膠乳凝集抑制免疫測(cè)定的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及在膠乳池度免疫測(cè)定（latex turbidimetric immunoassay)中避免 由血液樣品中的某種組分引起的非特異反應(yīng)的方法和在所述方法中使用的試劑（試藥， reagent)〇
【背景技術(shù)】
[0002] 膠乳濁度免疫測(cè)定（下文也稱(chēng)為L(zhǎng)TIA)是通過(guò)使用抗原或抗體被固定至其的膠乳 粒子（抗原或抗體固定化膠乳粒子（antigen-or antibody-immobilized latex particle， 固定抗原或抗體的膠乳粒子））來(lái)測(cè)量測(cè)試物質(zhì)（被分析物（analyte))的方法，并且被廣 泛用于臨床檢查領(lǐng)域。通過(guò)LTIA測(cè)量作為被分析物的抗原（被分析物抗原）的方法大體上 被分類(lèi)為通過(guò)抗被分析物抗體固定化膠乳粒子和被分析物抗原之間的反應(yīng)而形成夾心型 免疫復(fù)合物，從而從與免疫復(fù)合物的形成相關(guān)的膠乳粒子的凝集水平來(lái)測(cè)量被分析物（抗 原）的方法（下文也稱(chēng)為夾心LTIA)，和引起抗原固定化膠乳粒子和測(cè)試樣品中的抗原（被 分析物）彼此競(jìng)爭(zhēng)以使免疫復(fù)合物的形成在所述膠乳粒子和抗體之間被抑制，從而從與免 疫復(fù)合物的形成的抑制相關(guān)的膠乳粒子的凝集抑制水平來(lái)測(cè)量被分析物（抗原）的方法 (下文也稱(chēng)為凝集抑制LTIA)。
[0003] 在LTIA中，常見(jiàn)的是，即使被分析物不存在于測(cè)試樣品如血清中，但由于測(cè)試樣 品中的某種組分所致，不應(yīng)該發(fā)生的抗原或抗體固定化膠乳粒子的凝集確實(shí)發(fā)生了，相反， 應(yīng)該發(fā)生的凝集沒(méi)有發(fā)生也是常見(jiàn)的。這被稱(chēng)為非特異反應(yīng)并且已知引起多種測(cè)量誤差。
[0004] 用于避免非特異反應(yīng)的一種已知方法是將多種物質(zhì)加入到反應(yīng)體系的技術(shù)。
[0005] 專(zhuān)利文件1描述了這樣的一種方法，其中將無(wú)機(jī)硼化合物與緩沖體系聯(lián)合加入樣 品溶液，作為用于在夾心LTIA中用于去除非特異濁度（與非特異凝集同義）的方法。然 而，該方法是去除使用抗體固定化膠乳粒子的測(cè)定中不應(yīng)該發(fā)生的凝集發(fā)生的方法并且不 是能夠處理沒(méi)有在凝集抑制LTIA中應(yīng)該發(fā)生的凝集的方法。
[0006] 在通過(guò)凝集抑制LTIA測(cè)量血液樣品的情況下，由于血液樣品中的某種組分的作 用，即使該血液樣品不含有被分析物，也僅在一些情況下獲得比在通過(guò)使用不含有血液組 分的緩沖溶液作為測(cè)試樣品進(jìn)行測(cè)量時(shí)獲得的凝集程度更低的凝集程度。備選地，在一些 情況下，凝集的程度（吸光度）在用緩沖溶液和用含有血液組分的緩沖溶液稀釋用于測(cè)試 樣品中的被分析物的濃度較準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（下文也稱(chēng)為濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）的情況之間 不一致和不相同。然而，如上所述，甚至在目前，尚未確立用于避免破壞在凝集抑制LTIA中 應(yīng)該發(fā)生的凝集的非特異反應(yīng)的方法，并且需要開(kāi)發(fā)新的方法。
[0007] 引用列表
[0008] 專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0009] 專(zhuān)利文件1 :日本未審公開(kāi)的專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)64-044855
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 技術(shù)問(wèn)題
[0012] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種能夠避免破壞在凝集抑制LTIA中應(yīng)該發(fā)生的凝集 的非特異反應(yīng)的方法。
[0013] 解決問(wèn)題的方案
[0014] 作為深入研宄以解決凝集抑制LTIA中的問(wèn)題的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，通 過(guò)向用于稀釋濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的緩沖液中初始加入一種或多種用于避免非特異反應(yīng) 的化合物（避免非特異反應(yīng)化合物），所述化合物選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物 (下文也稱(chēng)為POE-POP嵌段共聚物）、聚氧乙烯烷基醚（下文也稱(chēng)為POE烷基醚）、聚氧乙烯 脂肪酸酯（下文也稱(chēng)為POE脂肪酸酯）和多價(jià)季胺聚合物化合物組成的組，可以降低通過(guò) 對(duì)本身作為測(cè)試樣品的緩沖液進(jìn)行測(cè)量獲得的凝集程度和通過(guò)對(duì)不含有被分析物的血液 樣品進(jìn)行測(cè)量獲得的凝集程度之間的差異，從而完成本發(fā)明。
[0015] 本發(fā)明具有以下構(gòu)成。
