測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種分析方法，具體地說(shuō)，是固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校 正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子，屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 鉤吻（Gelsemium elegans)又名野葛、胡蔓藤、斷腸草，是馬錢(qián)科、鉤吻屬植物胡蔓 藤，多年生常綠藤本植物。鉤吻是一種重要的中藥藥材，含有鉤吻堿、鉤吻堿子等多種生物 堿。有破積拔毒、祛瘀止痛、殺蟲(chóng)止癢；鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜；抗炎、散瞳、抗腫瘤的功效，主要用于醫(yī) 治疥癩、濕瘆、瘰疬、癰腫、疔瘡、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、神經(jīng)痛等病癥 2]。鉤吻主要分布于浙 江、福建、湖南、廣東、廣西、貴州、云南等省。同時(shí)鉤吻的毒性很大，被認(rèn)為是世界上最毒的 植物之一，近年來(lái)，兩廣地區(qū)時(shí)會(huì)發(fā)生因誤食鉤吻而中毒致死的事件，呈逐年攀升趨勢(shì)，因 此，研宄用于鉤吻植物鑒定和司法鑒定的分析方法是有其必要性。鉤吻的分析方法目前有 快速試劑檢測(cè)法，液液萃取-薄層鑒別法（TLC)和超聲提取氣質(zhì)聯(lián)用法，但其分析方法耗時(shí) 費(fèi)力，純化效果和分析的靈敏度不夠理想，為分析工作帶來(lái)一定的難度。
[0003] 固相萃?。⊿PE)是對(duì)樣品富集的一種有效方法，具有很高的選擇性，被廣泛應(yīng)用 于藥物、生物、食品等樣品的分析。
[0004] 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，能對(duì)汽化后的目標(biāo)物進(jìn)行分離，并獲得其質(zhì)譜譜圖，起到 一定的定性作用。
[0005] 同位素峰型校正檢索技術(shù)能通過(guò)已知的校正物質(zhì)，對(duì)未知物的精確分子質(zhì)量和同 位素峰形進(jìn)行校正匹配，在低分辨率質(zhì)譜上實(shí)現(xiàn)對(duì)分子式的識(shí)別。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供建立固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用并結(jié)合同位素峰形 檢索技術(shù)（SPE-GC/MS-CLIPS)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子。
[0007] 本發(fā)明提供的的技術(shù)方案是這樣的：
[0008] -種測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位 素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子，依次包括下述步驟：
[0009] 1)制備供試液
[0010] 11)稱(chēng)取粉碎后樣品2g，放入150mL錐形瓶中，加入5mL12%碳酸和5mL2%乙酸， 超聲提取12min，過(guò)濾；
[0011] 12)凈化依次用5mL環(huán)己醇和2mL甲醇活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上 柱，再用2mL甲醇和5mL環(huán)己醇淋洗固相萃取柱，抽干，用12mL3%氨化環(huán)己醇溶液洗脫，收 集洗脫液，洗脫液于30°C下吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液；
[0012] 2)測(cè)定
[0013] 將步驟1)制備的供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時(shí)間分別 是 15min 和 17min ;
[0014] 3)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果
[0015] 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)中鉤吻堿匹配度為93. 8%，鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與 文獻(xiàn)中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似；
[0016] 4)同位素峰形校正檢索技術(shù)識(shí)別目標(biāo)物的精確分子質(zhì)量
[0017] 先選取全氟三丁胺的已知離子生成校正函數(shù)，再利用該校正函數(shù)校正目標(biāo)物精 確分子質(zhì)量和同位素峰形，從而獲得其分子式，保留時(shí)間為15min的目標(biāo)物分子式檢索首 位為C 2tlH22N2O,與鉤吻堿子的分子式一致；保留時(shí)間為17min的目標(biāo)物分子式檢索首位為 C2tlH22N2O2，與鉤吻堿的分子式一致。
[0018] 進(jìn)一步的，上述的測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，所述的色譜條件為：色 譜柱：HP-5MS 0. 25_X40mX0. 25 μπι石英毛細(xì)管柱；載氣：高純He，流速：1. 5mL .rnirT1,程 序升溫：初始溫度為160°C，保持3min，然后12°C · HiirT1升至200°C，保持5min，進(jìn)樣口溫 度：200°C。分流進(jìn)樣，分流比為30:1，進(jìn)樣量為l.OyL。
[0019] 進(jìn)一步的，上述的測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，所述的質(zhì)譜條件為：離 子源為電子轟擊源70ev ;離子源溫度230°C，接口溫度200°C，四級(jí)桿溫度160°C，質(zhì)量范圍 m/z 30~350,采樣模式：原始掃描。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對(duì)質(zhì)譜進(jìn)行校正。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，Masswork?利用CLIPS技術(shù)可同時(shí)得到鉤吻堿子和鉤吻堿的精 確相對(duì)質(zhì)量數(shù)和同位素峰形，在低分辨率的單四極桿質(zhì)譜儀上實(shí)現(xiàn)了對(duì)精確質(zhì)量數(shù)的測(cè) 定，其質(zhì)量精度已經(jīng)接近了普通的高分辨質(zhì)譜，與固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合所得到的質(zhì)譜 譜圖，可相互印證確證結(jié)果。為鉤吻的植物鑒定和鉤吻中毒司法鑒定工作提供了有力的支 持。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任 何人在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改仍在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0024] GC7890A/5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品），配有NIST 08質(zhì)譜解析軟 件；Masswork?質(zhì)譜解析軟件（美國(guó)Cerno BioScience公司產(chǎn)品）；LC1290/QT0F6550液相 色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品）；超聲波清洗器。
