一種用液相色譜法分離測定克利貝特中間體有關物質(zhì)的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學領域，具體設及液相色譜法分離測定克利貝特中間體及其有 關物質(zhì)的方法。
【背景技術】
[0002] 克利貝特是一種新型的纖維酸類降脂新藥，對各種類型的高脂血癥均有效，既可 作為第一線降脂藥物，又可在其他降脂藥物療效不佳時使用?？死愄刂虚g體的化學名為 [2, 2'-(4, 4'-cyclohexylidenediphenoxy) ]-2, 2'-dimethyldiethylbutyrate，分子式 為〔32成4〇6?？死愄刂虚g體結構式為：
在合成該化合物的過程中，需要控制一些重要中間體的純度，W減少副反應的發(fā)生和 雜質(zhì)的生成，從而提高終產(chǎn)品的收率和純度。對于克利貝特中間體的合成主要控制的有關 物質(zhì)為 4, 4'-(切clohexane-l,l-di}d)diphenol，結構式為：
克利貝特中間體中的雜質(zhì)去除不完全，將會引起副反應的發(fā)生和雜質(zhì)的生成，最終影 響藥物純度和質(zhì)量。因此，實現(xiàn)克利貝特中間體及其有關物質(zhì)的分離測定，在克利貝特的生 產(chǎn)及其質(zhì)量控制方面具有重要的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種分析克利貝特中間體化學純度的方法，從而實現(xiàn)克利 貝特中間體與其有關物質(zhì)的分離和測定，保證克利貝特中間體的純度，實現(xiàn)克利貝特的質(zhì) 量可控。
[0004] 本發(fā)明所述的用液相色譜法分析克利貝特中間體化學純度的方法，是采用辛烷基 硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，W-定比例的緩沖鹽溶液-有機相為流動相。
[0005] 上述所說的色譜柱W辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料，色譜柱選自Kromasil、化itary 和Alltima等品牌。
[0006] 上述所說的有機相選自W下化合物：甲醇、乙臘、丙醇、異丙醇、四氨巧喃等，優(yōu)選 乙臘。
[0007] 上述所說的方法，其流動相緩沖鹽溶液-有機相采用梯度洗脫。
[000引上述所說的方法中，緩沖鹽溶液選自憐酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、高氯酸鹽，優(yōu)選為憐 酸鹽。
[0009] 其中緩沖鹽溶液的濃度為0. 01~0.lmol/1，優(yōu)選濃度為0. 03mol/L。
[0010] 本發(fā)明所述的分離測定方法，可按照W下方法實現(xiàn)： 1)取克利貝特中間體樣品適量，用乙臘或流動相溶解樣品，配制成每ImL含克利貝特 0. 1~1. 5mg的樣品溶液。
[0011] 2)設置流動相流速為0. 5~1. 5血/min,流動相流速優(yōu)選為1. 0血/min,檢測波長 為200~250皿，最佳檢測波長為231皿，柱溫箱溫度為10~40°C，柱溫箱溫度最佳為25°C。
[0012] 3)取1)的樣品溶液10~50μ以注入液相色譜儀，完成克利貝特中間體與其有關 物質(zhì)的分離測定。其中： 高效液相色譜儀的型號，無特別要求，本發(fā)明采用的色譜儀為島津：LC-20AT累，SPD-M20A檢測器，SIL-20AC自動進樣器，CBM-20A控制器，CT0-10AS柱溫箱，LCsolution工 作站 色譜柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5μm) 流動相：Α:0. 03Μ憐酸二氨鐘緩沖液（pH2. 2)，Β:乙臘；按W下梯度進行洗脫：
流速：1.OmL/min檢測波長：231皿 進樣體積：10μL 本發(fā)明采用C8(Alltima，250X4.6mm，5ym)色譜柱，能夠有效的分離克利貝特中間體 及其有關物質(zhì)。本發(fā)明解決了克利貝特中間體及其有關物質(zhì)的分離測定問題，從而減少了 副反應的發(fā)生，提高了產(chǎn)物的收率和純度，保證了克利貝特的質(zhì)量可控。
