一種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及全血化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)，特別是用于體外診斷即時(shí)檢測(cè)用的一種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管及其使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]發(fā)光免疫分析技術(shù)因其高靈敏度、良好的穩(wěn)定性以及在自動(dòng)化設(shè)備上多樣性柔性操作，在現(xiàn)代臨床免疫學(xué)檢測(cè)方法中居于核心地位，迅速替代了放射免疫分析技術(shù)；與人體生理、病理相關(guān)的生物活性物質(zhì)或疾病標(biāo)志物，以及外來抗原均可藉此實(shí)現(xiàn)微量定量檢測(cè)，用于疾病診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷。
[0003]由于試劑結(jié)構(gòu)的多組份特性，現(xiàn)今發(fā)展的全自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)涉及多環(huán)節(jié)液體轉(zhuǎn)移，并因多樣品上機(jī)運(yùn)行，相應(yīng)進(jìn)樣、出樣裝置需要反復(fù)不斷清洗，使得儀器變得龐大、復(fù)雜，制作困難，故障率較高；而且不能檢測(cè)全血樣品，僅能檢測(cè)血清、血漿等樣品，只限于中心實(shí)驗(yàn)室用，因而檢測(cè)周轉(zhuǎn)期(turnaround time, TAT)較長(zhǎng)，不適合病人所在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，難于滿足即時(shí)檢測(cè)需求。
[0004]法國(guó)梅里埃的B1Merieux Vidas,日本三菱化學(xué)PATHFAST以磁微粒為固相的全血樣品快速定量檢測(cè)裝置；這類裝置將其它液體組份預(yù)先分裝成單人份的集成結(jié)構(gòu)；此類產(chǎn)品存在液體易揮發(fā)、保存期短，以及分、封裝繁瑣和易于交叉污染等問題；且儀器與檢測(cè)品種高度專一，其他項(xiàng)目上機(jī)兼容性差，檢測(cè)指標(biāo)有限，檢測(cè)通量小，擴(kuò)展能力差，不利于資源利用。
[0005]以膠體金和熒光物質(zhì)為標(biāo)記物的硝酸纖維素膜固相側(cè)向免疫層析技術(shù)產(chǎn)品，是目前一大類即時(shí)檢測(cè)(Point of Care Test, P0CT)產(chǎn)品。簡(jiǎn)便是其突出的特點(diǎn)，然而，由于材料變異大、工藝與檢測(cè)過程有缺陷，產(chǎn)品質(zhì)量可控性差，使得此類產(chǎn)品靈敏度低，不精密度高，重復(fù)性差，定量準(zhǔn)確性不足；只能用于對(duì)高危人群的初篩，不能用作疾病診斷的常規(guī)工具。
[0006]以醋酸纖維素膜為固相、膠體金為標(biāo)記物的斑點(diǎn)免疫滲濾法也是一種快速檢測(cè)法。其結(jié)構(gòu)是在醋酸纖維素膜上特定位置點(diǎn)樣固定有特定抗體(抗原)，將此固相膜與其下的吸水材料纖維固定在一塑料盒中。檢測(cè)時(shí)，先點(diǎn)上樣品，反應(yīng)一定時(shí)間后，再滴入膠體金標(biāo)記物，形成固相-樣品待測(cè)定物-膠體金復(fù)合物，呈現(xiàn)有色反應(yīng)物，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的定性檢測(cè)。未反應(yīng)的成分通過醋酸纖維素間隙在吸水材料的毛細(xì)管力作用下吸至吸水材料中。此方法分析能力與側(cè)向免疫層析分析相當(dāng)。其固相過程是粗放型被動(dòng)吸附作用，固相的量不確定，未被吸附的固相成分在后續(xù)檢測(cè)時(shí)會(huì)帶走待測(cè)物，影響檢測(cè)靈敏度。膜只能結(jié)合固相成分而不能作為膠體金標(biāo)記物吸附載體而形成一體結(jié)構(gòu)。由于膜致密透光性差，發(fā)光分析時(shí)會(huì)阻礙光線傳播，吸光分析難于比色，只能用掃描或目測(cè)法進(jìn)行定性或半定量檢測(cè)。