一種篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及魚皮膠原多膚，具體設(shè)及一種篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原 多膚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 膠原是動物體中分布最廣、含量最多的一種蛋白質(zhì)，廣泛的存在于動物的皮、骨、 腫、膜等結(jié)締組織中。膠原具有Ξ螺旋結(jié)構(gòu)，并且保留了生物活性，Ξ螺旋結(jié)構(gòu)徹底松開，成 為3條自由的膚鏈，且降解成多分散的膚段，因此膠原蛋白是多膚的混合物。研究發(fā)現(xiàn)，生 命活動中各種生理變化和生化反應(yīng)都有多膚的參與。
[0003] 傳統(tǒng)的膠原大多從陸地上的哺乳動物的皮中取得，但是隨著近年來畜禽疫病的頻 繁發(fā)生，W陸上哺乳動物皮為原料來源越來越不安全，另外，由于宗教原因，對豬皮膠原蛋 白的提取也受到了一定的限制。因此，尋求一種膠原蛋白新來源成了一大熱口。
[0004] 我國擁有狹長的海岸線和極其富饒的海洋資源，海洋生物資源非常豐富，將是膠 原蛋白的一大重要來源。海洋產(chǎn)品的加工會留下大量的下腳料，利用度不夠，造成了資源的 浪費，還會污染環(huán)境。而廢棄的魚皮中膠原蛋白含量可占總蛋白的60-80%，是在魚的各類 組織中蛋白含量最高的一部分。因此深海魚皮膠原蛋白可作為一種新型的膠原蛋白資源。
[0005]生物活性膚當(dāng)前國內(nèi)外研究的熱點，其具有多種人體代謝和生理調(diào)節(jié)功能，易消 化吸收，有促進免疫、激素調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用，W及關(guān)節(jié)潤滑、傷口 愈合、巧化作用、血液凝固和衰老等有著密切的關(guān)系。因此，研究一種高生物吸收利用度的 膠原多膚，可為醫(yī)藥領(lǐng)域、保健領(lǐng)域、食品領(lǐng)域、化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用提供很好的技術(shù)支持。
[0006] 但是不是所有種類和分子量的膠原多膚都會表現(xiàn)出較強的生理作用，機體對不同 種類不同分子量范圍的多膚的吸收利用程度不同，因此，選擇一種高生物吸收利用度的膠 原多膚具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明旨在從不同的種類和不同分子量段的深海魚皮膠原多膚中篩選高生物吸 收利用度的深海魚皮膠原多膚的方法。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0009]-種篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多膚的方法：
[0010] (1)選取不同來源不同分子量的深海魚皮膠原多膚段作為原料，通過HPLC進行確 認原料多膚的分子量；
[0011] (2)將上述確認分子量的原料多膚用生理鹽水配制成灌胃溶液，對進行大鼠灌胃 實驗；
[0012] (3) 24h后收集大鼠的糞便、尿液、飼料攝入量，測定徑脯氨酸的吸收率；
[001引 （4)分別取上述步驟似進行大鼠灌胃后的不同時間點大鼠眼眶的血，測定血液 中的徑脯氨酸含量；根據(jù)公式吸收率=徑脯氨酸吸收量/體重，計算灌胃后徑脯氨酸吸收 率最高的組，w及測定血液中徑脯氨酸含量，選擇含量最高的組，即獲得高生物吸收利用度 的深海魚皮膠原多膚。
[0014] 所述原料不同來源不同分子量的深海魚皮膠原多膚為分子量分別是小于IKDa， 1-3邸a, 3-6邸a的Ξ文魚皮膠原多膚；分子量分別是小于化Da, 1-3邸a, 3-6邸a的轄魚皮膠 原多膚。
[0015] 所述HPLC進行確認原料多膚的分子量采用凝膠色譜法，其中，色譜柱TSKgel G2000SWXL7. 8X300mm，5μm，TOSOH,Japan;流動相A(0. 1 氣乙酸），流動相B(乙臘）， 時間30min，A:B= 80:20，進樣量10μL，λ= 220nm，溫度25°C。
[0016] 所述灌胃溶液濃度為40mg/血。
[0017] 所述步驟（4)分別取上述步驟似進行大鼠灌胃后的0.化，比，化，地，化不同時 間點大鼠眼眶的血。
[001引本發(fā)明的有益之處：
[0019] 采用本發(fā)明方法從兩種常用的深海魚皮膠原多膚中獲得吸收率較高的深海魚皮 膠原多膚，另外，在目前已發(fā)現(xiàn)的吸收率較好的分子量段為小于服Da的范圍內(nèi)，細分并找 到了吸收利用度更高的分子量段。對醫(yī)藥生產(chǎn)、保健品生產(chǎn)的具有重要意義。
【附圖說明】
[0020] 圖1A-F為本發(fā)明實施例提供的不同分子量多膚樣品的高效液相色譜圖，圖 1A狂JHS<lkDa)，圖 1B狂JHSl-3kDa)，圖 1C狂JHS3-6kDa)，圖 1D(QDKN<lkDa)，圖 1E(QDKN l-3kDa)，圖 1F(QDKN3-6kDa)。
[0021] 圖2為本發(fā)明實施例提供的多膚樣品在血液中的含量隨時間變化圖。
【具體實施方式】
[0022] 下面根據(jù)實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
[0023] 篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多膚的方法：
[0024] (1)W購買的Ξ文魚和轄魚作為篩選深海魚皮膠原多膚原料，將每種膠原蛋白分 為Ξ個分子量段，小于化Da, 1-3邸日，3-6邸a。
