亞砷酸鈉在制備治療細(xì)粒棘球蚴病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及亞砷酸鈉的藥學(xué)應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)粒棘球蝴病(echinococcosis)，即囊性包蟲病(cysticechinococcosis，CE)，是一種主要流行于畜牧地區(qū)的人畜共患寄生蟲病，由細(xì)粒棘球絳蟲(echinococcosisgranulosus，Eg)的中絳期幼蟲寄生于人體所致，可發(fā)生在全身各個(gè)臟器，臨床上以肝棘球蝴病(echinococcosis of the liver)最為常見(jiàn)，約占75%，其次是肺包蟲?。辉摬〕嗜蛐苑植?，在我國(guó)以新疆、青海、甘肅、寧夏、西藏、內(nèi)蒙古、陜西和四川西部等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)地區(qū)常見(jiàn)。
[0003]目前，肝包蟲病首選外科手術(shù)治療，輔以藥物治療。傳統(tǒng)術(shù)式主要有肝包蟲內(nèi)囊摘除術(shù)、肝包蟲內(nèi)囊摘除術(shù)+外囊部分摘除術(shù)及肝部分切除術(shù)，近年來(lái)所采用的肝包蟲外膜內(nèi)外囊完整摘除術(shù)，盡管能大大降低包蟲病的復(fù)發(fā)率，最大程度地減少手術(shù)對(duì)肝實(shí)質(zhì)的損傷，但當(dāng)包蟲囊腫體積較大或貼近重要臟器或管道(肝門或膽管)時(shí)，則需要選擇肝包蟲內(nèi)囊摘除或肝包蟲內(nèi)囊摘除+外囊部分切除術(shù)。此種術(shù)式可能會(huì)有頭節(jié)的外漏和殘留，由于棘球蝴的生物學(xué)特性不同于一般的占位性病灶，手術(shù)后復(fù)發(fā)、播散轉(zhuǎn)移、未完全摘除及過(guò)敏性休克等難以避免，故術(shù)中和術(shù)后需要藥物輔助治療預(yù)防包蟲復(fù)發(fā)。因此，針對(duì)術(shù)中頭節(jié)外溢及頭節(jié)的處理不當(dāng)?shù)膯?wèn)題，尋找術(shù)中合適的局部化療藥物及口服抗包蟲藥對(duì)于肝包蟲病的治療至關(guān)重要。
[0004]基于此，本領(lǐng)域在體外進(jìn)行了多種藥物的嘗試及篩選，臨床常用的局部化療藥物有20%高滲鹽水，15min可100%殺滅細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)，但對(duì)周圍正常肝組織有一定的破壞作用，僅限于灌洗外囊；也有研究現(xiàn)95%的乙醇同樣可以有效殺死原頭節(jié)，但因會(huì)導(dǎo)致一系列嚴(yán)重的肝膽并發(fā)癥而限制其應(yīng)用；目前而言，總體上此類藥物都不同程度的存在治療方面的缺陷。
[0005]因此，亟需尋找一種用時(shí)短、高效、安全的化療藥物用于肝包蟲病的治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]申請(qǐng)人研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)亞砷酸鈉(sodium arsenite，NaAsO2)可以有效抑制和殺滅原頭節(jié)的生長(zhǎng)，從而可用于細(xì)粒棘球蝴病的臨床治療。
[0007]在本發(fā)明中，亞砷酸鈉(NaAsO2)，是一種三價(jià)砷劑，其分子量為129.91，白色粉末狀固體，微有潮解性，易溶于水，溶液呈弱堿性，亞砷酸鈉具有誘導(dǎo)細(xì)胞增生及凋亡的作用。
[0008]首先，本發(fā)明公開了亞砷酸鈉在制備治療細(xì)粒棘球蝴病藥物中的應(yīng)用。
[0009]上述的藥物，既可以是單純的以亞砷酸鈉作為活性成分原料，還可以是將亞砷酸鈉作為活性成分與其他輔料做成的各種制劑，例如常見(jiàn)的片劑、膠囊、滴丸、輸液、凍干粉針等，對(duì)于藥物劑型及其相應(yīng)輔料的選擇，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
[0010]上述的細(xì)粒棘球蝴病，既可以是動(dòng)物體上的，也可以是人體上的，根據(jù)該癥的臨床發(fā)病部位，通常指的是囊性肝包蟲病。
[0011]因此，本發(fā)明還公開了亞砷酸鈉在制備治療囊性肝包蟲病藥物中的應(yīng)用。
[0012]根據(jù)需要，可使用不同濃度的亞砷酸鈉，一般來(lái)說(shuō)，為了有效的殺滅病原，亞砷酸鈉的濃度不低于8 μ mol/Lo
[0013]針對(duì)常見(jiàn)的原頭節(jié)生長(zhǎng)密度，優(yōu)選的，亞砷酸鈉的濃度為16-20 ymol/L。
[0014]優(yōu)選的，連續(xù)用藥時(shí)間不低于4天。
[0015]在上述濃度下，對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)具有比較理想的抑制和殺滅效果。
[0016]在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還公開了亞砷酸鈉作為細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)抑制劑的應(yīng)用。
