二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物 質(zhì)檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] (N-(3-氯代-4-(3-氟代芐氧基）苯基)-6-(3-(4-甲基-4-氧基-1-氮-4-磷雜環(huán)己 烷-1-基)丙-1-炔基)喹唑啉-4-胺，雙4-甲基苯磺酸鹽），又名二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼，是近 年來研發(fā)出的I型受體蛋白激酶抑制劑的包含磷取代的新喹唑啉衍生物?？捎糜谥委煵溉?動(dòng)物中與蛋白激酶活性異常相關(guān)的疾病，如癌癥或炎癥。
[0003] 二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼作為一種新研發(fā)出的藥物，為了保證其質(zhì)量及用藥的安全 性，在生產(chǎn)和使用的過程中，都需要對(duì)原料藥中的有效成分含量、有關(guān)物質(zhì)種類及含量、殘 留溶劑、微生物情況進(jìn)行檢測(cè)和分析。
[0004] 有關(guān)物質(zhì)主要是在生產(chǎn)過程中帶入的起始原料、中間體、聚合體、副反應(yīng)產(chǎn)物，以 及貯藏過程中的降解產(chǎn)物等。有關(guān)物質(zhì)研究是藥品質(zhì)量研究中關(guān)鍵性的項(xiàng)目之一，其含量 是反映藥品純度的直接指標(biāo)。對(duì)藥品的純度要求，應(yīng)基于安全性和生產(chǎn)實(shí)際情況兩方面的 考慮。
[0005] 二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中主要的有關(guān)物質(zhì)如表1所示：
[0006] 表1二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中主要的有關(guān)物質(zhì)
[0007]
[0008] 目前尚未有關(guān)于二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼中有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法的報(bào)道。因此，應(yīng)當(dāng) 開發(fā)檢出限、定量限低;靈敏度、專屬性強(qiáng);精密度、準(zhǔn)確度高的二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料 藥中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供檢出限、定量限低；靈敏度、專屬性 強(qiáng);精密度、準(zhǔn)確度高的二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法。
[0010] 本發(fā)明提供的二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，將二對(duì)甲苯 磺酸緣生替尼原料藥溶解，以甲醇為流動(dòng)相A，以乙酸銨的水溶液為流動(dòng)相B，以高效液相色 譜檢測(cè)獲得色譜圖，根據(jù)色譜圖獲得二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的含量。
[0011] 本發(fā)明提供的二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法是通過高效 液相色譜法進(jìn)行的。利用高效液相色譜(HPLC)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)是目前常用的檢測(cè)方 法，在面對(duì)需要對(duì)二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的含量進(jìn)行定量分析時(shí)，采用 高效液相色譜是一種快速有效的方式。但是，現(xiàn)有技術(shù)中，并沒有報(bào)道如何采用HPLC對(duì)二對(duì) 甲苯磺酸緣生替尼中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)，而當(dāng)采用HPLC對(duì)一種新的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)時(shí) 需要對(duì)該方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性、專屬性、精密度、耐用性等多方面的鑒定，具體標(biāo)準(zhǔn)為：
[0012] 系統(tǒng)適用性:雜質(zhì)與主峰或者已知雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的分離度不小于1.5,未知雜質(zhì) 與未知雜質(zhì)之間的分離度不小于1.2
[0013] 專屬性:在酸、堿、氧化、高溫、光照降解試驗(yàn)的圖譜中，主峰的純度因子應(yīng)大于閾 值。
[0014] 線性及范圍：回歸系數(shù)r: 2 0.99,線性范圍：至少在雜質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度的50 %~ 150%內(nèi)。
[0015] 重復(fù)性:配制6個(gè)供試品溶液，每個(gè)溶液進(jìn)2針，用對(duì)照品溶液計(jì)算主成份含量，要 求6個(gè)結(jié)果的RSD小于限度的50%。
[0016] 中間精密度：由不同分析員，使用不同的儀器，在不同日期對(duì)同一批樣品進(jìn)行檢 測(cè)。要求6份樣品的測(cè)定結(jié)果RSD小于限度的50%。
[0017] 準(zhǔn)確度:加標(biāo)回收率80.0%~120.0%。
[0018]耐用性:主要考慮溶液穩(wěn)定性:供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，并且要求檢測(cè)條件的微 小變化對(duì)主峰含量的測(cè)定影響不大，分離度、理論塔板數(shù)均符合要求。
[0019] 為了提高檢測(cè)效果，本發(fā)明提供的方法在進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)時(shí)采用梯度洗 脫。梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH值 等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。采用梯度洗脫可以縮短分析時(shí)間，提 高分離度，改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。
[0020] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，高效液相色譜的洗脫程序?yàn)?0~20min，甲醇體積分?jǐn)?shù)由 30% ±2%至73% ±2% ;20min~30min，甲醇體積分?jǐn)?shù)為73% ±2% ;30min~40min，甲醇體 積分?jǐn)?shù)由73% ±2%至80% ±2% ;40min~50min，甲醇體積分?jǐn)?shù)為80% ±2%。
[0021] 在一些實(shí)施例中，高效液相色譜的洗脫程序?yàn)?0~20min，甲醇體積分?jǐn)?shù)由30%至 73%;2〇111；[11~30111；[11，甲醇體積分?jǐn)?shù)為73%;30111；[11~40111；[11，甲醇體積分?jǐn)?shù)由73%至80%; 40min~50min，甲醇體積分?jǐn)?shù)為80%。
