萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，旨在提供一種提取時(shí)間短，且重現(xiàn)性好，提取完全的鹽酸麻黃堿萃取方法；該方法為：準(zhǔn)確稱取樣品1g置于10mL萃取池中，用正己烷對樣品進(jìn)行除酯提取，所述的提取溫度為80℃，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次，沖洗體積100％，再以甲醇為提取溶劑，提取溫度為80℃，靜態(tài)提取時(shí)間為8min，提取次數(shù)為3次；提取完成后將提取液定容至25mL，吸取1.5mL于裝有300mg PSA的2mL離心管中，漩渦2min，15000r/min離心3min，取上清液；屬于化學(xué)萃取技術(shù)領(lǐng)域。
【專利說明】
萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明公開了一種鹽酸麻黃堿的萃取方法，具體地說，是采用萃取理肺丸中鹽酸 麻黃堿的方法;屬于化學(xué)萃取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 理肺丸是由紫蘇葉、前胡、枯梗、苦杏仁、麻黃、甘草、陳皮、半夏等十一味中藥材組 方制成的丸劑，味微甜、略苦，具有解表散寒，宣肺止嗽的功能，用于風(fēng)寒束表、肺氣不宣的 感冒咳嗽，癥見發(fā)熱、惡寒、鼻塞流涕、頭痛、無汗、肢體酸痛。其中麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺 平喘、利水消腫的作用，用于風(fēng)寒感冒、胸悶喘咳、風(fēng)水浮腫，其主要有效成分為鹽酸麻黃 堿?！吨袊幍洹?015年版一部規(guī)定理肺丸中含量測定的成分為鹽酸麻黃堿。
[0003] 快速溶劑萃取（ASE)是指在密閉容器內(nèi)于高溫（50~200 °C)和高壓（500~ 3000psi)條件下，在短時(shí)間內(nèi)，用有機(jī)溶劑提取固體或半固體樣品的一種新型樣品前處理 方法。與超聲、微波、回流、超臨界萃取等成熟方法相比，ASE有萃取溶劑用量少、提取時(shí)間 短、萃取效率高、操作簡單方便、安全和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。國外已有學(xué)者將運(yùn)項(xiàng)技術(shù)應(yīng) 用于植物藥定量和定性分析中樣品的前處理，但在中成藥有效成分的定量和定性分析中作 為樣品的前處理方法應(yīng)用較少，用于理肺丸中鹽酸麻黃堿提取的研究未見報(bào)道味。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種提取時(shí)間短，且重現(xiàn)性好，提取完全的萃取理肺丸中鹽 酸麻黃堿的方法麻黃堿的方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是運(yùn)樣的：
[0006] -種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，依次包括下述步驟：
[0007] 準(zhǔn)確稱取樣品Ig置于IOmL萃取池中，用正己燒對樣品進(jìn)行除醋提取，所述的提取 溫度為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%，再W醇類為提取溶劑， 提取溫度為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為Smin，提取次數(shù)為3次;提取完成后將提取液定容至25mL， 吸取1.5mL于裝有300mg PSA的2mL離屯、管中，縱滿2min，15000r/min離屯、3min。
[000引進(jìn)一步的，上述的一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，所述的醇類為甲醇。
[0009] 進(jìn)一步的，上述的一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的除醋 提取時(shí)所述的提取溫度為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次。
[0010] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的ASE法極大限度地節(jié)省了提取時(shí)間，由原來的4她 W上，縮短為40min，且省略了繁瑣的萃取凈化步驟及揮干的過程，減少了鹽酸麻黃堿在提 取和后處理中的降解及損失，保證結(jié)果的可靠性。ASE法提取理肺丸中鹽酸麻黃堿可行，適 用于理肺丸中鹽酸麻黃堿的提取。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對 本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的 權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0012]本發(fā)明所設(shè)及的到百分含量濃度，除特殊說明外，溶質(zhì)為液體的均為體積濃度，溶 質(zhì)為固定的均為質(zhì)量濃度。
[OOU]實(shí)施例1
[0014] 1儀器與試劑
