一種抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用微膠囊飼料，特別涉及一種用于抗對(duì)蝦幼體弧菌病的 微膠囊飼料。
【背景技術(shù)】
[0002] 對(duì)蝦養(yǎng)殖是我國(guó)沿海漁業(yè)經(jīng)濟(jì)中的支柱產(chǎn)業(yè)，在工廠化苗種生產(chǎn)中，細(xì)菌性疾病 發(fā)病率最高、危害最大，一般從發(fā)病到幼體死亡只需十幾個(gè)小時(shí)，嚴(yán)重時(shí)在1-2天內(nèi)發(fā)病池 幼體累積死亡率達(dá)90%以上，幼體病狀表現(xiàn)為活力明顯下降，游泳不活潑，趨光性弱，腹部 弓起，在水中打旋，不攝食，體色變白等，其病原主要為弧菌。由于對(duì)蝦育苗期間病原弧菌的 種類繁多，且感染類型復(fù)雜，所以在育苗生產(chǎn)中難以做到具有針對(duì)性地有效防控，以致使這 些疾病構(gòu)成制約水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展的重大障礙，給育苗生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，對(duì)蝦 弧菌病的高效防控，以最大限度地降低其危害程度，將能顯著地提高對(duì)蝦育苗生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì) 效益。
[0003]目前對(duì)蝦育苗生產(chǎn)中很難控制副溶血弧菌及哈氏弧菌引起的疾病的發(fā)生與流行， 市場(chǎng)上缺乏一種使用方便適合對(duì)蝦幼體使用的抗弧菌病飼料。因此，開發(fā)研制對(duì)蝦幼體抗 弧菌病微膠囊飼料，對(duì)于有效控制對(duì)蝦育苗生產(chǎn)中弧菌病的發(fā)生與流行具有重要的應(yīng)用前 景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高對(duì)蝦幼體免疫 力、降低對(duì)蝦育苗生產(chǎn)中由病原副溶血弧菌及哈氏弧菌所造成的危害、以滿足對(duì)蝦育苗生 產(chǎn)上的抗病需求的微膠囊飼料；且該微膠囊飼料在對(duì)蝦育苗生產(chǎn)中可直接投喂。
[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種抗對(duì) 蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，其特點(diǎn)是，它由以下重量配比的三種原料組成微膠囊飼料， (1) 抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉80~85% ; (2) 黃芪粉 10%~12% ; (3 ) 0 _ 環(huán)糊精 5~8% ; 所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉制備方法步驟如下： ① 將引起對(duì)奸幼體弧菌病的病原副溶血弧菌（mio 及哈氏 弧菌kxl菌株分別接種在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng) 24h，加入體積終濃度0. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體； ② 取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸 出液； ③ 將兩種滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得水劑型疫苗，疫苗液中病原副溶血弧菌VP1 及哈氏弧菌kxl免疫原分別為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL; ④ 用制得的兩種病原弧菌水劑型滅活疫苗，采用口服及滴鼻聯(lián)合免疫的方法免疫成年 產(chǎn)蛋雞，第1次免疫劑量為：口服免疫是將疫苗液加入到飲水中，加入量為5mL;滴鼻免疫 是將疫苗液滴入蛋雞鼻腔，滴入量為lmL;-周后按前述方法加強(qiáng)免疫，連續(xù)加強(qiáng)免疫5次， 共免疫6次，免疫結(jié)束后第6周，卵黃抗體效價(jià)達(dá)2W或以上；收集被免疫雞所產(chǎn)雞蛋，分離 出卵黃，經(jīng)冷凍干燥，制得抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉。
[0006] 本發(fā)明中所涉及的制取抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉方法中，用制得的兩種 病原弧菌水劑型滅活疫苗，采用口服及滴鼻聯(lián)合免疫的方法免疫成年產(chǎn)蛋雞，并不是實(shí)現(xiàn) 雞自身的免疫，因此它不屬于治療方法，而是通過(guò)非外科手術(shù)的方法處置動(dòng)物以獲得其所 產(chǎn)雞蛋，進(jìn)而分離出實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的卵黃，因此，該方法屬于專利法保護(hù)的范圍。
[0007] 本發(fā)明所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方是：抗對(duì)蝦幼 體弧菌病卵黃抗體凍干粉制備方法步驟④中，冷凍干燥時(shí)，蛋黃液厚度6mm，凍干時(shí)間為 10h〇
