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一種應(yīng)用熒光猝滅法檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法

文檔序號:10487048閱讀:256來源:國知局
一種應(yīng)用熒光猝滅法檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用羥基磷灰石修飾CdTe量子點熒光猝滅檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法。其特征在于:利用羥基磷灰石修飾CdTe量子點作為熒光探針,通過羥基磷灰石修飾CdTe量子點探針的熒光強度隨蛋白質(zhì)濃度的增加而增強的特性,進行高選擇性和高靈敏檢測,羥基磷灰石修飾CdTe量子點的熒光強度變化值與蛋白質(zhì)濃度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.991。本發(fā)明方法操作簡單、快速,適用于臨床檢測分析。
【專利說明】
一種應(yīng)用熒光猝滅法檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明提出的是設(shè)計一種檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]定性試驗是用以篩選和粗略估計尿蛋白含量的方法。試驗的方法有三種:磺柳酸法、加熱醋酸法和試紙法?;腔畻钏岱ê图訜岽姿岱ǘ际歉鶕?jù)濁度反應(yīng)將無混濁或無沉淀定為陰性(一),將出現(xiàn)混濁或沉淀的定為陽性(+)?;腔畻钏岱ú僮骱啽悖`敏度高,可廣泛用于普查,但其對白蛋白的靈敏度高于球蛋白,且影響因素較多,易造成假陰性或假陽性。加熱醋酸法對白蛋白和球蛋白的靈敏度基本一致,影響因素少,準(zhǔn)確性較高。
[0003]⑴磺基水楊酸法:這是目前醫(yī)院化驗室常用的方法。試劑的配制,稱取磺基水楊酸
3克,加蒸餾水至100毫升配成3%磺基水楊酸溶液。配好的溶液要貯存在棕色瓶內(nèi),放在不見陽光的暗處保存,以免失效。取一個干凈的玻璃試管,加入尿液2毫升左右,然后用滴管在尿液上滴加試劑3?5滴,觀察有無蛋白出現(xiàn)。根據(jù)混濁、沉淀和凝固的程度不同,確定“+”(加號)的多少。
[0004]⑵加熱醋酸法:取一個玻璃試管,倒入被檢查的尿液至三分之二處,加入2%醋酸或食醋數(shù)滴,用拇指和食指斜拿試管底部,放在火焰上(如灑精燈)直接將試管上端的尿液加熱,經(jīng)常轉(zhuǎn)動試管,直到上端沸騰,觀察有無混濁或出現(xiàn)沉淀凝固,根據(jù)程度判斷加號。為了排除混濁不是由蛋白質(zhì)引起的假陽性,應(yīng)再加醋酸2?3滴或食醋十幾滴,此時混濁不消失,則為陽性反應(yīng),說明是蛋白質(zhì)。此法簡單,不需要什么試劑,成為過去實驗室檢查尿蛋白常用的方法,現(xiàn)已被磺基水楊酸法代替。
[0005]⑶試紙法:試紙是一種預(yù)先由試劑廠制好的專門供尿蛋白定性試驗用的試紙,在醫(yī)藥商店可以購買。該試紙用試劑液浸泡過,遇蛋白質(zhì)顯藍(lán)色,并附有一個標(biāo)準(zhǔn)色板,根據(jù)所測出藍(lán)色深淺與色板比對。方法比較簡單,取一條試紙,浸入被檢尿內(nèi),立即取出,約10?20分鐘,觀察有無藍(lán)色顯示,如無變化為陰性,顯藍(lán)色,則為陽性;堿性尿液可出現(xiàn)假陽性,因此,在試驗前先用石蕊試紙檢查一下尿的酸堿度,如為堿性(在pH=7.0以上),應(yīng)先加幾滴醋酸,使尿呈酸性再做。以上的三種方法均為尿蛋白定性檢查,只說明尿內(nèi)有無蛋白和相對多少,不能說出確切含量。
[0006]本發(fā)明,利用水溶性羥基磷灰石修飾量子點作為熒光探針,定量檢測尿液中蛋白質(zhì)的含量。該方法具有簡單、快速、價格低廉、高靈敏度和高選擇性等優(yōu)點,實現(xiàn)對尿液中蛋白質(zhì)含量的定量分析,對提高醫(yī)生診斷的準(zhǔn)確性有著重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]I建立工作曲線:配置一系列人血清白蛋白的濃度逐漸增加的標(biāo)準(zhǔn)溶液,每份溶液中加入相同量的羥基磷灰石修飾量子點,利用羥基磷灰石修飾量子點作為熒光探針檢測溶液中蛋白質(zhì)的含量,從熒光光譜圖得出羥基磷灰石修飾量子點的熒光強度與蛋白質(zhì)濃度之間的線性關(guān)系,即工作曲線。
[0008]2檢測:將分析樣品加入到羥基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,檢測該分析試樣溶液的熒光強度,根據(jù)所述工作曲線,確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量。
【附圖說明】
[0009]圖1為羥基磷灰石修飾量子點隨牛血清白蛋白濃度增加的熒光光譜圖;
圖2為羥基磷灰石修飾量子點隨牛血清白蛋白濃度增加的工作曲線。
【具體實施方式】
[0010]I建立工作曲線:取十一個比色管,分別加入I ml羥基磷灰石修飾量子點,依次加入蛋白質(zhì)溶液(O mg/mL,0.1 mg/mL,0.2 mg/mL,0.3 mg/mL,0.4 mg/mL,0.5 mg/mL,0.6mg/mL,0.7 mg/mL,0.8 mg/mL,0.9 mg/mL,和I mg/mL),用pH值為7.4的PBS緩沖溶液定容至