由于未反應(yīng)物是有限分離的，效率不高，亦不徹底，故靈敏度低。不能濾過分離紅細(xì)胞等成分，因而不能用于測(cè)定全血樣品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供體外診斷即時(shí)檢測(cè)用的一種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管，以克服現(xiàn)有即時(shí)檢測(cè)(以膠體金和熒光標(biāo)記的側(cè)向免疫層析技術(shù)為代表)靈敏度低、準(zhǔn)確性和重復(fù)性差等問題，使本集成試劑管結(jié)構(gòu)可檢測(cè)全血等樣品而用于即時(shí)檢測(cè)，并具備常規(guī)診斷工具一樣的靈敏度、準(zhǔn)確性。
[0008]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述集成試劑管的使用方法，以實(shí)現(xiàn)在上述集成試劑管中完成全血處理、進(jìn)樣、免疫反應(yīng)、洗滌、發(fā)光反應(yīng)與測(cè)定相對(duì)發(fā)光單位(RLU)等檢測(cè)過程，省去了檢測(cè)時(shí)添加試劑標(biāo)記物、固相物的過程，大大縮短檢測(cè)時(shí)間，并具有高靈敏度和良好的重復(fù)性；滿足對(duì)全血、血清、血漿及其他體液中目標(biāo)免疫分子進(jìn)行定性、定量的即時(shí)檢測(cè)需求。
[0009]本發(fā)明提供的一種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管，包括一可預(yù)先固相化的微孔杯，其特征在于其還包括:一樣品過濾裝置，樣品過濾裝置包括一與微孔杯杯口拆裝配合的套接件，一固定在套接件上的塑料制樣品濾杯懸置在微孔杯內(nèi)的上半部，樣品濾杯的杯腔底面上固定有自上而下由樣品濾膜和標(biāo)記物膜層疊構(gòu)成的一結(jié)合膜；待測(cè)物通過樣品過濾裝置初始反應(yīng)后滴入預(yù)先固相的微孔杯再反應(yīng)得到發(fā)光免疫檢測(cè)用目標(biāo)物反應(yīng)鏈。
[0010]所述的套接件的形狀為與微孔杯杯口外壁套合的環(huán)狀，樣品濾杯設(shè)置在套接件環(huán)心部，樣品濾杯外壁與套接件之間通過相間隔的若干隔梁連接固定，相鄰隔梁的間隔空間連通微孔杯杯口內(nèi)外。
[0011]所述的樣品過濾裝置中還包括一頂壓固定結(jié)合膜邊沿的卡環(huán)，套入樣品濾杯杯腔內(nèi)的卡環(huán)把結(jié)合膜壓緊在杯腔的底面上；樣品濾杯底面下設(shè)有連通樣品濾杯杯腔內(nèi)外的滴液管。
[0012]所述的微孔杯的微孔孔腔由上部一圓通孔和下部一具有增加向上投照和反射聚光面積的側(cè)環(huán)壁的杯孔連接構(gòu)成，所述杯孔的底面和/或側(cè)環(huán)壁上凸出地設(shè)置有增加向上投照和反射聚光面積的反光。
[0013]所述的杯孔為倒圓臺(tái)孔、喇叭形孔、倒球帶孔或倒圓梯臺(tái)孔。
[0014]所述的反光體一體成型固定在杯孔的底面上，該反光體可把光線反射到杯孔的側(cè)環(huán)面上，所述的反光體為一球缺、圓錐、圓臺(tái)、棱錐或棱。
[0015]所述的杯孔側(cè)環(huán)壁上一體成型有若干所述的反光體，所述的反光體為底面與杯孔底面連接的四面。
[0016]所述的微孔杯的微孔孔腔為一圓孔的通用微孔。
[0017]—種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管的使用方法，其步驟為:
第一步:把微孔杯的微孔孔腔固相化，使其與樣品濾杯中的標(biāo)記物膜匹配；
第二步:把樣品過濾裝置固定在微孔杯杯口 ；往樣品濾杯內(nèi)加入指定體積的待測(cè)物樣品，待測(cè)物中的細(xì)胞顆粒被樣品濾膜阻隔于膜上層，水相自樣品濾膜孔隙向下滲至標(biāo)記物膜，標(biāo)記物膜中的標(biāo)記物被水相溶解并與水相中的待測(cè)物在標(biāo)記物膜內(nèi)初始結(jié)合反應(yīng)，得到初始反應(yīng)物；
第三步:通過氣體正壓或負(fù)壓使樣品濾杯中的初始反應(yīng)物流入微孔杯內(nèi)壁上的固相物結(jié)合反應(yīng)，即使初始反應(yīng)物中的非細(xì)胞成份及標(biāo)記物進(jìn)入微孔杯內(nèi)的固相區(qū)域參與反應(yīng)后；形成固相-待測(cè)分子-標(biāo)記物反應(yīng)鏈，即得到發(fā)光免疫檢測(cè)用目標(biāo)物； 第四步:把樣品過濾裝置從微孔杯上拔出、拋棄；