[0008] 本發(fā)明所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方是：所述的黃 芪粉的粒徑在800~1000目，所述的0 -環(huán)糊精的純度不低于80%。
[0009] 本發(fā)明所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方是：采用噴霧 干燥的方式，制得微膠囊干粉飼料。
[0010] 本發(fā)明所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方是：各原料的 重量配比優(yōu)選如下： (1) 抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉82. 5% ; (2) 黃芪粉11%; (3) 環(huán)糊精 6. 5%。
[0011] 本發(fā)明中所涉及的對(duì)蝦幼體病原副溶血弧菌VP1菌株已經(jīng)在公開文獻(xiàn) ((IsolationandcharacterizationofVibrioparahaemolyticusandVibrio rotiferianusassociatedwithmassmortalitiesofChineseshrimp{Fenneropenaeus cAiieasis)》中所公開(菌株VP1)，上述公開文獻(xiàn)發(fā)表于《JournalofShellfish Research》，2014,33 (1) :61_68。本發(fā)明所述的對(duì)奸幼體病原哈氏弧菌kxl菌株已經(jīng)在公 開文獻(xiàn)《中國(guó)對(duì)蝦糠蝦幼體病原哈氏弧菌的鑒定及毒力基因檢測(cè)》中所公開(菌株kxl)，上 述公開文獻(xiàn)發(fā)表于《漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展》，2014,35 (3):105-111。菌株￥?1及1?1的0嫩序列長(zhǎng) 度及Genebank登錄號(hào)見(jiàn)下表：
菌株VP1及kxl為公知公用材料，現(xiàn)保存在淮海工學(xué)院海洋學(xué)院實(shí)驗(yàn)室，在本專利申請(qǐng) 日起二十年內(nèi)，公眾如果需要，淮海工學(xué)院海洋學(xué)院實(shí)驗(yàn)室可對(duì)外發(fā)放。
[0012] 本發(fā)明的一種抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料的使用方法如下：對(duì)蝦幼體培育期 間，可通過(guò)不同網(wǎng)目篩絹后直接投喂對(duì)蝦各期幼體，也可按30%的比與市售幼體蝦片一起 投喂使用?？箤?duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，不僅具有良好的抗病作用，而且使用方便，同時(shí) 又具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0013] 本發(fā)明抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，能增強(qiáng)對(duì)蝦幼體對(duì)病原副溶血弧菌及哈氏 弧菌的抵抗力，提高對(duì)蝦幼體的成活率，提高育苗生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益，以解決目前對(duì)蝦育苗生 產(chǎn)過(guò)程中易發(fā)生弧菌病的問(wèn)題。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的，以便于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員進(jìn)一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對(duì)其權(quán)利的限制。
[0015] 實(shí)施例1，一種抗對(duì)蝦幼體弧菌病微膠囊飼料，它由以下重量配比的三種原料組成 微膠囊飼料， (1) 抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉80% ; (2) 黃芪粉12%; (3) 0 _環(huán)糊精8% ; 所述的抗對(duì)蝦幼體弧菌病卵黃抗體凍干粉制備方法步驟如下： ① 將引起對(duì)奸幼體弧菌病的病原副溶血弧菌（mio 及哈氏 弧菌kxl菌株分別接種在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng) 24h，加入體積終濃度0. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體； ② 取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸 出液； ③ 將兩種滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得水劑型疫苗，疫苗液中病原副溶血弧菌VP1 及哈氏弧菌kxl免疫原分別為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL; ④ 用制得的兩種病原弧菌水劑型滅活疫苗，采用口服及滴鼻聯(lián)合免疫的