金線蓮組培苗的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及組培苗的培育技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種金線蓮組培苗的培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金線蓮別名金線蘭、金絲草等，為蘭科開唇蘭屬多年生草本植物，是一種珍稀名貴的中草藥。金線蓮以全草入藥，具有清涼解毒，滋陰降火和消炎止痛的功效，對無名腫痛，發(fā)燒、止瀉及蛇咬傷等均有顯著的療效，近年來治療高血壓、糖尿病等廣泛運用。人們長期大量無節(jié)制的挖掘，野生的金線蓮資源日漸枯竭，金線蓮的人工栽培日趨廣泛，需要大量的金線蓮種苗；由于金線蓮的種子細(xì)小，一枚蒴果含有成千上萬粒種子，種子由球形胚與單層細(xì)胞構(gòu)成的種皮組成，在自然條件下需與真菌共生才能萌芽生長，但其發(fā)芽率極低；而且金線蓮種苗的生根率低，金線蓮種苗生長繁殖慢，滿足不了大規(guī)模種植的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種金線蓮組培苗的培育方法，以解決金線蓮種子的發(fā)芽率極低，種苗生根率低的問題，加快金線蓮種苗的生長繁殖，滿足大規(guī)模種植金線蓮的需要。
[0004]為了解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:這種金線蓮組培苗的培育方法，包括以下步驟:
A、將金線蓮蒴果的種子均勻灑在誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)25天?35天，種子萌發(fā)形成原球莖；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方是:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、0.lmg/L 的 a_ 萘乙酸(NAA)、200mg/L 的水解酪蛋白(CH)、30g/L 的蔗糖、4.5g/L的瓊脂，PH5.4?5.6 ;
B、將原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，2個月后發(fā)育成小苗，小苗轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每隔30天?35天繼代I次，得到叢生芽；所述增殖培養(yǎng)基的配方是:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入2.0mg/L的6-芐氨基嘌呤(6_BA)、0.lmg/L的a_萘乙酸(NAA)、200mg/L的水解酪蛋白(CH)、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的瓊脂，PH5.4?5.6 ;
C、叢生芽長高至2.5厘米?3.5厘米時，將叢生芽分割成單株并轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，一個月后單株長出I厘米?3厘米的根，即得本金線蓮組培苗；所述生根培養(yǎng)基的配方是:在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入0.8mg/L的a_萘乙酸(NAA)、200mg/L的水解酪蛋白(CH),0.5mg/L的活性炭、15g/L的蔗糖、4.5g/L的瓊脂，PH5.4?5.6。
[0005]上述金線蓮組培苗的培育方法技術(shù)方案中，更具體的技術(shù)方案還可以是:步驟A、步驟B和步驟C的培養(yǎng)環(huán)境為:培養(yǎng)溫度(23±2) °C，光照強度1500勒克斯?2000勒克斯，光照時間為12小時/天。
[0006]進(jìn)一步的，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)基的制備步驟包括:
(I)按所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)基的配方分別配制所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH5.4?5.6 ;
(2)分別將配制好的所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)基進(jìn)行加熱，至瓊脂完全溶解，趁熱分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；
(3)將分裝有各種培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶及時放入高壓滅菌鍋中，在溫度121°C、壓力105KPa下滅菌21分鐘。
[0007]進(jìn)一步的，步驟A中先將金線蓮蒴果進(jìn)行消毒處理后，再取用種子；所述消毒處理是在超凈工作臺上將金線蓮蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.l%HgC12水溶液侵泡8分鐘?10分鐘，再用無菌水沖洗5次?6次。
[0008]由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果:
1、本發(fā)明將種子均勻灑在誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)，促進(jìn)種子萌發(fā)形成原球莖，大幅度提高種子的發(fā)芽率；原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)成小苗，小苗經(jīng)過繼代培養(yǎng)得到大量的叢生芽；將叢生芽分割成單株并轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，生根率可達(dá)99%以上；加快金線蓮種苗的生長繁殖，滿足大規(guī)模種植金線蓮的需要。
[0009]2、提供適宜的溫度和光照，促進(jìn)金線蓮種子的萌芽和小苗的生長繁殖。
[0010]3、配制提高種子萌芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，小苗生長繁殖的增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，促進(jìn)金線蓮種苗的生長繁殖。
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳述:
實施例1
一種金線蓮組培苗的培育方法，具體步驟如下:
A、將野生的金線蓮蒴果進(jìn)行消毒處理后，再取用金線蓮蒴果內(nèi)的種子；消毒處理是在超凈工作臺上將金線蓮蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.l%HgC12水溶液侵泡8分鐘，再用無菌水沖洗5次；將種子均勻灑在誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度21°C，光照強度1500勒克斯，光照時間為12小時/天，培養(yǎng)25天，種子萌發(fā)形成白色的原球莖；誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方是:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、0.1mg/L的a-萘乙酸(NAA)、200mg/L的水解酪蛋白(CH)、30g/L的蔗糖、4.5g/L的瓊脂，調(diào)節(jié)PH5.4 ；
B、將原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，2個月后發(fā)育成小苗，小苗轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度21°C，光照強度1500勒克斯，光照時間為12小時/天，每隔30天繼代I次，即可不斷地得到大量叢生芽；增殖培養(yǎng)基的配方是:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入2.0mg/L的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、0.lmg/L的a-萘乙酸(NAA)、200mg/L的水解酪蛋白(CH)、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的瓊脂，調(diào)節(jié)PH5.4 ;
C、叢生芽長高至2.5厘米時，將健壯的叢生芽分割成單株并轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度21°C，光照強度1500勒克斯，光照時間為12小時/天；一個月后單株長出I厘米的根，即得本金線蓮組培苗；生根培養(yǎng)基的配方是:在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入0.8mg/L的a-萘乙酸(NAA)、200mg/L的水解酪蛋白(CH)、0.5mg/L的活性炭、15g/L的鹿糖、4.5g/L的瓊脂，調(diào)節(jié)PH5.4。
[0012]誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備步驟: (1)按誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，每升加入1.5mg的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、0.1mg的a-萘乙酸(NAA)、200mg的水解酪蛋白(CH)、30g的蔗糖、4.5g的瓊脂，混合后調(diào)節(jié)PH5.4 ;
(2)將配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行加熱，至瓊脂完全溶解，趁熱分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；
(3)將裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶及時放入高壓滅菌鍋中，在溫度121°C、壓力105KPa下滅菌21分鐘。
[0013]增殖培養(yǎng)基的制備步驟:
Cl)按增殖培養(yǎng)基的配方，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，每升加入2.0mg的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、0.1mg的a-萘乙酸(NAA)、200mg的水解酪蛋白(CH)、10g的土豆汁、30g的蔗糖、4.5g的瓊脂，混合后調(diào)節(jié)PH5.4 ;
(2)將配制好的增殖培養(yǎng)基進(jìn)行加熱，至瓊脂完全溶解，趁熱分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；
(3)將裝有增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶及時放入高壓滅菌鍋中，在溫度121°C、壓力105KPa下滅菌21分鐘。
[0014]生根培養(yǎng)基的制備步驟:
Cl)按生根培養(yǎng)基的配方，在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，每升加入0.8mg的a-萘乙酸(NAA)、200mg的水解酪蛋白(CH)、0.5mg的活性炭、15g的蔗糖、4.5g的瓊脂，混合后調(diào)節(jié)