連接管，9、切割后小干細胞球收集瓶，10、注射器。
【具體實施方式】
[0018]下面通過具體實施例，并結合附圖，對本發(fā)明的技術方案作進一步的具體說明。應當理解，本發(fā)明的實施并不局限于下面的實施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護范圍。
[0019]實施例1:
如圖1和圖2所示的一種干細胞球切割收集裝置，該裝置由干細胞球切割器6、空氣緩沖瓶2、三通管4、培養(yǎng)瓶5、干細胞球收集瓶3、切割后小干細胞球收集瓶9和具有正壓和負壓雙向抽氣功能的抽氣栗I組成。
[0020]干細胞球切割器和干細胞球收集瓶之間由管路連接，該干細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網7。篩網為不銹鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350 μπι和104 μ m，350 μ m的篩網靠近干細胞球收集瓶，兩個篩網之間的距離為20mm。干細胞球切割器6的出口端設有一個縮口的連接管8。
[0021]抽氣栗與空氣緩沖瓶通過管路連接，空氣緩沖瓶與干細胞球收集瓶通過管路連接，培養(yǎng)瓶和干細胞球收集瓶3通過管路分別與三通管的兩個接口相連，三通管的第三個接口與干細胞球切割器連接。
[0022]本發(fā)明裝置的使用過程如下:
1、干細胞球收集過程:如圖1所示，關閉三通管向干細胞球切割器連接的開關，移液管插入含干細胞球的培養(yǎng)瓶5中，打開抽氣栗，利用負壓使培養(yǎng)瓶中的干細胞球伴隨液體全部抽入干細胞球收集瓶3中，可以收集含神經干細胞球的多瓶培養(yǎng)液。
[0023]2、干細胞球切割收集過程:如圖3所示，對干細胞球收集瓶內的干細胞球進行切割和收集過程，打開三通管向干細胞球切割器連接的開關，同時也關閉了培養(yǎng)瓶5進入干細胞球切割器的通路，打開正壓抽氣栗開關，利用正壓，使干細胞球收集瓶3中含神經干細胞球向干細胞球切割器方向流通，利用抽氣栗正壓使干細胞球伴隨液體快速通過鈍性的不銹鋼篩網，開始先通過孔徑350 μπι的篩網，再通過孔徑104 μm的篩網，達到大神經干細胞球變成小神經干細胞球的目的。該裝置適合大規(guī)模培養(yǎng)神經干細胞之用。
[0024]實施例2:
如圖4所示的干細胞球切割收集裝置，該裝置包括注射器10和與注射器相連的干細胞球切割器6，該干細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網7。注射器10體積為100-200ml，干細胞球切割器6的出口端設有一個縮口的連接管8。所述的篩網為不銹鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350 μπι和104 μm，孔徑較小的篩網靠近切割后小干細胞球收集瓶9。兩個篩網之間的距離為20mm。該裝置適合實驗室或小規(guī)模培養(yǎng)神經干細胞之用。
[0025]先將注射器吸入待切割的10ml含干細胞球的培養(yǎng)液，利用人工手的推力，使10ml含干細胞球的培養(yǎng)液快速通過干細胞球切割器與連接管，進入切割后小干細胞球收集瓶9。
[0026]實施例3
一種神經干細胞球的切割分離傳代方法，該方法包括如下步驟:a.采用實施例1所述的干細胞球切割收集裝置對干細胞球進行切割分離:利用抽氣栗的負壓將含有干細胞的培養(yǎng)液吸入干細胞球收集瓶中，再利用抽氣栗的正壓使干細胞球伴隨液體快速通過干細胞球切割器，使鈍性切割成小干細胞團塊，然后進入培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶內預置細胞培養(yǎng)液，圖5為切割前的神經干細胞球，圖6為神經干細胞球切割成小塊，圖7為顯微鏡放大400倍的單個神經干細胞和小團塊。
[0027]b.將a步驟獲得的含有小干細胞團塊的細胞培養(yǎng)液進行分瓶培養(yǎng)；
c、分瓶培養(yǎng)時，每3-7天更換一次新鮮細胞培養(yǎng)液，每20-30天重復a步驟對干細胞球進行切割分離。
[0028]本實施例中的干細胞球為神經干細胞，神經干細胞球的直徑達到500-2000 μ m大小時需要進行干細胞球切割。神經干細胞球切割收集裝置將每一個神經干細胞球切割成3-8小塊，進行1: 2、1:4或1:6分瓶傳代培養(yǎng)。這種鈍性切割后神經干細胞球培養(yǎng)30天后，神經干細胞又呈現球狀，見圖8。通過這種鈍性切割神經干細胞球達到長期培養(yǎng)的目的。