[00巧](2)利用HPLC凝膠色譜法進行分子量段的驗證，其中，凝膠柱為色譜柱TSKgel G2000SWXL7. 8X300mm，5μm燈0S0H,Japan)，流動相A(0. 1 氣乙酸），流動相B(色譜乙 臘），Α:Β= 80:20,溫度25°C，梯度洗脫30min，凝膠色譜圖如圖1A-F所示，經(jīng)計算所有多膚 樣品都符合其宣稱的分子量段。
[0026] (3)將6種多膚原料用生理鹽水分別配制成濃度為40mg/血的灌胃溶液，對大鼠進 行灌胃。
[0027] (4)灌胃前1化對大鼠禁食不禁水，每只大鼠按照體重每lOOg灌入40mg多膚。灌 胃前記錄大鼠體重，飼料量。
[0028] 巧)24h后收集每只大鼠糞便、尿液，W及大鼠飼料剩余量，用徑脯氨酸測試盒（南 京建成生物工程研究所）分別測定糞便、尿液及飼料中徑脯氨酸含量，并計算徑脯氨酸吸 收率，如表1所示，可得出Ξ文魚皮膠原多膚分子量段在l-3KDa的吸收率較高，轄魚皮膠原 多膚分子量在l-3KDa和3-6KDa的吸收率較高。
[0029] 表1為本發(fā)明實施例提供的多膚樣品的吸收率
[0030]
[0031] 同時，將上述步驟（3)配置的灌胃溶液對大鼠進行灌胃，但不需記錄飼料量，灌胃 后按照不同的時間點0.化，比，化，地，化進行眼眶取血，每次1血左右。
[0032] 將取得的血液離心350化pm/min，時間15min，取上層血清用徑脯氨酸測試盒（南 京建成生物工程研究所）測定徑脯氨酸的含量，如圖2所示，轄魚皮膠原多膚l-3KDa和 3-6邸a的初始吸收量均高于25μg/mU其余組的初始吸收量則比較低，均低于20μg/mL， 但分子量段在3-6KDa的轄魚皮膠原多膚降解速度比較快，在灌胃后化時，徑脯氨酸含量驟 降至約5μg/mU因此確定l-3KDa的轄魚皮膠原多膚的口服吸收利用效果最好。
[0033] 分析徑脯氨酸吸收率和血液中的徑脯氨酸含量，徑脯氨酸吸收率和含量越高，說 明實驗動物對其吸收利用度越高，因此選擇分子量段為l-3KDa的轄魚皮膠原多膚作為高 生物吸收利用度的膠原多膚。
【主權(quán)項】
1. 一種篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法，其特征在于： (1) 選取不同來源不同分子量的深海魚皮膠原多肽段作為原料，通過HPLC進行確認原 料多肽的分子量； (2) 將上述確認分子量的原料多肽用生理鹽水配制成灌胃溶液，對進行大鼠灌胃實 驗； (3) 24h后收集大鼠的糞便、尿液、飼料攝入量，測定羥脯氨酸的吸收率； (4) 分別取上述步驟⑵進行大鼠灌胃后的不同時間點大鼠眼眶的血，測定血液中的 羥脯氨酸含量，選擇含量最高的組，即獲得高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽。2. 按權(quán)利要求1所述篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法，其特征 在于：所述原料不同來源不同分子量的深海魚皮膠原多肽為分子量分別是小于lKDa， l-3KDa，3-6KDa的三文魚皮膠原多肽；分子量分別是小于lKDa，l-3KDa，3-6KDa的鱈魚皮膠 原多肽。3. 按權(quán)利要求1所述篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法，其特征在 于：所述HPLC進行確認原料多肽的分子量采用凝膠色譜法，其中，色譜柱TSKgelG2000 SWXL7. 8X300mm，5μm，TOSOH,Japan;流動相A(0· 1 %三氟乙酸），流動相B(乙腈），時間 3011^11，4:8 = 80:20，進樣量1(^1^，人=220腹，溫度25°(：。4. 按權(quán)利要求1所述篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法，其特征在 于：所述灌胃溶液濃度為40mg/mL。5. 按權(quán)利要求1所述篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法，其特征在 于：所述步驟⑷分別取上述步驟⑵進行大鼠灌胃后的〇. 5h，111，211，411，811不同時間點大 鼠眼眶的血。
【專利摘要】本發(fā)明涉及魚皮膠原多肽，具體涉及一種篩選高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽的方法。具體選取不同來源不同分子量的深海魚皮膠原多肽段作為原料，通過HPLC進行確認原料多肽的分子量；將上述確認分子量的原料多肽用生理鹽水配制成灌胃溶液，對進行大鼠灌胃實驗；24h后收集大鼠的糞便、尿液、飼料攝入量，測定羥脯氨酸的吸收率；分別取上述進行大鼠灌胃后的不同時間點大鼠眼眶的血，測定血液中的羥脯氨酸含量，選擇含量最高的組，即獲得高生物吸收利用度的深海魚皮膠原多肽。本發(fā)明選擇出具有高生物吸收利用度的一種膠原多肽，該高吸收度膠原多肽來源廣泛，并可廣泛應(yīng)用于保健品、化妝品、生物敷料、醫(yī)用止血材料、動物飼料等等多個領(lǐng)域。
【IPC分類】G01N30/88, G01N33/68
【公開號】CN105403708
【申請?zhí)枴緾N201510671249
【發(fā)明人】秦松, 尹利端, 閆鳴艷, 于建偉, 劉冬艷, 王桐, 石麗花
【申請人】中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所, 煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年10月13日