一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒及其使用方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體是一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒及其使用方法。
【背景技術】
[0002]隨著我國工業(yè)的迅速發(fā)展及農業(yè)和產業(yè)結構的戰(zhàn)略性調整，特別是栽培方式的變革，原先為次要的、甚至為檢疫性的病蟲草等有害生物的發(fā)生危害日趨嚴重，抗藥性不斷上升，導致農藥用量和施藥次數不斷增加。濫用高毒、高殘留農藥的現象屢禁不止，有不按規(guī)范要求使用農藥，有的甚至嚴重違反農藥安全使用標準。使用高毒農藥致使相當部分農產品農藥殘留明顯超標，食用后在人體內積累，引發(fā)疾病，有時甚至發(fā)生急性中毒，嚴重危及人民健康和生命安全。
[0003]有機磷農藥品種多、藥效高，用途廣，易分解，在人、畜體內一般不積累，在農藥中是極為重要的一類化合物。但有不少品種對人、畜的急性毒性很強，在使用時特別要注意安全，近年來，高效低毒的品種發(fā)展很快，逐步取代了一些高毒品種，使有機磷農藥的使用更安全有效。但是，農藥殘留問題也給農產品生產和正常貿易帶來了許多負面影響。隨著消費者的健康意識、環(huán)保意識的日益增強，人們更加關心糧食、蔬菜、水果、中藥材及肉類中有無農藥污染。國家科技部設立了食品安全重大專項，在食品安全檢測方面也投入了大量研究開發(fā)經費，說過蔬菜批發(fā)市場、集貿市場、超市、賓館、學校食堂以及個人用戶等，對食品安全的現場快速檢測有很大的需求。
[0004]目前國內檢測蔬菜水果中有機磷及氨基甲酸酯類農藥殘留常用的方法有速測卡法及分光光度法，其中速測卡法在檢測過程當中需保持環(huán)境溫度37°C條件進行反應，檢測結果需通過肉眼與空白對照卡進行比對，為定性判斷，肉眼的判斷有時會存在較大誤差，若所測結果為陽性樣品，則需采用其他分析方法進一步確定其農藥殘留的含量；分光光度法檢測過程中需保持環(huán)境溫度在37°C左右，實驗員需現場配置底物及根據酶的活性配置乙酰膽堿酯酶，檢測結果需經計算得到酶抑制率，若得到陽性樣品結果則需用其他分析方法進一步確定農藥殘留含量，此種方法步驟較繁瑣。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種結構簡單、使用方便的快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒及其使用方法，以解決上述【背景技術】中提出的問題。
[0006]為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案:
一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒，包括第一顯色劑、第二顯色劑、20mL加熱試管、滴管、定性濾紙、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑，所述第一顯色劑為4-8mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二顯色劑為4-10g/L剛果紅的乙醇溶液。
[0007]所述快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒的使用方法，具體步驟如下: (1)將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用，所述氯化鈣溶液的濃度為5-15mmol/L，氯化鈣溶液的體積為lOOmL，蔗糖為l_3g，甘氨酸為l_3g，甘油為5-15mL，牛血清白蛋白為l_3g ;
(2)將所述酶冷凍保護劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋3000-8000倍，所述膽堿氧化酶稀釋200-800倍，所述過氧化物酶稀釋200-800倍；
(3)取少量待測樣品用清水洗去表面泥土，攪拌5-10min后靜置3_5min;
(4)分別向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反應產物，分別滴加于定性濾紙上，揮發(fā)干后，將濾紙的點樣處置于加熱的第一顯色劑的溶液上，所述向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水為50-200 μ L，所述待檢樣品溶液為50-200 μ L，所述C酶瓶中純凈水為50-200 μ L，磷酸鹽緩沖液為0.lmol/L,且pH為7.0 ;
(5)至溴揮發(fā)完后，在步驟二中所述的點樣處滴加第二顯色劑，觀察顏色變化；
(6)若步驟(5)中所述的點樣處顯藍色則殘留有有機磷農藥；若步驟(5)中所述的點樣處顯粉紅或者紅色則無有機磷農藥殘留。
[0008]作為本發(fā)明再進一步的方案:所述步驟(4)中加熱第一顯色劑的溶液的溫度為45-55 Γ。
