗疲勞及抗衰老等種生理功能，在醫(yī)藥和食品領(lǐng)域顯示了很好的應(yīng)用前景，因而受到人 們的廣泛關(guān)注。而蜜蜂巢脾多糖的提取及應(yīng)用尚處于空白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明實施例提供一種蜜蜂巢脾多糖提取物及其制備方法，能夠增加 蜜蜂巢脾的利用價值。
[0005] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的實施例采用如下技術(shù)方案：
[0006] -方面，本發(fā)明實施例提供一種蜜蜂巢脾多糖提取物的制備方法，包括：
[0007] -種蜜蜂巢脾多糖提取物的制備方法，包括步驟：
[0008] 步驟1、將蜜蜂巢脾冷凍后，粉碎、過篩后使用乙醚回流除蠟，除蠟后鼓風(fēng)烘干，揮 發(fā)乙醚，得到巢脾干燥粉末；
[0009] 步驟2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末質(zhì)量10倍以上的蒸餾水后，加入木瓜 蛋白酶進(jìn)行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量為每l〇〇g巢脾干燥粉末添加7.2-12 萬U，酶解溫度為40-60 °C，酶解時間0.5-1.5h;
[0010] 步驟3、將所述酶解液通過120目紗布過濾，取上清液；
[0011] 步驟4、在進(jìn)行步驟3操作后所得的濾渣中，再加入10倍以上的蒸餾水后，加入7.2-12萬U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重復(fù)上述酶解及過濾操作1-2次;將取得的上清液 合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A;
[0012] 步驟5、將所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100°C下進(jìn)行濃縮l-3h，離心后棄去沉 淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B;
[0013] 步驟6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其體積1/4的由氯仿和正丁醇配制成的 混合液，充分抽提20min后，進(jìn)行4000r-10000r/min的離心操作5-20min，取上清液;其中，在 制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的體積比為4:1;對獲取的所述上清液再重復(fù)本步驟的 操作3次，獲得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C;
[0014] 步驟7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其體積3-5倍的無水乙醇，在0-26°C下醇 析4-24h后，進(jìn)行4000r-10000r/min的離心操作10-30min，棄上清液并鼓風(fēng)干燥揮發(fā)干乙 醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
[0015] 可選地，所述將蜜蜂巢脾冷凍后，粉碎、過篩后使用乙醚回流除蠟，除蠟后鼓風(fēng)烘 干，揮發(fā)乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：將西方蜜蜂Api smell if era L.的三年以上的巢 脾，-20°C冷凍4h以上，粉碎后過篩，巢脾粉使用乙醚回流除蠟，除蠟后鼓風(fēng)烘干，揮發(fā)乙醚， 得到巢脾干燥粉末。
[0016] 可選地，所述將蜜蜂巢脾冷凍后，粉碎、過篩后使用乙醚回流除蠟，除蠟后鼓風(fēng)烘 干，揮發(fā)乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：將西方蜜蜂Api smell if era L.的三年以上的巢 脾，-20°C冷凍4h以上，粉碎后過篩，巢脾粉使用乙醚回流除蠟；
[0017] 采用乙醚回流脫脂后使用80%v/v乙醇進(jìn)行脫脂脫單糖處理；
[0018] 鼓風(fēng)烘干，得到巢脾干燥粉末。
[0019] 可選地，步驟1中的所述過篩具體為:過50-120目篩。
[0020] 可選地，所述在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末質(zhì)量10倍以上的蒸餾水后，加 入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量為每l〇〇g巢脾干燥粉末添加 7.2-12萬U，酶解溫度為40-60 °C，加熱時間0.5-1.5h，包括：
[0021 ]在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末質(zhì)量15倍的蒸餾水后，加入食品級的木瓜蛋 白酶進(jìn)行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量為每l〇〇g巢脾干燥粉末添加9.6萬U，酶 解溫度為50 °C，加熱時間1.5h;
[0022]所述在進(jìn)行步驟3操作后所得的濾渣中，再加入10倍以上的蒸餾水后，加入7.2-12 萬U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重復(fù)上述酶解及過濾操作1-2次，包括:在進(jìn)行步驟3 操作后所得的濾渣中，再加入15倍的蒸餾水后，加入9.6萬U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白 酶，重復(fù)上述酶解及過濾操作2次。
[0023]可選地，所述往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其體積3-5倍的無水乙醇，在0-26 °C下醇析4-24h后，進(jìn)行4000r-10000r/min的離心操作10-30min，棄上清液并鼓風(fēng)干燥揮發(fā) 干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖，包括:往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其體積4倍的無水乙 醇，在4°C下醇析12h，進(jìn)行8000r/min的離心操作20min，棄上清液并鼓風(fēng)干燥揮發(fā)干乙醇， 得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
[0024]另一方面，本發(fā)明實施例提供一種蜜蜂巢脾多糖提取物，包括:所述蜜蜂巢脾多糖 提取物根據(jù)前述任一所述制備方法獲得，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖，且多糖的 含量大于50%。
[0025]可選地，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，總多糖含量為20-80%。
[0026] 本發(fā)明實施例提供的一種蜜蜂巢脾多糖提取物及其制備方法，能夠從蜜蜂巢脾中 提取多糖提取物，能夠增加蜜蜂巢脾的利用價值，且生產(chǎn)工藝簡單，成本較低。
【附圖說明】
[0027] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0028] 圖1為本發(fā)明的實施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制備方法的流程示意圖；
[0029] 圖2為酶解溫度對提取蜜蜂巢脾多糖的影響曲線圖；
[0030] 圖3為酶解時間對提取蜜蜂巢脾多糖的影響曲線；
[0031]圖4為酶添加量對提取蜜蜂巢脾多糖的影響曲線圖。
【具體實施方式】
[0032] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明實施例一種蜜蜂巢脾多糖提取物及其制備方法進(jìn)行詳細(xì) 描述。
[0033] 應(yīng)當(dāng)明確，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；?于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其 它實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0034] 圖1為本發(fā)明的實施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制備方法的流程示意圖。參看圖1， 本發(fā)明一種蜜蜂巢脾多糖提取物的制備方法實施方式，包括步驟：
[0035] 步驟1、將蜜蜂巢脾冷凍后，粉碎、過篩、使用乙醚回流除蠟，除蠟后鼓風(fēng)烘干，揮發(fā) 乙醚，得到巢脾干燥粉末；
[0036]步驟2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末質(zhì)量10倍以上的蒸餾水后，加入木瓜 蛋白酶進(jìn)行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量為每l〇〇g巢脾干燥粉末添加7.2-12 萬U(unit，即〃單位〃），酶解溫度為40-60°C，酶解時間0.5-1.5h;
[0037] 步驟3、將所述酶解液通過120目紗布過濾，取上清液；
[0038] 步驟4、在進(jìn)行步驟3操作后所得的濾渣中，再加入10倍以上的蒸餾水后，加入7.2-12萬U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重復(fù)上述酶解及過濾操作1-2次;將取得的上清液 合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A;
[0039] 步驟5、將所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100°C下進(jìn)行濃縮l_3h，離心后棄去沉 淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B;
[0040] 步驟6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其體積1/4的由氯仿和正丁醇配制成的 混合液，充分抽提20min后，進(jìn)行4000r-10000r/min的離心操作5-20min，取上清液;其中，在 制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的體積比為4:1;對獲取的所述上清液再重復(fù)本步驟的 操作3次，獲得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C;
[0041] 步驟