[0016] <1> 一種避免膠乳凝集抑制測(cè)試（latex agglutination inhibition test)中的 非特異反應(yīng)的方法，所述方法包括在一種或多種選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、 聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價(jià)季胺聚合物化合物組成的組中的化合物存在下 進(jìn)行膠乳凝集抑制測(cè)定。
[0017] 〈2>根據(jù)〈1>所述的方法，其中所述非特異反應(yīng)是破壞當(dāng)測(cè)試樣品中不存在被分 析物時(shí)應(yīng)該發(fā)生的凝集的非特異反應(yīng)。
[0018] 〈3>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物由式 (I)表示：
[0019] HO (C2H4O) a- (C3H6O) b- (C2H4O) CH (I)
[0020] (其中a、b和c表示任意整數(shù)并且a+c被確定為表示具有4至200個(gè)單元的平均 聚合度的環(huán)氧乙烷，而b被確定為表示具有5至100個(gè)單元的平均聚合度的環(huán)氧丙烷）。
[0021] 〈4>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯烷基醚由式（II)表示：
[0022] R1O(C2H4O)nH (II)
[0023] (其中Rl表示碳數(shù)為8至20的烷基基團(tuán)（所述烷基基團(tuán)可以是伯或仲烷基并且 可以在所述烷基基團(tuán)中具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵）并且η表示7至40的任意整數(shù)）。
[0024] 〈5>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯脂肪酸酯由式（III)表示：
[0025] R2COO (C2H4O)nR3 (III)
[0026] (其中R2表示碳數(shù)為16至18的烷基基團(tuán)（所述烷基基團(tuán)可以具有一個(gè)或多個(gè)雙 鍵）并且η表示170至180的任意整數(shù)，而R 3表示氫原子或R 2COO基團(tuán)）。
[0027] 〈6>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述多價(jià)季胺聚合物化合物是聚凝胺 (polybrene，（商）1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物）（CAS號(hào)：CB1327317)。
[0028] 〈7> -種用于膠乳凝集抑制測(cè)試的試劑（reagent，試藥），其中一種或多種選自由 聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價(jià)季胺聚合物 化合物組成的組中的化合物包含在以下（1)至（4)中的任意一種或多種中：
[0029] (1)濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（concentration calibration-standard substance)，
[0030] (2)含有抗被分析物抗體的溶液，
[0031] (3)含有抗原化膠乳粒子（antigen-immobilized latex particle)的溶液，和
[0032] (4)用于溶解或稀釋所述濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溶液。
[0033] 〈8>根據(jù)〈7>所述的試劑，其用于測(cè)量人血液樣品中的替考拉寧（teicoplanin)。
[0034] 〈9> 一種用于在膠乳凝集抑制測(cè)試中避免非特異反應(yīng)的化學(xué)劑（agent，化學(xué)試 劑），所述化學(xué)劑包含一種或多種選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基 醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價(jià)季胺聚合物化合物組成的組中的化合物作為活性成分。
[0035] 發(fā)明的有益效果
[0036] 本發(fā)明提供一種避免破壞在凝集抑制LTIA中應(yīng)該發(fā)生的凝集的非特異反應(yīng)的方 法。本發(fā)明使得能夠通過(guò)凝集抑制LTIA精確地測(cè)量血液樣品中的被分析物。
[0037] 附圖簡(jiǎn)述
[0038] [圖1]圖1示出了當(dāng)濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通過(guò)不含有人血清組分的緩沖液稀釋時(shí) 的較準(zhǔn)曲線（X)、當(dāng)添加有被分析物的人血清通過(guò)不含有人血清組分的緩沖液稀釋時(shí)的較 準(zhǔn)曲線（〇）和當(dāng)添加有被分析物的人血清通過(guò)沒(méi)有添加被分析物的人血清稀釋時(shí)的較準(zhǔn) 曲線（▲)。
[0039] [圖2]圖2是對(duì)含有本發(fā)明的避免非特異反應(yīng)化合物的濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)-稀 釋溶液的組成的研宄結(jié)果的示意圖。
[0040] [圖3]圖3示出了當(dāng)濃度較準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)