本發(fā)明涉及食品質(zhì)量管理，具體涉及一種基于膠體金免疫層析技術(shù)的蜜餞中二氧化硫的快檢方法和試劑盒。

背景技術(shù)：

1、二氧化硫（含亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、低亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽，檢測含量時(shí)均以二氧化硫計(jì)）作為食品添加劑、加工助劑，可用于指定的食品生產(chǎn)，因其對人體有危害性，adi值為0-0.7mg/kg?bw/day（毫克每公斤體重每天），故國標(biāo)中同時(shí)也規(guī)定了指定食品的最大允許殘留量。

2、現(xiàn)有的二氧化硫的測定方法主要有分光光度法、蒸餾滴定法、色譜法，其中分光光度法需要配備分光光度計(jì)，檢測過程比較繁瑣；蒸餾滴定法至少需要2h以上的時(shí)間，同時(shí)也需要配備蒸餾儀等設(shè)備，不能滿足快速檢測的需求；色譜法的色譜儀價(jià)格高昂，對檢測人員要求較高，也不能滿足快速檢測的需求?，F(xiàn)階段食品安全快速檢測領(lǐng)域里，主要有比色法和免疫層析膠體金快速檢測法，而到目前為止，食品中二氧化硫的快速檢測只應(yīng)用了比色法，通過目視比色或快檢儀器（應(yīng)用分光光度法原理）判讀。然而比色法存在明顯的缺點(diǎn)：（1）樣本液必須澄清透明，渾濁的液體對結(jié)果影響很大；而處理的方法如過濾、離心、沉降均不能滿足時(shí)效要求或快速檢測場合的條件。（2）不同種類的食品有其本身不同的顏色，其樣本液往往帶有本底色，本底色對結(jié)果的判讀有嚴(yán)重的干擾；而本底色的去除難度大、處理時(shí)間長，有些情況下根本無法去除，不能滿足時(shí)效或快速檢測場合的條件。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、（一）要解決的技術(shù)問題

2、鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺點(diǎn)、不足，本發(fā)明提供一種基于膠體金免疫層析技術(shù)的蜜餞中二氧化硫的快檢方法和試劑盒，其解決了目前食品中二氧化硫的快速檢測使用的比色法容易受到樣本液澄清透明程度和本底色影響、樣本處理方法不能滿足時(shí)效要求或快速檢測場合的條件等技術(shù)問題。

3、（二）技術(shù)方案

4、第一方面，本發(fā)明提供一種基于膠體金免疫層析技術(shù)的蜜餞中二氧化硫的快檢方法，包括如下步驟：

5、s1、制備樣品提取液

6、稱定蜜餞樣品，將蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合后進(jìn)行均質(zhì)化處理；若蜜餞樣品含核則先去核之后再與水和氫氧化鈉或其溶液混合后進(jìn)行均質(zhì)化處理，且以去核后的蜜餞為稱定的樣品質(zhì)量；

7、均質(zhì)化處理結(jié)束后，靜置，取靜置上清液置于≥4000rpm轉(zhuǎn)速下離心，得到離心上清液，所述離心上清液為樣品提取液；

8、s2、配制待測液

9、量取已知體積的樣品提取液，用磷酸緩沖液將樣品提取液的ph調(diào)節(jié)至6.0-7.0，然后加入孔雀石綠試劑，使反應(yīng)體系中孔雀石綠的濃度為30ppb，反應(yīng)4-8min后，得到待測液；

10、以蜜餞樣品中so2的限量值為假定含量，通過s1制備樣品提取液和配制待測液的步驟，使待測液中so2的假定含量最終被稀釋成0.01mg/ml；

11、s3、檢測

12、在室溫15-30℃下，取待測液滴加到孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡的加樣孔，8-10min后進(jìn)行結(jié)果判讀；判讀方式為：

13、若t線顯色比c線深或一樣深，表示孔雀石綠的濃度低于檢測限，則表示蜜餞樣品中so2超過限量值；

14、若t線比c線淺或者t線不顯色，表示孔雀石綠的濃度高于檢測限，則表示蜜餞樣品中so2未到限量值。

15、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s1中，當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為100mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成5ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理；

16、當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為200mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成10ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理；

17、當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為250mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成12.5ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理；

18、當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為300mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成15ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理；

19、當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為350mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成17.5ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理；