[0017]本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在多種實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，尤其是動(dòng)物離體實(shí)驗(yàn)情況下，為了防止由于動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)在體外的生長(zhǎng)和頭節(jié)外溢，需要加入必要的抑制劑，例如20%高滲鹽水等。
[0018]與上述類似，亞砷酸鈉的濃度不低于8ymol/L，優(yōu)選的，亞砷酸鈉的濃度為16-20 μmol/Lo
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為亞砷酸鈉對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)形態(tài)的影響，其中，A:對(duì)照組原頭節(jié)；B:8 μ mol/L他八802作用4d的原頭節(jié)；C:8 μ mol/L NaAsO 2作用8d的原頭節(jié)；D: 16 μ mol/L他八802作用4d的原頭節(jié)；Ε:16 μ mol/L NaAsO2作用8d的原頭節(jié)。
[0020]圖2為不同濃度的亞砷酸鈉對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)活力的影響。
[0021]圖3為亞砷酸鈉對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A:對(duì)照組原頭節(jié)；B:8 μ mol/L NaAs02 作用原頭節(jié) 3d ；C: 16 μ mol/L NaAs02 作用原頭節(jié) 3d。
[0022]圖4為亞砷酸鈉對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)內(nèi)Caspase-3酶活性的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為了說(shuō)明亞砷酸鈉(NaAsO2)的應(yīng)用效果，申請(qǐng)人進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)說(shuō)明亞砷酸鈉對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)的殺滅效果。
[0024]實(shí)驗(yàn)I 4&々802體外作用于細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)的效果
[0025]取新鮮自然感染細(xì)粒棘球蝴的綿羊肝臟并將其帶回實(shí)驗(yàn)室，用水沖洗干凈肝臟表面，并用75%酒精消毒表面，用無(wú)菌方式抽取含有原頭節(jié)的囊液置無(wú)菌培養(yǎng)瓶中。待原頭節(jié)自然沉淀后棄去上清囊液，在無(wú)菌條件下，用PBS液(PH:7.2)清洗3-5次，0.1 %伊紅染液做染液排斥實(shí)驗(yàn)，活力多98%，倒置顯微鏡下觀察原頭節(jié)蟲體呈內(nèi)陷型，散在密布，蟲體結(jié)構(gòu)飽滿，呈橢圓形，結(jié)構(gòu)清晰完整，內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，鈣顆粒清亮而明顯。
[0026]收集細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)，然后將原頭節(jié)分裝至含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中(青霉素100U/mL，鏈霉素100U/mL)，置37°C、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每3d換一次培養(yǎng)液，待用。
[0027]實(shí)驗(yàn)分組:履?1-1640培養(yǎng)基空白對(duì)照組、4“11101/1 NaAsO2組、8 μ mol/L NaAsO 2組、12 μ mol/L NaAsC^IL、16 μ mol/L NaAsO 2組、20 μ mol/L NaAsO 2組。取六孔板，每每孔均設(shè)5mL體系，按以上分組，配好相應(yīng)的培養(yǎng)液。
[0028]將在體外培養(yǎng)5天并適應(yīng)環(huán)境的細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)用PBS (pH = 7.2)清洗3次，0.1 %伊紅染色，倒置顯微鏡下觀察其存活率(多98% )，每組培養(yǎng)液中加入約2000個(gè)原頭節(jié)，置37°C，5% COJ?育箱內(nèi)培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下觀察NaAsO 2對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)形態(tài)和活力的影響。
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