[0025] 鉤吻生藥采自梧州市郊外，經(jīng)梧州食品藥品檢驗(yàn)所鑒定為馬錢(qián)科萌蔓藤植物；PCX 固相萃取小柱（天津博納艾杰爾科技有限公司）；丙酮（HPLC級(jí)，美國(guó)Fisher公司），其他 試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。
[0026] 2實(shí)驗(yàn)部分
[0027] 2. 1色譜條件色譜柱：HP-5MS 0. 25_X40mX0. 25μπι石英毛細(xì)管柱；載氣：高 純He，流速：1. 5mL · min-1，程序升溫：初始溫度為160°C，保持3min，然后12°C · min-1升至 200°C，保持5min，進(jìn)樣口溫度：200°C。分流進(jìn)樣，分流比為30:1，進(jìn)樣量為1.0 μ L。
[0028] 2. 2質(zhì)譜條件離子源為電子轟擊源（EI) 70ev ;離子源溫度200°C，接口溫度200°C， 四級(jí)桿溫度160°C，質(zhì)量范圍m/z 30~350,采樣模式：原始掃描。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為 外標(biāo)對(duì)質(zhì)譜進(jìn)行校正。
[0029] 2. 3供試液的制備
[0030] 2. 3. 1提取稱(chēng)取粉碎后樣品2g，放入150mL錐形瓶中，加入5mL12%碳酸和5mL 2%乙酸，超聲提取12min，過(guò)濾。
[0031] 2. 3. 2凈化依次用5mL環(huán)己醇和2mL甲醇活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液 上柱，再用2mL甲醇和5mL環(huán)己醇淋洗固相萃取柱，抽干，用12mL3%氨化環(huán)己醇溶液洗脫， 收集洗脫液，洗脫液于30°C下吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液。
[0032] 2. 6測(cè)定結(jié)果
[0033] 供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時(shí)間分別是15min和17min。
[0034] 2. 5與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果
[0035] 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)中鉤吻堿（Gelsemine)匹配度為93. 8%，結(jié)果見(jiàn)表1。 而因 NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)中未收載鉤吻堿子該物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)譜圖，故鉤吻堿子未能與NIST 08 標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)匹配結(jié)果。但鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與文獻(xiàn)中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似。
[0036] 表1鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)的匹配信息
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，其特征在于，依次包括下述步驟： 1) 制備供試液 11) 稱(chēng)取粉碎后樣品2g，放入150mL錐形瓶中，加入5mL12%碳酸和5mL2%乙酸，超聲 提取12min，過(guò)濾； 12) 凈化依次用5mL環(huán)己醇和2mL甲醇活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上柱， 再用2mL甲醇和5mL環(huán)己醇淋洗固相萃取柱，抽干，用12mL3%氨化環(huán)己醇溶液洗脫，收集洗 脫液，洗脫液于30°C下吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液； 2) 測(cè)定 將步驟1)制備的供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時(shí)間分別是 15min 和 17min ; 3) 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)中鉤吻堿匹配度為93. 8%，鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與文獻(xiàn) 中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似； 4) 同位素峰形校正檢索技術(shù)識(shí)別目標(biāo)物的精確分子質(zhì)量 先選取全氟三丁胺的已知離子生成校正函數(shù)，再利用該校正函數(shù)校正目標(biāo)物精確分 子質(zhì)量和同位素峰形，從而獲得其分子式，保留時(shí)間為15min的目標(biāo)物分子式檢索首位 為C2tlH22N2O,與鉤吻堿子的分子式一致；保留時(shí)間為17min的目標(biāo)物分子式檢索首位為 C2tlH22N2O2，與鉤吻堿的分子式一致。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，其特征在于，所述 的色譜條件為：色譜柱：HP-5MS 0. 25mmX40mX0. 25μπι石英毛細(xì)管柱；載氣：高純He，流 速：1. 5mL 程序升溫：初始溫度為160°C，保持3min，然后12°C ^mirT1升至200°C，保 持5min，進(jìn)樣口溫度：200°C。分流進(jìn)樣，分流比為30:1，進(jìn)樣量為1.0 μ L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，其特征在于，所述 的質(zhì)譜條件為：離子源為電子轟擊源70ev ;離子源溫度200°C，接口溫度200°C，四級(jí)桿溫度 160°C，質(zhì)量范圍m/z 30~350,采樣模式：原始掃描，以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對(duì)質(zhì)譜進(jìn) 行校正。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種測(cè)定鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法；旨在提供建立固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用并結(jié)合同位素峰形檢索技術(shù)(SPE-GC/MS-CLIPS)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子；其技術(shù)方案：采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子；屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。
【IPC分類(lèi)】G01N30-88
【公開(kāi)號(hào)】CN104833752
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510238886
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 羅達(dá)龍, 劉慧妍
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月12日