本發(fā)明屬于藥物分析，具體涉及一種鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法。特別是涉及鹽酸維洛沙秦中2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、維洛沙秦(viloxazine)是一種嗎啉衍生物，也是一種選擇性去甲腎上腺素再攝取抑制劑，由supernus?pharma公司研發(fā)，于2021年4月被美國(guó)食品和藥物管理局(fda)批準(zhǔn)上市，用于治療6歲及以上青少年和成人注意力缺陷多動(dòng)障礙(adhd)患者，商品名：qelbree，活性成分為鹽酸維洛沙秦，藥物制劑為緩釋膠囊。qelbree是10多年來(lái)首個(gè)用于治療兒童和青少年adhd的新型非興奮劑藥物。鹽酸維洛沙秦的結(jié)構(gòu)如下：

2、

3、甲基磺酸酯類(lèi)化合物是常見(jiàn)的基因毒性雜質(zhì)。在維洛沙秦原料藥合成過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生痕量的基因毒雜質(zhì)2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽的殘留，因此需要對(duì)2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽在鹽酸維洛沙秦中的殘留進(jìn)行控制。2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯鹽酸鹽結(jié)構(gòu)如下式a所示：

4、

5、維洛沙秦最大日劑量不超過(guò)600mg，根據(jù)基因毒雜質(zhì)限定指導(dǎo)原則中規(guī)定限度值計(jì)算，維洛沙秦原料藥中2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽可接受限度不得高于0.00025％。由于2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽在維洛沙秦中含量限度低，而主成分的濃度較大時(shí)會(huì)污染儀器或者基線的干擾，2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽與主成分結(jié)構(gòu)和性質(zhì)均相近，分離較為困難，對(duì)檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)方法的選擇性要求高，常規(guī)液相色譜法的靈敏度不能滿(mǎn)足檢測(cè)要求，而且目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道能夠滿(mǎn)足該檢測(cè)要求的方法。因此，本領(lǐng)域開(kāi)發(fā)一種能夠?qū)崿F(xiàn)鹽酸維洛沙秦中2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽的檢測(cè)方法，對(duì)鹽酸維洛沙秦的質(zhì)量控制具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明目的在于提供一種具有檢測(cè)靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等一個(gè)或多個(gè)優(yōu)點(diǎn)的鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法。該方法能夠滿(mǎn)足鹽酸維洛沙秦中2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽含量的檢測(cè)需求，有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

2、具體地，本發(fā)明提供了鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，所述基因毒雜質(zhì)為2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽，所述方法包括：

3、配制對(duì)照品溶液和供試品溶液；

4、采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行檢測(cè)；

5、其中，所述液相色譜中色譜柱選自poroshell?120ec-c18或zorbax?eclipse?plusc18；流動(dòng)相a為乙酸銨水溶液或甲酸水溶液，流動(dòng)相b為乙腈，或甲醇、乙醇、異丙醇中的一種或多種與乙腈的混合液。

6、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中所述流動(dòng)相a為1～10mmol/l的乙酸銨水溶液，優(yōu)選3～7mmol/l的乙酸銨水溶液；在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述流動(dòng)相a為0.01％～0.2％(v/v)的甲酸水溶液；進(jìn)一步優(yōu)選將所述0.01％～0.2％(v/v)的甲酸水溶液用氨水調(diào)節(jié)ph至3～5。

7、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中所述流動(dòng)相b為乙腈。

8、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中所述液相色譜采用等度洗脫，其中流動(dòng)相a和流動(dòng)相b的體積比為(70～90)：(30～10)，例如70：30、75：25、80：20、85：15、90：10及其之間的任意值，優(yōu)選(78～80)：(22～20)。

9、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中所述液相色譜采用梯度洗脫，所述梯度洗脫條件如表e7.1或表e8.1所示：

10、表e7.1:梯度洗脫條件：

11、

12、表e8.1:梯度洗脫條件：

13、

14、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中液相色譜中流動(dòng)相的流速為0.1～0.6ml/min，例如0.4ml/min、0.5ml/min、0.6ml/min及其之間的任意值；優(yōu)選0.4～0.6ml/min，更優(yōu)選為0.5ml/min；

15、進(jìn)一步優(yōu)選，進(jìn)樣量為1μl～10μl，例如1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl及其之間的任意值，優(yōu)選為3～5μl。

16、進(jìn)一步優(yōu)選，色譜柱的柱溫為20～50℃，例如23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃及其之間的任意值；優(yōu)選為37～43℃；

17、在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中液相色譜的色譜柱優(yōu)選型號(hào)為agilent?poroshell?120ec-c18的色譜柱；色譜柱規(guī)格為：柱長(zhǎng)介于100mm～200mm，色譜柱內(nèi)徑介于1mm～10mm，粒徑介于3μm～5μm，色譜柱的規(guī)格優(yōu)選為100mm×4.6mm×2.7μm。進(jìn)一步優(yōu)選，所述色譜柱選自agilent?poroshell?120ec-c18系列色譜柱，特別優(yōu)選，agilent?poroshell?120ec-c18，規(guī)格為100mm×4.6mm，填料粒徑為2.7μm的色譜柱。

18、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，所述質(zhì)譜法采用電噴霧離子源，正離子模式采集，所述基因毒性雜質(zhì)的定量離子對(duì)為100/272.06。

19、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中質(zhì)譜法中離子傳輸溫度為320～380℃，優(yōu)選350℃±50℃，噴霧電壓為3500v±100v，霧化溫度為350℃±50℃。

20、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，還包括對(duì)照品溶液和供試品溶液的配制；進(jìn)一步優(yōu)選，所述對(duì)照品溶液和供試品溶液采用包含水的稀釋劑配制，在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述對(duì)照品溶液和供試品溶液采用水作為稀釋劑配制。

