一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，禽白血病(ALV)的廣泛發(fā)生與流行，給我國養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。禽白血病的危害，主要表現(xiàn)為感染雞群出現(xiàn)腫瘤病及慢性消耗性死亡、生長發(fā)育不良、生產(chǎn)性能下降和免疫抑制等。目前，禽白血病尚無商品化疫苗，也未見有特效治療藥物，控制禽白血病的主要措施是對現(xiàn)有的種雞群進(jìn)行檢測、凈化，及時(shí)淘汰陽性雞?，F(xiàn)階段，禽白血病病毒檢測方法主要有抗原、抗體ELISA、免疫熒光、PCR、斑點(diǎn)雜交和病毒分離等。禽白血病的檢測是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，影響因素較多，其中檢測樣品的前處理是個(gè)重要環(huán)節(jié)。檢測樣品的前處理其中心宗旨是充分釋放寄生在機(jī)體細(xì)胞中的病毒，以提尚檢測的靈敏性和準(zhǔn)確性。檢測的樣品主要包括包括肛拭子、蛋清、外周血和病變組織等，國內(nèi)現(xiàn)有的禽白血病檢測樣品前處理方法很難適應(yīng)當(dāng)前高通量、快速檢測技術(shù)要求。_20°C凍融3次，至少需要40分鐘，這對于大批量樣品的快速檢測帶來了時(shí)間上的滯后，特別是I日齡的雛雞，肛拭子要求在24小時(shí)一36小時(shí)內(nèi)完成檢測，給實(shí)際操作進(jìn)度造成了很大困難；另外，_80°C條件下的凍融，需要價(jià)格昂貴的超低溫冰箱或冰柜，而且實(shí)際運(yùn)行成本也很高，這對于國內(nèi)許多雞場來說，僅為了禽白血病檢測配備好幾萬元的硬件設(shè)施，難以切合實(shí)際。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，采用了該方法后不僅大大縮短了檢測時(shí)間，而且還提高了檢測的準(zhǔn)確性。
[0004]本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，它包括以下步驟:步驟一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；步驟二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；步驟三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將密封箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置1-3分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；步驟四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36-38?水浴鍋回溫3-5分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測。
[0005]所述的密封箱為泡沫箱。本發(fā)明步驟三中密封后靜置的時(shí)間為I分鐘。本發(fā)明步驟三中密封后靜置的時(shí)間為2分鐘。本發(fā)明步驟三中密封后靜置的時(shí)間為3分鐘。本發(fā)明步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36°C水浴鍋回溫3分鐘。本發(fā)明步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入37°C水浴鍋回溫4分鐘。本發(fā)明步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入38°C水浴鍋回溫5分鐘。
[0006]本發(fā)明具有以下有益效果:采用了以上技術(shù)方案后，本發(fā)明的技術(shù)方案為:首先將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；其次將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；等注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將密封箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置1-3分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36-38?水浴鍋回溫3-5分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測，這種處理方法用液氮來替代超低溫冰箱或冰柜的超低溫制冷、凍結(jié)樣品環(huán)境，用適度大小、密封的泡沫箱盛裝液氮來凍融檢測樣品，不但操作簡單，只需提供日用的液氮保存和水浴回溫條件，成本低，而且每批次樣品可縮時(shí)30分鐘即可滿足后續(xù)檢測手段能準(zhǔn)確、高效地捕獲到禽白血病病毒，科學(xué)性和實(shí)用性較強(qiáng)，不僅大大縮短了樣品檢測前處理時(shí)間，而且實(shí)際可操作性較強(qiáng)，特別適合在實(shí)驗(yàn)室檢測條件一般的種雞場應(yīng)用推廣。
【附圖說明】
[0007]圖1為本發(fā)明實(shí)施例二的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0009]實(shí)施例一，本發(fā)明提供了一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，它包括以下步驟:步驟一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；步驟二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，密封箱為泡沫箱，泡沫箱為大小適中，密封性能好的泡沫箱，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；步驟三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將泡沫箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置I分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；步驟四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36°C水浴鍋回溫3分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測。
[0010]在圖1中，實(shí)施例二，本發(fā)明提供了一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，它包括以下步驟:步驟一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；步驟二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，密封箱為泡沫箱，泡沫箱為大小適中，密封性能好的泡沫箱，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；步驟三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將泡沫箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置2分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；步驟四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入37°C水浴鍋回溫4分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測。
[0011]實(shí)施例三，本發(fā)明提供了一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，它包括以下步驟:步驟一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；步驟二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，密封箱為泡沫箱，泡沫箱為大小適中，密封性能好的泡沫箱，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；步驟三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將泡沫箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置3分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；步驟四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入38°C水浴鍋回溫5分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，它包括以下步驟: 步驟一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好； 步驟二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)； 步驟三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將密封箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置1-3分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品； 步驟四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36-38?水浴鍋回溫3-5分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在離心速度為每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，這樣就可以將檢測樣品用于檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是所述的密封箱為泡沫箱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟三中密封后靜置的時(shí)間為I分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟三中密封后靜置的時(shí)間為2分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟三中密封后靜置的時(shí)間為3分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36°C水浴鍋回溫3分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入37°C水浴鍋回溫4分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，其特征是步驟四中將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入38°C水浴鍋回溫5分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明公開了禽白血病檢測樣品前處理的改進(jìn)方法，一，將備檢的肛拭子樣品、蛋清樣品或細(xì)胞病毒分離培養(yǎng)物樣品放入容器中并進(jìn)行標(biāo)記，并將放入檢測樣品的容器在指形管架上排好；二，將裝有容器的指形管架放入密封箱內(nèi)，然后將充滿的液氮罐快速向密封箱內(nèi)注入液氮，注入液氮的量以溢滿指形管架為準(zhǔn)；三，注氮作業(yè)結(jié)束后，迅速將密封箱的箱蓋蓋上并用重物壓在箱蓋上進(jìn)行密封，然后靜置1-3分鐘后，掀開箱蓋既可以看到經(jīng)過液氮徹底凍結(jié)的檢測樣品；四，將凍結(jié)后的檢測樣品迅速拿出后放入36-38℃水浴鍋回溫3-5分鐘，最后將回溫后的檢測樣品通過離心機(jī)在離心速度為每分鐘1000轉(zhuǎn)的條件下離心30秒即可，從而可以將檢測樣品用于檢測。
【IPC分類】G01N1-28
【公開號(hào)】CN104792586
【申請?zhí)枴緾N201410432812
【發(fā)明人】范建華, 俞燕, 韋玉勇, 何友義, 高明燕, 徐步
【申請人】范建華, 江蘇省家禽科學(xué)研究所
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2014年8月29日