[0009]與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明成本低、制作簡單，檢測靈敏度高，其靈敏度比現有技術高出數十倍及上千倍，且檢測線性范圍顯著增寬，使用方便，操作簡單快捷，在測試中不需要復雜的配制試劑過程，非專業(yè)人員按照試劑盒說明書便可輕易完成檢測。
【具體實施方式】
[0010]下面結合【具體實施方式】對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。
[0011]實施例1
一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒，包括第一顯色劑、第二顯色劑、20mL加熱試管、滴管、定性濾紙、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑，所述第一顯色劑為4mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二顯色劑為4g/L剛果紅的乙醇溶液。
[0012]所述快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒的使用方法，具體步驟如下:
(1)將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用，所述氯化鈣溶液的濃度為5mmol/L，氯化鈣溶液的體積為100mL，蔗糖為lg，甘氨酸為lg，甘油為5mL，牛血清白蛋白為lg ；
(2)將所述酶冷凍保護劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋3000倍，所述膽堿氧化酶稀釋200倍，所述過氧化物酶稀釋200倍；
(3)取少量待測樣品用清水洗去表面泥土，攪拌5min后靜置3min;
(4)分別向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反應產物，分別滴加于定性濾紙上，揮發(fā)干后，將濾紙的點樣處置于加熱的第一顯色劑的溶液上，加熱第一顯色劑的溶液的溫度為45°C，加熱過程是通風的，所述向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水為50 μ L，所述待檢樣品溶液為50 μ L，所述C酶瓶中純凈水為50 μ L，磷酸鹽緩沖液為0.lmol/L,且pH為7.0 ;
(5)至溴揮發(fā)完后，在步驟二中所述的點樣處滴加第二顯色劑，觀察顏色變化；
(6)若步驟(5)中所述的點樣處顯藍色則殘留有有機磷農藥；若步驟(5)中所述的點樣處顯粉紅或者紅色則無有機磷農藥殘留。
[0013]實施例2
一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒，包括第一顯色劑、第二顯色劑、20mL加熱試管、滴管、定性濾紙、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑，所述第一顯色劑為5mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二顯色劑為5g/L剛果紅的乙醇溶液。
[0014]所述快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒的使用方法，具體步驟如下:
(1)將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用，所述氯化鈣溶液的濃度為8mmol/L，氯化鈣溶液的體積為100mL，蔗糖為1.5g，甘氨酸為1.5g，甘油為8mL，牛血清白蛋白為1.5g ；
(2)將所述酶冷凍保護劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋4000倍，所述膽堿氧化酶稀釋300倍，所述過氧化物酶稀釋300倍；
(3)取少量待測樣品用清水洗去表面泥土，攪拌6min后靜置3.5min ;
(4)分別向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反應產物，分別滴加于定性濾紙上，揮發(fā)干后，將濾紙的點樣處置于加熱的第一顯色劑的溶液上，加熱第一顯色劑的溶液的溫度為48°C，加熱過程是通風的，所述向C酶瓶、T酶瓶內滴加純凈水為80 μ L，所述待檢樣品溶液為80 μ L，所述C酶瓶中純凈水為80 μ L，磷酸鹽緩沖液為0.lmol/L,且pH為7.0 ;
(5)至溴揮發(fā)完后，在步驟二中所述的點樣處滴加第二顯色劑，觀察顏色變化；
(6)若步驟(5)中所述的點樣處顯藍色則殘留有有機磷農藥；若步驟(5)中所述的點樣處顯粉紅或者紅色則無有機磷農藥殘留。
[0015]實施例3
一種快速檢測農產品中有機磷殘留的試劑盒，包括第一顯色劑、第二顯色劑、20mL加熱試管、滴管、定性濾紙、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑，所述第一顯色劑為6mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二顯色劑為6g/