[0015] 鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號171241-201007);乙臘(色譜 純，德國Merck公司），其余試劑均為分析純；
[0016] 2實(shí)驗(yàn)部分
[0017] 2.1樣品來源
[001引理肺丸（大蜜丸，由廣西梧州S鶴藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號140201、140803、 140850、150901、150702)。
[0019] 2.4實(shí)驗(yàn)方法
[0020] 準(zhǔn)確稱取樣品Ig置于IOmL萃取池中，用正己燒對樣品進(jìn)行除醋（提取溫度為80°C， 靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%)后W甲醇為提取溶劑，提取溫度為 80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為Smin，提取次數(shù)為3次。提取完成后將提取液定容至25mL，吸取1.5mL 于裝有300mg PSA的2血離屯、管中，縱滿2min，ISOOOr/min離屯、3min，取上清液進(jìn)行超高效液 相分析。
[0021] 3結(jié)果與討論
[0022] 3.1單因素考察
[0023] 取批號為150702作為考察樣品，影響ASE效率的因素有提取溶劑、提取溫度、提取 時(shí)間、提取次數(shù)等。本實(shí)驗(yàn)考察了運(yùn)些因素對理肺丸中鹽酸麻黃堿提取效率的影響，并采用 正交實(shí)驗(yàn)對提取條件進(jìn)行優(yōu)化，當(dāng)考察某個(gè)單因素時(shí)，只改變該因素的條件，其他條件不 變。提取參數(shù)的考察均W鹽酸麻黃堿HPLC測定含量為評價(jià)指標(biāo)。
[0024] 3.1.1提取溶劑和取樣量的選擇:準(zhǔn)確稱取理肺丸樣品2g，分別用正下醇、乙酸乙 醋、氨水-正下醇、氨水-乙酸乙醋、氨水-乙醇-乙酸乙醋（3:10:90 )、1.44 %憐酸、堿性甲醇 (P冊~9)、甲醇作為提取溶劑，在100°C下萃取5min，萃取3次，考察不同提取溶劑對鹽酸麻 黃堿提取效果的影響。
[0025] 憐酸或堿性甲醇提取效率較高，但基質(zhì)影響較大;氨水-乙醇-乙酸乙醋(3:10:90) 條件下提取效率較高且基質(zhì)影響較小，但考慮酸、堿溶劑對ASE儀器的影響，故選擇甲醇作 為提取溶劑。
[0026] 由于實(shí)驗(yàn)使用的IOmL萃取池溶劑沖洗體積有限，對于2g樣品提取會(huì)不充分，因此 選擇取樣量為Ig。
[0027] 3.1.2提取溫度的選擇:準(zhǔn)確稱取理肺丸樣品Ig,用甲醇作為提取溶劑，在80°C、 100°C、120°C下分別提取3次，每次Smin，考察不同提取溫度對鹽酸麻黃堿提取效果的影響。 結(jié)果80°C、100°C、120°C下ASE方法所得到的提取率較藥典提取方法偏低，可能鹽酸麻黃堿 受熱易降解，考慮降低溫度W提高提取效率。
[00%]由于甲醇的沸點(diǎn)約為64°C，結(jié)合ASE的高壓穿透性，故選擇70°C、8(rC和90°C對提 取方法進(jìn)行摸索，考察提取溫度對理肺丸中鹽酸麻黃堿的提取效率影響。準(zhǔn)確稱取理肺丸 Ig，用甲醇作為提取溶劑，在70°c、8(rc和90°C下分別提取3次，每次8min，考察不同提取溫 度對鹽酸麻黃堿提取效果的影響。結(jié)果見表1。
[0029] 表1不同提取溫度對鹽酸麻黃堿的提取效果
[0030]
[0031]
[0032] 由W上數(shù)據(jù)可見，溫度對提取效率的影響較大，在考慮鹽酸麻黃堿的提取效率時(shí)， 應(yīng)充分考慮其高溫降解的影響及其所使用溶劑的烙沸點(diǎn)。時(shí)間對提取效率也有一定的影 響，時(shí)間過短則提取不完全，時(shí)間過長則耗時(shí)，不利于提高效率。綜上，根據(jù)選擇的提取溶劑 甲醇可確定溫度在80°C左右，進(jìn)一步優(yōu)化提取溫度與提取時(shí)間、循環(huán)次數(shù)、雜質(zhì)凈化等因 素，尋求最佳方案。
[0033] 3.2 ASE提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果:根據(jù)W上單因素試驗(yàn)的結(jié)果，確定甲醇為提取溶劑， 采用L9(34)正交試驗(yàn)，W提取溫度/°C(A)、提取時(shí)間/min(B)和提取次數(shù)/次(C)運(yùn)3個(gè)因素對 理肺丸中鹽酸麻黃堿提取含量的影響，每個(gè)因素=個(gè)水平，進(jìn)行ASE法提取理肺丸中鹽酸麻 黃堿的條件優(yōu)化。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。
[0034] 表2 L9(34化交試驗(yàn)表及結(jié)果分析
[0(?。廣1
[0036]
[00;
[00;
[0039] 由正交試驗(yàn)結(jié)果可知，影響理肺丸中鹽酸麻黃堿ASE提取效果的各因素主次順序 為:C(提取次數(shù))〉B(提取時(shí)間）〉A(chǔ)(提取溫度），得到最佳提取條件為:A2B2C2,即稱樣量為Ig, 甲醇作為提取溶劑，提取溫度為80°C，提取時(shí)間為Smin，提取次數(shù)3次。