20、當(dāng)蜜餞樣品中so2的限量值為500mg/kg時(shí)，按照每1g蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合成25ml的溶液進(jìn)行均質(zhì)化處理。

21、本技術(shù)中，限量值可以是該蜜餞產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)限定的限量值，也可是生產(chǎn)企業(yè)自行設(shè)定的內(nèi)控值，一般內(nèi)控值低于國家標(biāo)準(zhǔn)值限定的限量值，以實(shí)現(xiàn)更好的質(zhì)量控制。

22、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s1中，使用的氫氧化鈉溶液為質(zhì)量濃度8%的氫氧化鈉溶液。

23、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s1中，蒸餾水以ml為單位的體積數(shù)=以g為單位的蜜餞樣品重量數(shù)×10-1。

24、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s1中，將蜜餞樣品與水和氫氧化鈉或其溶液混合后，在均質(zhì)機(jī)中均質(zhì)化處理1min，靜置10min，產(chǎn)生靜置上清液，取1.5ml的靜置上清液于2ml的離心管中，在4000rpm-8000rpm的轉(zhuǎn)速下離心4-5分鐘，得到的離心上清液即為樣品提取液。

25、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s2中，量取的樣品提取液的體積、磷酸緩沖液的體積、孔雀石綠試劑的體積為5:4：1；待測液總體積為1ml。

26、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s2中，磷酸鹽緩沖液由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉溶于水中制得，其ph為6.5-7.0，優(yōu)選為6.8；孔雀石綠試劑中孔雀石綠（堿性藍(lán)，mg）的濃度為300ppb。

27、根據(jù)本發(fā)明的較佳實(shí)施例，s3中，取待測液100-150μl到金標(biāo)微孔中，吹打溶解后反應(yīng)2min，全部滴加到孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡的加樣孔中，8-10分鐘后判讀結(jié)果。

28、第二方面，本發(fā)明提供一種基于膠體金免疫層析技術(shù)的蜜餞中二氧化硫的快檢試劑盒；其包括：氫氧化鈉或其溶液、去離子水、磷酸緩沖液、孔雀石綠試劑和孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡。

29、其中，所述孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡為市售產(chǎn)品，例如可購自美成（湖州）生物科技有限公司。

30、（三）有益效果

31、二氧化硫作為小分子的無機(jī)物質(zhì)，沒有與其特異性結(jié)合的抗原抗體，本發(fā)明在待測液中添加mg（顯性孔雀石綠），利用二氧化硫與孔雀石綠發(fā)生加成反應(yīng)，且二氧化硫含量與孔雀石綠殘余量成反向關(guān)系，再利用孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡來檢測殘余的mg(加成反應(yīng)后的產(chǎn)物不能與抗原結(jié)合，所以檢測不出)，從而實(shí)現(xiàn)用免疫層析膠體金檢測法快速檢測蜜餞樣品中二氧化硫的目的。

32、果實(shí)原料類蜜餞產(chǎn)品的提取液的ph值2-5，但在制備蜜餞含二氧化硫的提取液樣品時(shí)需要使用氫氧化鈉溶液作為提取劑，最終使提取液的ph呈堿性，而孔雀石綠在堿性溶液中會生成堿性孔雀石綠（孔雀石綠膠體金檢測卡不能檢出），又考慮到二氧化硫與孔雀石綠發(fā)生加成反應(yīng)的最佳條件為ph7.0，因此本發(fā)明在制備待測液時(shí)，使用磷酸緩沖液（ph6.5-6.8）將待測液的ph調(diào)節(jié)至6.0-7.0。此外，在室溫15-30℃環(huán)境下不影響孔雀石綠膠體金免疫層析檢測卡對結(jié)果的正確判讀。

33、本發(fā)明所提供的基于膠體金免疫層析技術(shù)的蜜餞中二氧化硫的快檢方法，在制備待測液時(shí)，即使針對不同類型的蜜餞產(chǎn)品和二氧化硫限量值，均采用固定體積的預(yù)先配好的孔雀石綠試劑（固定濃度）和磷酸緩沖液，這大大簡化了操作，減少檢測人員的工作量，有利于實(shí)現(xiàn)完全的自動化檢測，具有樣品處理過程簡單快速、處理?xiàng)l件溫和、在室溫下可準(zhǔn)確檢測的優(yōu)點(diǎn)，可作為蜜餞類產(chǎn)品中二氧化硫含量是否合規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)化快速檢測方法。