[0022] 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要 求流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力且與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，其黏度要盡量小，以便得 到好的分離效果;且流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用紫外檢測(cè)器，則應(yīng) 使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。其沸點(diǎn)不可以太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn) 行。對(duì)于二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼而言，以甲醇和乙酸銨水溶液做為流動(dòng)相能夠保證適中的 出峰時(shí)間，使相關(guān)物質(zhì)分離良好。
[0023] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，乙酸銨水溶液中乙酸銨的濃度為0.005mol/L~0.015mol/ L〇
[0024] 在一些實(shí)施例中，乙酸銨水溶液中乙酸銨的濃度為0.01mol/L。
[0025] 流動(dòng)相的流速過高會(huì)降低塔板數(shù)，而塔板數(shù)的降低會(huì)導(dǎo)致樣品分離度的降低。
[0026] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速為0.9mL/min~1. lmL/min。
[0027] 在一些實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速為1 .OmL/min。
[0028] 對(duì)柱溫的選擇需考慮待分離物質(zhì)本身的特性，柱溫影響流動(dòng)相對(duì)待測(cè)物質(zhì)的溶解 度也會(huì)影響柱壓。一般情況下，提高柱溫有利于提高分離度，但溫度過高會(huì)導(dǎo)致柱壓過低， 不利于物質(zhì)的檢出。
[0029]在本發(fā)明的實(shí)施例中，高效液相色譜檢測(cè)的柱溫為35°C~45°C。
[0030]在一些實(shí)施例中，高效液相色譜檢測(cè)的柱溫為40°C。
[0031] 二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼在240nm處有最大吸收，在氧化破壞中，多數(shù)雜質(zhì)在波長為 240nm左右有最大吸收或者在該處有強(qiáng)吸收。因此，作為優(yōu)選，設(shè)置高效液相色譜檢測(cè)的波 長為 238nm ~242nm。
[0032] 在一些實(shí)施例中，高效液相色譜檢測(cè)的波長為240nm。
[0033] 對(duì)本發(fā)明提供的方法而言，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼的極性，選擇C18色譜柱。色譜 柱的尺寸會(huì)對(duì)分離結(jié)果產(chǎn)生影響，其內(nèi)徑會(huì)對(duì)流動(dòng)相的流速產(chǎn)生影響，長度較短的色譜柱 運(yùn)行時(shí)間短，柱壓較低;長度較長的色譜柱分辨率稿，但運(yùn)行時(shí)間增長。
[0034]在本發(fā)明的實(shí)施例中，高效液相色譜檢測(cè)的色譜柱為Waters Symmetry C18柱。
[0035] 在一些實(shí)施例中，色譜柱的尺寸為250mmX4.6mm，5μηι。
[0036] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，溶解的溶劑為體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇水溶液。
[0037]在本發(fā)明的實(shí)施例中，高效液相色譜檢測(cè)的進(jìn)樣量為10yL。
[0038] 在一些實(shí)施例中，高效液相色譜儀檢測(cè)的運(yùn)行時(shí)間為25min。
[0039] 在一些實(shí)施例中，溶解至二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原藥的濃度為100yg/mL。
[0040] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的含量的獲得采 用外標(biāo)法。
[0041] 以本發(fā)明提供的方法檢測(cè)二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)，不僅能夠檢 測(cè)出常見的雜質(zhì)A、B、C，還能檢測(cè)出一些未知雜質(zhì)。各有關(guān)物質(zhì)的保留時(shí)間如表2所示： [0042]表2有關(guān)物質(zhì)保留時(shí)間
[0044]本發(fā)明提供的二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，將二對(duì)甲苯 磺酸緣生替尼原料藥溶解，以甲醇為流動(dòng)相A，以乙酸銨的水溶液為流動(dòng)相B，以高效液相色 譜檢測(cè)獲得色譜圖，根據(jù)色譜圖獲得二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的含量。采 用本發(fā)明提供的方法，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼與最近的未知雜質(zhì)B的分離度為5.8,已知雜 質(zhì)A與未知雜質(zhì)的分離度為2.4?？瞻兹芤?，緣生替尼雜質(zhì)峰不影響緣生替尼的檢查，在酸、 堿、氧化、高溫、光照降解試驗(yàn)的圖譜中，主峰的純度因子均大于閾值。對(duì)雜質(zhì)A、B、C的檢出 限為0.001%，對(duì)雜質(zhì)A、B的定量限為0.005%，對(duì)雜質(zhì)C的定量限是0.025%。并且，流速范圍 0.9ml/min~l.lml/min、柱溫范圍35°C~45°C、檢測(cè)波長238nm~242nm、乙酸銨濃度 0.005%~0.015%;甲醇比例-2%~+2%各雜質(zhì)峰的拖尾因子均小于2.0,雜質(zhì)與雜質(zhì)峰， 雜質(zhì)與主成分峰均能達(dá)到基線分離，已知雜質(zhì)含量的變化在±0.1%以內(nèi)，測(cè)定結(jié)果均在可 接受的范圍內(nèi)，所以有關(guān)物質(zhì)檢查色譜條件耐受性良好。6次測(cè)定的雜質(zhì)峰數(shù)一致，雜質(zhì)之 和的絕對(duì)偏差為0.02%，12次測(cè)定的雜質(zhì)峰數(shù)一致，雜質(zhì)之和的絕對(duì)偏差為0.02%，證實(shí)該 方法具有良好的精密度。
【具體實(shí)施方式】
[0045] 本發(fā)明提供了二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng) 對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用 已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì) 本文的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0046] 本發(fā)明采用的儀器皆為普通市售品，皆可于市場(chǎng)購得。