【附圖說明】
[0013] 圖1為實施例1時的克利貝特中間體及其有關物質(zhì)HPLC圖； 圖2為實施例1時克利貝特中間體HPLC圖； 圖3為實施例2時的克利貝特中間體及其有關物質(zhì)HPLC圖； 圖4為實施例2時的克利貝特中間體的HPLC圖； 圖5為實施例3時的溶劑HPLC圖； 圖6為實施例3時的克利貝特中間體及其有關物質(zhì)HPLC圖； 圖7為實施例3時的克利貝特中間體的HPLC圖。
[0014]
【具體實施方式】： W下實施例用于進一步理解本發(fā)明，但不限于本實施的范圍。
[001引 實施例1 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色譜柱：C8 (K;romasil，250X4. 6mm，5ym); 流動相：A:0. 03M憐酸二氨鐘緩沖液（pH2. 2)，B:甲醇；A:B=20 :80 ; 流速：1.OmL/min檢測波長：231皿 進樣體積：10μL 實驗步驟 取克利貝特中間體及其有關物質(zhì)適量，分別用乙臘溶解樣品，配制成含克利貝特中間 體及其有關物質(zhì)約l.Omg/mL的樣品溶液。取上述克利貝特中間體及其有關物質(zhì)溶液適 量，配制成系統(tǒng)適用性溶液；按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見附圖 1~2,圖1中保留時間為29. 865min的色譜峰為克利貝特中間體，其余色譜峰為克利貝特中 間體各有關物質(zhì)的色譜峰；圖2中保留時間為29. 835min的色譜峰為克利貝特中間體。
[001引實施例2 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色譜柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5ym); 流動相：A:0.03M憐酸二氨鐘緩沖液（pH2. 2);B:乙臘；按^下梯度進行洗脫: 流速：1.OmL/min
檢測波長：231皿 進樣體積：10μL 實驗步驟 取克利貝特中間體及其有關物質(zhì)適量，分別用乙臘溶解樣品，配制成含克利貝特中間 體及其有關物質(zhì)約1.Omg/mL的樣品溶液。取上述克利貝特中間體及其有關物質(zhì)溶液適 量，配制成系統(tǒng)適用性溶液；按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見附圖 3~4,圖3中保留時間為26. 820min的色譜峰為克利貝特中間體，其余色譜峰為克利貝特中 間體各有關物質(zhì)的色譜峰；圖4中保留時間為26. 916min的色譜峰為克利貝特中間體。 [0017] 實施例3 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色譜柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5ym); 流動相：A:0.03M憐酸二氨鐘緩沖液（pH2. 2);B:乙臘；按^下梯度進行洗脫:
流速：1.OmL/min檢測波長：231皿 進樣體積：10μL 實驗步驟 取克利貝特中間體有關物質(zhì)適量，分別用乙臘溶解樣品，配制成含克利貝特中間體及 其有關物質(zhì)約1.Omg/血的樣品溶液；取上述克利貝特中間體及其有關物質(zhì)溶液適量，配制 成系統(tǒng)適用性溶液；另取乙臘適量作為空白溶劑。按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄 色譜圖。結果見附圖5~7,圖5為溶劑色譜圖；圖6中保留時間為33. 517min的色譜峰為克 利貝特中間體，其余色譜峰為克利貝特各有關物質(zhì)的色譜峰，由圖可W看出，克利貝特與其 有關物質(zhì)能夠達到基線分離，符合中國藥典的要求；圖7中保留時間為33. 532min的色譜峰 為克利貝特中間體，可W看出在該條件下克利貝特中間體與其有關物質(zhì)可W完全分離。
[0018]對上述克利貝特中間體及其有關物質(zhì)分析方法的W下項目進行了驗證。