4mL(量子點濃度2 X 10—4 mol/L),室溫下孵育5分鐘后,用熒光分光光度計測得熒光F『Fn。用lg(F/Fo)為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)作圖(如圖2所示),得到工作曲線Y=1.3202X+
0.7787,R2=0.991,檢出限為0.0287 g/L。
[0011]2實例一:將10 ml尿樣,用lmol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH為7.4;取10 樣品加入到羥基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,用熒光分析儀測定熒光,根據(jù)所述工作曲線確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為
0.1207 mg/mL,根據(jù)濁度反應(yīng)測定該分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為0.1209 mg/mL,檢出率為99.8 %。
[0012]3實例二:取一定量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到輕基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,蛋白質(zhì)濃度相當(dāng)于I g/L,用熒光分析儀測定熒光,根據(jù)所述工作曲線確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為0.998 g/L,檢出率為99.8 %。
[0013]4實例三:取一定量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到輕基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,蛋白質(zhì)濃度相當(dāng)于0.4mg/mL,用熒光分析儀測定熒光,根據(jù)所述工作曲線確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為0.3992g/L,檢出率為99.8 %。
[0014]5對比例1:取一定量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到輕基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,蛋白質(zhì)濃度相當(dāng)于0.04mg/mL,用熒光分析儀測定熒光,根據(jù)所述工作曲線確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為0.0501mg/mL,檢出率為125.2 %,說明超出檢測范圍誤差太大。
[0015]6對比例2:取一定量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到輕基磷灰石修飾量子點溶液中,使得羥基磷灰石修飾量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,蛋白質(zhì)濃度相當(dāng)于6mg/mL,用熒光分析儀測定熒光,根據(jù)所述工作曲線確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量為10.012mg/mL,檢出率為166.9 %,說明超出檢測范圍誤差太大。
【主權(quán)項】
1.一種利用羥基磷灰石修飾CdTe量子點熒光猝滅檢測尿液中蛋白質(zhì)含量的方法,其特征在于,包括以下步驟:I)建立線性關(guān)系:配置一系列濃度人血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,其中,人血清白蛋白的濃度逐漸增加,加入相同量的羥基磷灰石修飾CdTe量子點,利用量子點作為熒光探針檢測溶液中的蛋白質(zhì)的含量,從熒光光譜圖得出CdTe量子點的熒光強度與蛋白質(zhì)濃度之間的線性關(guān)系;2)檢測:將分析樣品加入到CdTe量子點溶液中,使得CdTe量子點的濃度與上述各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中的濃度相同,檢測該分析試樣溶液的熒光強度,根據(jù)所述線性關(guān)系,確定分析試樣中蛋白質(zhì)的含量。2.如I所述,所采用的輕基磷灰石修飾CdTe量子點濃度為0.25mg/mL,檢測的線性范圍為0.1-1 mg/mL。3.如I所述,蛋白質(zhì)濃度與F/Fo成正比例關(guān)系,其中Fo為加入蛋白質(zhì)前羥基磷灰石修飾CdTe量子點的熒光強度,F(xiàn)為加入蛋白質(zhì)后羥基磷灰石修飾CdTe量子點的熒光強度。4.如I所述,若使用濃度更低的量子點檢出限可以達(dá)到0.0287g/L。5.如I所述,工作曲線回歸方程為得到工作曲線Y=1.3202X+0.7787,R2=0.991。
【文檔編號】G01N21/64GK105842213SQ201610271149
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】金麗, 張建坡, 于曉洋
【申請人】吉林化工學(xué)院
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