一種脂質體包封體積的快速測定方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種脂質體包封體積的快速測定方法，具體涉及藥物制造領域中脂質體制劑的包封體積的快速測定及制備工藝優(yōu)化。
【背景技術】
[0002]脂質體藥物已經(jīng)成為當前藥物劑型改造的重要方向，因其具有良好的生物相容性，以及可改變被包封藥物體內(nèi)分布和提高藥物治療指數(shù)而備受關注，利用脂質體進行劑型改造不僅可以提高藥物的溶解性、利用效率、降低藥物不良反應，還能進行靶向給藥，有效將藥物輸送到病灶位置專一性地殺傷腫瘤或病灶細胞，同時避免全身用藥對身體造成的損傷。
[0003]包封體積是指脂質體內(nèi)包裹水相的體積占溶液總體積的百分比，當脂質體包封水溶性藥物時，包封體積影響載藥量及藥物在體內(nèi)的釋放速度、生物分布、藥物代謝動力學特征等，是脂質體藥物藥效評價的重要指標，也是評價與改造脂質體藥物制造工藝的重要依據(jù)。目前，包封體積的測定方法主要有:溶質包封法、電子自旋共振法、電導率法、核磁共振法等。溶質包封法是將膜非滲透性標記物加入水化介質，使標記物進入脂質體內(nèi)，通過測定內(nèi)外水相標記物信號強度及脂質濃度得包封體積，但非滲透性標記物會存在整個測定過程，影響測定結果；電子自旋共振法，需要分離脂質體與外水相探針或對展寬劑溶液的滲透壓及PH有嚴格要求，因此適用范圍窄；電導率法要求選擇標記物必須是電中性、膜不滲透性且不干擾電導率測定的物質;核磁共振法，溫度對結果影響較大，溫度越高，膜滲透性增加，內(nèi)外水相水德擴散系數(shù)逐漸接近，使測定的包封體積值減?。煌瑫r上述測定方法有的需要特殊的儀器設備、有的需要進行脂質體與脂質體外溶液的有效分離，因此，現(xiàn)有方法存在步驟復雜、限制性強、成本高等缺陷，缺少直接測量脂質體包封體積的快速測定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術中脂質體包封體積測定方法復雜、限制性強的問題，提供了一種脂質體包封體積的快速測定方法，該測定方法不需要進行離心、透析、凝膠過濾等復雜操作，直接通過最簡便的酸堿滴定技術快速測定脂質體包封體積。
[0005]本發(fā)明的技術構思是:根據(jù)脂質體的結構分為脂質體外部與內(nèi)部兩個獨立空間的結構特點，先測定脂質體外部空間體積(設為V.)，再利用表面活性劑將脂質體膜打開使脂質體內(nèi)部空間與外部空間合并，可以測定溶液的總體積(設為Vt)，原脂質體包封空間的體積即為Vt與Vqut的差值(Vt-Vqut)。
[0006]本發(fā)明的技術要點是:一種脂質體包封體積的快速測定方法，包括以下步驟:在脂質體溶液中加入酸堿指示劑，用標準溶液進行酸堿滴定，記錄滴定平衡點標準溶液的用量Vl，再取等量的脂質體溶液，加入表面活性劑，再次用標準溶液進行酸堿滴定，記錄滴定平衡點標準溶液的用量V2，按公式(I)計算脂質體的包封體積:
[0007]脂質體的包封體積百分數(shù)PIN(%)= (V2_V1)/V2 (I)。
[0008]進一步的，向脂質體溶液中加入酸堿指示劑，利用標準溶液進行酸堿滴定，記錄滴定平衡點標準溶液的用量Vl;取相同量的脂質體溶液，先加入表面活性劑將脂質體膜破壞，再加入酸堿指示劑，利用標準溶液進行酸堿滴定，記錄滴定平衡點標準溶液的用量V2 ；設標準溶液的濃度為C標，則脂質體外的酸(或堿)總量為C標X Vl，脂質體內(nèi)外酸(或堿)的總量為C標XV2，由于溶液中溶質分子是均勻分布的，脂質體外部空間體積(V.)與脂質體溶液的體積(Vt)的比值(Vout/Vt)等于脂質體外的酸(或堿)總量(C標XVI)與脂質體內(nèi)外的酸(或堿)總量(QSXV2)之比，即:
[0009]Vout/Vt = (C? X Vl) / (C? X V2) = Vl /V2 (2)
[0010]脂質體外水相體積占總體積百分數(shù)Pqut( % ) =Vout/Vt=V1/V2
[0011](3)
[0012]脂質體的包封體積百分數(shù)ΡιΝ(% ) = 1-Pout= 1-V1/V2= (V2-V1 )/V2
[0013](4)。
[0014]進一步的，所述的酸堿指示劑為甲基橙、甲基紅、溴百里酚藍、溴甲酚綠、酚酞、紫色石蕊中一種或多種復配。酸堿指示劑要具體根據(jù)脂質體溶液的酸堿性來選擇，如脂質體溶液呈弱堿性則選擇溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑。
[0015]進一步的，所述的表面活性劑為非離子表面活性劑。
[0016]優(yōu)選的，所述的非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸甲酯乙氧基化物中一種或多種復配。作為優(yōu)選，本發(fā)明采用十二烷基聚乙二醇醚非離子表面活性劑。
[0017]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明利用酸堿滴定分別測定脂質體膜破壞前后的標準溶液(酸或堿)用量，可以直接計算脂質體的包封體積。本發(fā)明測定方法簡便、無需分離、透析、凝膠過濾等復雜操作，測試成本低，測定迅速，該方法測定結果準確性高，設備簡單，適用范圍廣，可以用于脂質體產(chǎn)品檢測與制備工藝優(yōu)化，為脂質體包封水溶性藥物的實際應用起到關鍵作用。
【附圖說明】
[0018]圖1DOPC脂質體的滴定結果；
[0019]圖2DOPC脂質體的滴定平衡點確定；
[0020]圖3DOTAP脂質體的滴定結果；
[0021]圖4DOTAP脂質體的滴定平衡點確定；
[0022]圖5脂質體溶液(加表面活性劑)的滴定結果；
[0023]圖6脂質體溶液(加表面活性劑)的滴定平衡點確定；
[0024]圖7無脂質體溶液(加表面活性劑)的滴定結果；
[0025]圖8無脂質體溶液(加表面活性劑)的滴定平衡點確定。
【具體實施方式】
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[0026]下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下述實施例中如無特殊說明，所采用的實驗方法均為常規(guī)方法，所用材料、試劑等均可從化學公司購買。
[0027]實施例1:使用磷脂酰膽堿(DOPC)制備脂質體并測定脂質體包封體積
[0028]1.1脂質體的制備
[0029]采用薄膜分散法進行脂質體制備。稱取DOPC磷脂0.0063克置于適宜容器中，用5mL氯仿完全溶解，在旋轉蒸發(fā)儀上緩慢蒸干并使磷脂均勻分布于容器內(nèi)表面，放在真空干燥機中真空干燥5小時以上去除氯仿。將4mL制備脂