21、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中對(duì)照品溶液的配制包括：取一定量的基因毒雜質(zhì)2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽(例如2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯鹽酸鹽)，精密稱(chēng)定，置量瓶中，用水稀釋配制而成；優(yōu)選先配制成對(duì)照品貯備液，然后精密量取對(duì)照品貯備液適量，置量瓶，用水逐步稀釋?zhuān)渲瞥赡繕?biāo)濃度的對(duì)照品溶液。

22、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中供試品溶液的配制包括：取鹽酸維洛沙秦適量，精密稱(chēng)定，置量瓶中，用水稀釋配制成目標(biāo)濃度的供試品溶液。

23、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中對(duì)照品溶液的濃度為0.5～10.0ng/ml，優(yōu)選0.5～7.7ng/ml，如0.5ng/ml、1ng/ml、1.5ng/ml、2ng/ml、2.5ng/ml、3ng/ml、3.5ng/ml、4ng/ml、4.5ng/ml、5ng/ml、7ng/ml、7.7ng/ml、10.0ng/ml及其之間的任意值；

24、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中所述供試品溶液的濃度為0.1～2mg/ml，例如0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml及其之間的任意值；優(yōu)選1mg/ml。

25、在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述鹽酸維洛沙秦中基因毒雜質(zhì)的檢測(cè)方法，其中基因毒雜質(zhì)2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽的含量采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

26、本發(fā)明通過(guò)選擇特定的色譜柱結(jié)合特定種類(lèi)的緩沖劑，能夠?qū)崿F(xiàn)鹽酸維洛沙秦中痕量基因毒雜質(zhì)2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽的定量檢測(cè)，且空白試劑與樣品無(wú)干擾，譜圖中的分離度、準(zhǔn)確度和靈敏度等均較好。除此之外，本發(fā)明提供的方法還克服了由于2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽酸鹽限度低，要達(dá)到所需要的檢測(cè)限需要配制高濃度的供試品溶液，然而高濃度的供試品溶液可能會(huì)面臨堵塞色譜柱，污染離子源，以及基質(zhì)效應(yīng)等問(wèn)題。

27、本發(fā)明的其他特征及優(yōu)勢(shì)效果通過(guò)隨后的實(shí)施例和附圖做進(jìn)一步的闡述和說(shuō)明。

28、術(shù)語(yǔ)定義

29、本發(fā)明意圖涵蓋所有的替代、修改和等同技術(shù)方案，它們均包括在如權(quán)利要求定義的本發(fā)明范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，許多與本文所述類(lèi)似或等同的方法和材料能夠用于實(shí)踐本發(fā)明。本發(fā)明絕不限于本文所述的方法和材料。在所結(jié)合的文獻(xiàn)、專(zhuān)利和類(lèi)似材料的一篇或多篇與本技術(shù)不同或相矛盾的情況下(包括但不限于所定義的術(shù)語(yǔ)、術(shù)語(yǔ)應(yīng)用、所描述的技術(shù)等等)，以本技術(shù)為準(zhǔn)。

30、應(yīng)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的某些特征，為清楚可見(jiàn)，在多個(gè)獨(dú)立的實(shí)施方案中進(jìn)行了描述，但也可以在單個(gè)實(shí)施例中以組合形式提供。反之，本發(fā)明的各種特征，為簡(jiǎn)潔起見(jiàn)，在單個(gè)實(shí)施方案中進(jìn)行了描述，但也可以單獨(dú)或以任意適合的子組合提供。

31、術(shù)語(yǔ)“包含”或“包括”為開(kāi)放式表達(dá)，即包括本發(fā)明所指明的內(nèi)容，但并不排除其他方面的內(nèi)容。

32、在本發(fā)明的上下文中，無(wú)論是否使用“大約”或“約”等字眼，所有在此公開(kāi)了的數(shù)字均為近似值。每一個(gè)數(shù)字的數(shù)值有可能會(huì)出現(xiàn)10％以下的差異或者本領(lǐng)域人員認(rèn)為的合理的差異，如1％、2％、3％、4％或5％的差異。本發(fā)明所述“v/v”是指體積比。

33、在本發(fā)明的上下文中，數(shù)值x±y是指數(shù)值“x-y”與數(shù)值“x+y”之間的任意值，也包括端點(diǎn)值，例如本發(fā)明中提到的“350℃±50℃”是指300℃～400℃之間的任意值，也包括端點(diǎn)值300℃和400℃。

34、本發(fā)明上下文所述的“液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用”(縮寫(xiě)：uplc-ms)是利用超高效液相色譜(縮寫(xiě)：uplc)作為質(zhì)譜(縮寫(xiě)：ms)的進(jìn)樣系統(tǒng)，使復(fù)雜的化學(xué)組分得到分離；利用質(zhì)譜作為檢測(cè)器進(jìn)行定量和定性分析的技術(shù)。

35、本發(fā)明上下文中所述的“維洛沙秦原料藥”具體包括維洛沙秦或其藥學(xué)可接受的鹽，優(yōu)選在本發(fā)明中，所述“維洛沙秦原料藥”為鹽酸維洛沙秦。

36、本發(fā)明上下文中所述的鹽酸維洛沙秦基因毒雜質(zhì)是指2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯或其鹽，其中所述2-羥甲基嗎啉-4-甲苯磺酸酯鹽酸鹽簡(jiǎn)稱(chēng)雜質(zhì)a，具有如下式a所示的結(jié)構(gòu)：

37、

38、本發(fā)明上下文所述“室溫”是指溫度為25℃±5℃。