[0029]通過本發(fā)明的傳代分離方法，獲得的小神經球大小均勻。對干細胞、神經干細胞和神經前體細胞的幾乎沒有損傷，體外傳代時間長，并且無貼壁分化的神經細胞。
[0030]以上所述的實施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權利要求所記載的技術方案的前提下還有其它的變體及改型。
【主權項】
1.一種干細胞球切割收集裝置，其特征在于:該裝置包括干細胞球切割器(6)、干細胞球收集瓶(3)和具有正壓和負壓雙向抽氣功能的抽氣栗(1)，干細胞球切割器和干細胞球收集瓶之間由管路連接，該干細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網(7)。2.根據權利要求1所述的干細胞球切割收集裝置，其特征在于:所述的篩網為不銹鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350±40 μπι和104±20 μπι，孔徑較大的篩網靠近干細胞球收集瓶。3.根據權利要求1所述的干細胞球切割收集裝置，其特征在于:兩個篩網之間的距離為 20mm。4.根據權利要求1所述的干細胞球切割收集裝置，其特征在于:該裝置還包括空氣緩沖瓶(2)、三通管(4)、培養(yǎng)瓶(5)和切割后小干細胞球收集瓶(9)，抽氣栗與空氣緩沖瓶通過管路連接，空氣緩沖瓶與干細胞球收集瓶通過管路連接，培養(yǎng)瓶和干細胞球收集瓶(3 )通過管路分別與三通管的兩個接口相連，三通管的第三個接口與干細胞球切割器連接。5.根據權利要求1所述的干細胞球切割收集裝置，其特征在于:干細胞球切割器(6)的出口端設有一個縮口的連接管(8 )。6.一種干細胞球切割收集裝置，其特征在于:該裝置包括注射器(10)和與注射器相連的干細胞球切割器(6)，該干細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網(7)。7.根據權利要求6所述的干細胞球切割收集裝置，其特征在于:所述的篩網為不銹鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350±40 μπι和104±20 μπι，孔徑較大的篩網靠近干細胞球收集瓶。8.—種干細胞球的切割分離傳代方法，其特征在于該方法包括如下步驟: a.采用權利要求1或6所述的干細胞球切割收集裝置對干細胞球進行切割分離:將含有干細胞的培養(yǎng)液吸入干細胞球收集瓶后，利用流體壓力使干細胞球經細胞球切割器鈍性切割成小干細胞團塊，然后進入培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶內預置細胞培養(yǎng)液； b.將a步驟獲得的含有小干細胞團塊的細胞培養(yǎng)液進行分瓶培養(yǎng)； c.分瓶培養(yǎng)時，每3-7天更換一次新鮮細胞培養(yǎng)液，每20-30天重復a步驟對干細胞球進行切割分離。9.根據權利要求7所述的干細胞球的切割分離傳代方法，其特征在于:所述干細胞球為神經干細胞，神經干細胞球的直徑達到500-2000 μπι大小時用干細胞球切割收集裝置將每一個神經干細胞球切割成3-8小塊，進行1: 2、1:4或1:6分瓶傳代培養(yǎng)。
【專利摘要】本發(fā)明為解決神經干細胞傳代過程導致的神經干細胞易發(fā)生細胞凋亡、突變、細胞損傷、神經干細胞分化以及操作時間長和神經球大小不均一等問題，提供一種干細胞球切割收集裝置。一種干細胞球切割收集裝置，該裝置包括干細胞球切割器、干細胞球收集瓶和具有正壓和負壓雙向抽氣功能的抽氣泵，干細胞球切割器和干細胞球收集瓶之間由管路連接，該干細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網。本發(fā)明解決了體外培養(yǎng)神經干細胞易分化和易死亡的技術難題，達到長期培養(yǎng)擴增人神經干細胞的目的，而且人神經干細胞的特性穩(wěn)定，質量可控。
【IPC分類】C12M3/00, C12N5/0797
【公開號】CN105176812
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】陳世明, 章瑾
【申請人】浙江奧瑞健生物技術有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年7月28日