本發(fā)明涉及生物檢測，尤其涉及一種用于小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒及系統(tǒng)。

背景技術(shù)：

1、精準(zhǔn)的組織病理分型和分子分型在肺癌患者治療方案的選擇和預(yù)后判斷中發(fā)揮著重要的作用，部分肺癌患者就診時已處于進展期，無法手術(shù)切除，因此小活檢標(biāo)本診斷顯得尤為重要。

2、非小細胞癌分化差，單憑形態(tài)學(xué)小活檢難以進一步分型，需要借助于免疫組織化學(xué)，盡可能將非小細胞癌區(qū)分為傾向腺癌和傾向鱗狀細胞癌。但現(xiàn)有免疫組織化分析方法在小活檢標(biāo)本中，由于取材的局限性等因素限制，組織塊小、且珍貴，在一張組織切片的玻片上只能做一種靶點的標(biāo)記，需要連續(xù)切片幾張甚至幾十張才能滿足免疫組化多靶點染色區(qū)分診斷的需求。而多重免疫熒光技術(shù)，在實現(xiàn)多重?zé)晒獾拿庖呓M化染色，可以同時對多種靶點分子進行標(biāo)記，能夠避免浪費寶貴的臨床腫瘤樣本，節(jié)省了樣本。同時還能分析在在同一張切片玻片內(nèi)各個靶點在空間上的關(guān)系。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒及系統(tǒng)。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

3、第一方面是提供一種用于小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，包括抗體組以及熒光染料組；

4、所述抗體組包括神經(jīng)內(nèi)分泌細胞及其腫瘤標(biāo)記物-synaptophysin、診斷神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的標(biāo)記物-chromogranin?a、肺腺癌標(biāo)記物-thyroid?transcription?factor-1、肺腺癌標(biāo)記物及肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤陰性-napsina、肺鱗癌標(biāo)記物-p63、肺鱗癌標(biāo)記物-p40；

5、所述熒光染料組包含六種不同的熒光染料，分別與所述抗體一一對應(yīng)。

6、進一步地，所述熒光染料組包括分別與synaptophysin、chromogranina、thyroidtranscription?factor-1、napsina、p63、p40相對應(yīng)的opal?780、opal?480、opal690、opal?620、opal?520、opal?570。

7、進一步地，一抗工作液的制備方法如下：synaptophysin按照1:5000進行稀釋，chromogranina按照1:10000進行稀釋，thyroid?transcription?factor-1按照1:3000進行稀釋，napsina按照1:4000進行稀釋，p63按照1:10000進行稀釋，p40按照1:600進行稀釋。

8、進一步地，所述熒光染料組還包括信號放大液。

9、進一步地，所述多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒還包括脫蠟劑、水化劑、滅菌去離子水、抗原修復(fù)液、抗體稀釋液、封片劑、緩沖液、dapi工作液、封閉液。

10、進一步地，所述抗原修復(fù)液為tris/edta抗原修復(fù)液，ph＝9.0；所述緩沖液為1×tbst緩沖液。

11、第二方面是提供一種小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的系統(tǒng)，包括上述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒以及與之適配的病理圖像采集分析系統(tǒng)；通過對生物樣本進行多重?zé)晒饷庖呓M化操作獲取病理圖片；所述病理圖像采集分析系統(tǒng)采集所述病理圖片的圖像，并基于下述標(biāo)志物對圖像進行分析：synaptophysin、chromogranin?a、thyroidtranscriptionfactor-1、napsina、p63、p40。

12、進一步地，進行免疫組化操作時，標(biāo)本脫蠟水化后，一抗單克隆抗體組中各抗體的抗原修復(fù)及染色輪次操作條件如下：

13、第一輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，chromogranina一抗孵育，孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，480染料孵育時間10min；

14、第二輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，napsina一抗孵育，孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，620孵育時間10min；

15、第三輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，p63一抗孵育，孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，520染料孵育時間10min；