第五步:洗滌微孔杯的微孔孔腔，自微孔孔腔開口向內(nèi)持續(xù)不斷注入洗液，并用負(fù)壓裝置連續(xù)抽吸，充分洗滌，使未反應(yīng)成分被抽吸出微孔杯；
第六步:微孔杯洗滌完成后，向微孔杯內(nèi)加入一定體積的發(fā)光底物液，形成發(fā)光反應(yīng)，在一定時(shí)間內(nèi)測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度，并由儲(chǔ)存的校準(zhǔn)品曲線計(jì)算對(duì)應(yīng)待測(cè)物濃度和報(bào)告檢測(cè)結(jié)果Ο
[0018]本發(fā)明的顯著效果是:在本發(fā)明的集成試劑管內(nèi)可完成全血處理、進(jìn)樣、免疫反應(yīng)、洗滌、發(fā)光反應(yīng)與測(cè)定相對(duì)發(fā)光單位(RLU)等檢測(cè)過程，省去了檢測(cè)時(shí)添加試劑標(biāo)記物、固相物的過程，大大縮短檢測(cè)時(shí)間，并有高靈敏度和良好的重復(fù)性；適合對(duì)全血、血清、血漿及其他體液中目標(biāo)免疫分子定性、定量檢測(cè)，滿足即時(shí)檢測(cè)需求。
【附圖說明】
[0019]圖1為本發(fā)明集成試劑管的整體裝配結(jié)構(gòu)立體分解示意圖。
[0020]圖2為本發(fā)明集成試劑管的樣品過濾裝置與微孔杯裝配的立體分解示意圖。
[0021]圖3為本發(fā)明集成試劑管的樣品過濾裝置與微孔杯裝配完畢的立體圖。
[0022]圖4為本發(fā)明集成試劑管的結(jié)構(gòu)透視圖。
[0023]圖5為本發(fā)明集成試劑管的結(jié)構(gòu)剖視圖。
[0024]圖6為本發(fā)明集成試劑管的微孔杯底部反光體的多種等同替代方式。
[0025]圖7為本發(fā)明集成試劑管的微孔杯側(cè)面設(shè)置其后連接到杯底的四面體。
[0026]圖8為本發(fā)明集成試劑管采用的微孔杯為通用微孔孔腔為一通用圓孔。
[0027]圖中附圖標(biāo)識(shí)為:10.微孔杯；11.圓通孔；12.杯孔；121.杯孔側(cè)面；122.杯孔底面；13.標(biāo)準(zhǔn)微孔杯；20.樣品過濾裝置；21.套接件；211.隔梁；212.間隔空間；22.樣品濾杯；220.斜環(huán)面；221.杯腔；222.底面；223.滴液管；23.結(jié)合膜；231.樣品濾膜；232.標(biāo)記物膜；24.卡環(huán)；30.反光體；31.球缺；32.圓錐；33.圓臺(tái)；34.棱錐；35.棱臺(tái)；36.四面體。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。
[0029]實(shí)施例一(微孔杯底面一體成型一球缺作為反光體)。
[0030]如圖1?圖5所示的一種發(fā)光免疫檢測(cè)用集成試劑管，包括一可預(yù)先固相化的微孔杯10和一用于過濾待測(cè)物液體的樣品過濾裝置20。
[0031]如圖1所示，本發(fā)明的微孔杯10的微孔孔腔由上部一圓通孔11和下部一具有增加向上投照和反射聚光面積的側(cè)環(huán)壁121的杯孔12連接構(gòu)成，本發(fā)明的杯孔為倒圓臺(tái)孔杯孔12，杯孔12的底面122上凸出地設(shè)置有增加向上投照和反射聚光面積的反光體30，一球缺31作為反光體(30 —體成型固定在杯孔12的底面122上，該球缺31可把光線反射到杯孔12的側(cè)環(huán)面121上；本發(fā)明的杯孔12側(cè)環(huán)壁121與待測(cè)物檢測(cè)液的固液反應(yīng)界面增大，以利于免疫反應(yīng)、發(fā)光反應(yīng)或酶催化反應(yīng)充分進(jìn)行，反應(yīng)達(dá)到平衡的時(shí)間大大縮短，從而提高檢測(cè)靈敏度，提高檢測(cè)效率；杯孔12側(cè)環(huán)壁121與檢測(cè)液的固液反應(yīng)界面的斜面結(jié)構(gòu)可使產(chǎn)生的發(fā)光光線有效匯聚，使檢測(cè)儀器光電倍增管(PMT)探頭接收到到更多的固液界面的光信號(hào)，以提高檢測(cè)靈敏度。
[0032]如圖1、圖2、圖4和圖5所示，本發(fā)明的樣品過濾裝置20包括一與微孔杯10杯口拆裝配合的套接件21，一固定在套接件21上的塑料制樣品濾杯22懸置在