[0040] 3.4雜質(zhì)凈化方法：由于樣品理肺丸為大蜜丸，W甲醇作為提取溶劑，處方中極性 小的醋類成分W及丸劑中糖類雜質(zhì)溶出較多，基質(zhì)對鹽酸麻黃堿液相分析干擾較大，需要 前處理去掉相應(yīng)的雜質(zhì)干擾。
[0041 ] 3.4.1小極性雜質(zhì)凈化方法考察:在《中國藥典》中鹽酸麻黃堿使用了乙酸進(jìn)行脂 溶性成分的去除，由于乙酸不能適用于A沈法，嘗試用正己燒對樣品進(jìn)行預(yù)處理，提取溫度 為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分小極性脂類 物質(zhì)被去除，且鹽酸麻黃堿在此條件下沒有損失。
[0042] 3.4.2糖類雜質(zhì)凈化方法考察：嘗試在萃取池底部填充一定量的凈化材料，如娃 膠、中性氧化侶、堿性氧化侶、C18、PSA(N-丙基乙二胺)等，在提取的過程中直接凈化樣品。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)硅膠、C18凈化效果較差，中性氧化侶、堿性氧化侶的凈化效果較好，隨著氧化侶的 增加，凈化效果越好，但中性氧化侶和堿性氧化侶對目標(biāo)化合物對鹽酸麻黃堿有一定吸附 作用，損失率約為15%~18% "PSA(N-丙基乙二胺)吸附糖類物質(zhì)效果較好，且基本沒有損 失，但考慮到在萃取池中直接加 PSA的量較大，成本較高，故改用Quechers凈化方法。即對 A沈萃取液定容至25mL后，吸取1.5mL于裝有一定量PSA的2血離屯、管中，縱滿2min，ISOOOr/ min離屯、3min，取上清液進(jìn)行超高效液相分析。
[0043] 3.4.3凈化量考察：分別吸取1. SmLASE萃取液置于裝有50，100，200，300，400， 500m評SA的2mL凈化管中，縱滿2min，ISOOOr/min離屯、3min后取上清液進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn) 300m評SA凈化效果最好，故確定PSA的凈化量為300mg。
[0044] 3.5用始相同的ASE儀器進(jìn)行儀器對提取方法的重復(fù)性考察W及ASE法與藥典方 法的比較:分別取理肺丸5個(gè)批次樣品，每個(gè)批次分別取3份，按2.5. IASE方法進(jìn)行處理;取 理肺丸5個(gè)批次樣品，每個(gè)批次分別取2份，按藥典方法處理，分別進(jìn)液相進(jìn)行分析，所述的 分析柱ACE Excel 2C18-PFP，流速0.5ml .Hiin-I,柱溫35°C，檢測波長210nm，進(jìn)樣量為化L 流動(dòng)相A為乙臘，流動(dòng)相B為0.1 %憐酸溶液;梯度洗脫程序:0~3.5min，2 % A、98 %B; 3.5~ 4111111，2%~90%4、98%~10%6;4~7111111，90%4、10%8;在2%4、98%6下平衡2111111。結(jié)果如 表4。
[0045] 表4不同儀器驗(yàn)證及ASE法與藥典方法比較
[0046]
[0047] 兩臺ASE儀器得到的理肺丸中鹽酸麻黃堿含量RSD均少于5%，儀器的重現(xiàn)性好。由 W上5批樣的結(jié)果分析可見，藥典方法由于受到環(huán)境溫度，回流速率、時(shí)間，加液體積，包裝 緊密等多種因素的影響，同批樣品同一時(shí)間提取，差異性較大，重現(xiàn)性較差。采用優(yōu)化后的 ASE法提取理肺丸中鹽酸麻黃堿，結(jié)果的重現(xiàn)性較好，提取較完全并且藥典法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏 差在5% W內(nèi)，可控性強(qiáng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，依次包括下述步驟： 準(zhǔn)確稱取樣品Ig置于IOmL萃取池中，用正己烷對樣品進(jìn)行除酯提取，所述的提取溫度 為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%，再以醇類為提取溶劑，提取 溫度為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為8min，提取次數(shù)為3次;提取完成后將提取液定容至25mL，吸取 1.5mL于裝有300mg PSA的2mL離心管中，游禍2min，15000r/min離心3min。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的醇 類為甲醇。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種萃取理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的除 酯提取時(shí)所述的提取溫度為80°C，靜態(tài)提取時(shí)間為5min，提取次數(shù)為1次。
【文檔編號】G01N1/34GK105954086SQ201610247858
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月20日
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 劉慧妍, 陳翠玲
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所