16、第四輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，thyroid?transcription?factor-1一抗孵育，690孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，690染料孵育時間10min；

17、第五輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，p40一抗孵育，孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，570染料孵育時間10min；

18、第六輪次，修復(fù)時間15min，封閉10min，synaptophysinp一抗孵育，孵育時間45min，漂洗10min，二抗孵育hrp?10min，漂洗10min，dig孵育10min，漂洗10min，780染料孵育時間60min；漂洗10min；

19、第七輪次，dapi，10min，漂洗10min，封片。

20、本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：

21、本發(fā)明基于多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)，對肺癌多個標(biāo)記染色結(jié)果進行處理和分析，使用成像顯微鏡采集光譜圖像，利用病例圖片分析軟件對圖像進行識別，使得肺癌小組織、穿刺類型標(biāo)本能夠在一張組織切片的玻片上實現(xiàn)多重?zé)晒饷庖呓M化染色，可以同時對多種靶點分子進行標(biāo)記，能夠避免了穿刺小組織不能實現(xiàn)連續(xù)切做ihc鑒別區(qū)分的缺點，避免浪費寶貴的臨床腫瘤樣本。

技術(shù)特征：

1.一種用于小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，包括抗體組以及熒光染料組；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，所述熒光染料組包括分別與synaptophysin、chromogranina、thyroid?transcription?factor-1、napsina、p63、p40相對應(yīng)的opal?780、opal?480、opal?690、opal?620、opal?520、opal?570。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，一抗工作液的制備方法如下：synaptophysin按照1:5000進行稀釋，chromogranin?a按照1:10000進行稀釋，thyroidtranscription?factor-1按照1:3000進行稀釋，napsina按照1:4000進行稀釋，p63按照1:10000進行稀釋，p40按照1:600進行稀釋。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，所述熒光染料組還包括信號放大液。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，還包括脫蠟劑、水化劑、滅菌去離子水、抗原修復(fù)液、抗體稀釋液、封片劑、緩沖液、dapi工作液、封閉液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒，其特征在于，所述抗原修復(fù)液為tris/edta抗原修復(fù)液，ph＝9.0；所述緩沖液為1×tbst緩沖液。

7.一種小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的系統(tǒng)，其特征在于，包括如權(quán)利要求1-6任一項所述的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒以及與之適配的病理圖像采集分析系統(tǒng)；通過對生物樣本進行多重?zé)晒饷庖呓M化操作獲取病理圖片；所述病理圖像采集分析系統(tǒng)采集所述病理圖片的圖像，并基于下述標(biāo)志物對圖像進行分析：synaptophysin、chromogranina、thyroidtranscriptionfactor-1、napsina、p63、p40。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的系統(tǒng)，其特征在于，進行免疫組化操作時，標(biāo)本脫蠟水化后，一抗單克隆抗體組中各抗體的抗原修復(fù)及染色輪次操作條件如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種用于小組織鑒別腺癌和鱗狀細胞癌的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒及系統(tǒng)，該試劑盒包括抗體組以及熒光染料組；抗體組包括Synaptophysin、ChromograninA、Thyroid?Transcription?Factor?1、NapsinA、p63、p40；熒光染料組包含六種不同的熒光染料，分別與抗體一一對應(yīng)。本發(fā)明的檢測方法使得肺癌小組織、穿刺類型標(biāo)本能夠在一張組織切片的玻片上實現(xiàn)多重?zé)晒饷庖呓M化染色，可以同時對多種靶點分子進行標(biāo)記，能夠避免了穿刺小組織不能實現(xiàn)連續(xù)切做IHC鑒別區(qū)分的缺點，避免浪費寶貴的臨床腫瘤樣本。

技術(shù)研發(fā)人員：張瑞,林學(xué)妮,陳世興,程瑤
受保護的技術(shù)使用者：上海闊然開朗醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6