[001引系統(tǒng)適用性試驗 根據(jù)上述實施例3確定的色譜條件，用克利貝特中間體和各有關物質(zhì)的混合物來分析 此色譜條件是否符合要求。由圖6可見此條件下各個有關物質(zhì)與主峰之間分離度符合要 求，峰純度和單點閥值均符合要求。
[0020] 溶液穩(wěn)定性
[0021]將克利貝特中間體與其各有關物質(zhì)的混合物，分別于0、2、4、6、8、12、18、24小時 進樣，考察樣品定量測定時溶液的穩(wěn)定性，由結果可見，本溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
[0022]
耐用性 為了進一步驗證方法的穩(wěn)定性，我們將流速、柱溫、緩沖鹽抑和色譜柱型號運些條件 進行相應的微調(diào)，W考察色譜條件的耐用性。 結果表明，流速變化在±0. 2ml/min范圍內(nèi)，柱溫變化在±5°C范圍內(nèi)，色譜峰型沒有 變化，僅保留時間有相應的前移和后移。緩沖液抑變化對出峰時間也無明顯改變。色譜柱 換做Apollo和Kromasil后各物質(zhì)保留時間和分離度無明顯變化。方法耐用性良好。
【主權項】
1. 一種液相色譜法分離測定克利貝特中間體有關物質(zhì)的方法，其特征在于：辛烷基硅 烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的緩沖鹽溶液-有機相為流動相。2. 根據(jù)權利要求1所述的分離測定方法，色譜柱選自品牌為Kromasil、Unitary和 Alltima的色譜柱。3. 根據(jù)權利要求1所述的分離測定方法，所說的有機相選自以下化合物中的一種：甲 醇、乙腈、丙醇、異丙醇、四氫呋喃等。4. 根據(jù)權利要求3所述的分離測定方法，所說的有機相優(yōu)選乙腈。5. 根據(jù)權利要求1所述的分離測定方法，所說的緩沖鹽溶液選自以下緩沖鹽：磷酸鹽、 甲酸鹽、乙酸鹽、高氯酸鹽等。6. 根據(jù)權利要求5所述的分離測定方法，所說的緩沖鹽溶液中所含緩沖鹽的濃度最優(yōu) 為 0· 03mol/L。7. 根據(jù)權利要求5所述的分離測定方法，所說的緩沖鹽優(yōu)選磷酸鹽。8. 根據(jù)權利要求1所述的分離測定方法，其特征在于，包括以下幾個步驟： 1) 取克利貝特中間體樣品適量，分別用乙腈或流動相溶解樣品，配制成每lmL含克利 貝特中間體及其有關物質(zhì)0. 1~1. 5mg的樣品溶液； 2) 設置流動相流速為0. 5~1. 5mL/min，檢測波長為200~250nm，柱溫箱溫度為10~ 40°C； 3) 取1)的樣品溶液10~50μL，注入液相色譜儀，完成克利貝特中間體及其有關物質(zhì) 的分離測定。9. 根據(jù)權利要求5所述的分離分析方法，緩沖鹽優(yōu)選磷酸二氫鉀。10. 根據(jù)權利要求5所述的分離分析方法，緩沖溶液的pH值優(yōu)選2. 2。11. 根據(jù)權利要求8所述的分離分析方法，步驟2)所說的流動相流速優(yōu)選1.OmL/min。12. 根據(jù)權利要求8所述的分離分析方法，步驟2)所說的檢測波長優(yōu)選231nm。
【專利摘要】本發(fā)明屬分析化學領域，本發(fā)明公開了一種用液相色譜法分離測定克利貝特中間體[2,2ˊ-(4,4ˊ-cyclohexylidenediphenoxy)]-2,2ˊ-dimethyl？diethyl？butyrate及其有關物質(zhì)的方法，該方法以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的緩沖鹽溶液-有機相為流動相，可以定量測定克利貝特中間體及其有關物質(zhì)的含量，從而有效控制克利貝特中間體的質(zhì)量，保證克利貝特終產(chǎn)品的質(zhì)量可控。本發(fā)明方法專屬性強，準確度高，操作簡便。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105403647
【申請?zhí)枴緾N201510648724
【發(fā)明人】王曉瑩, 劉秋葉
【申請人】北京萬全德眾醫(yī)藥生物技術有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年10月9日