本技術(shù)涉及小鼠腸道組織處理，具體為小鼠腸道縱切臺。

背景技術(shù)：

1、如何恰當處理小鼠腸道組織，包括快速解剖分離、及時固定等，對于后續(xù)組織切片的染色至關(guān)重要。目前常用的制備小鼠腸道組織切片的方法包括腸卷和腸段。腸卷制作的主要步驟為：將小鼠腸道沿長軸方向剪開，再將腸道沿剪開的方向卷起、纏繞成一卷，隨后包埋成組織塊。因其形態(tài)特征似瑞士卷，故該項技術(shù)又稱為“swiss?roll”。腸段反映的是全長腸道的部分隨機區(qū)域，而瑞士卷則可以在一張切片上體現(xiàn)全長腸道的所有特征，允許我們對腸道進行詳細而廣泛的檢查。該特點在腫瘤學(xué)的研究中具有重要意義。自從1937年magnus提出瑞士卷的概念（他使用的是臨床胃組織標本），而后reilly和kirsner在1965年首次將其應(yīng)用于腸道，但細節(jié)不足。1981年moolenbeek對小鼠腸卷的制作進行了第一次較為詳細的總結(jié)，而在1987年park將這一技術(shù)繼續(xù)拓展至大鼠的胃腸道、食管、生殖系統(tǒng)，以及新西蘭大白兔的大血管和氣管。近十年來斷續(xù)有文章發(fā)表改良的瑞士卷技術(shù)，來制備更好的小鼠腸道組織以供免疫組織化學(xué)或免疫組織熒光染色。

2、制備小鼠腸卷的一個關(guān)鍵步驟是將腸道組織縱向切開。目前在所有關(guān)于這一步驟的相關(guān)文獻中，實驗人員均選擇使用解剖剪剪開小鼠全長腸道。這一操作要求實驗人員具備一定的解剖經(jīng)驗和技術(shù)，否則縱向剪開的腸道組織邊緣多不齊整，甚至?xí)腥笔?，為后續(xù)的操作增加難度；

3、目前制備小鼠腸卷多使用石蠟包埋。我們將腸道組織分段后（例如小腸分三段，而大腸為一段），每段腸道組織各自制備成一塊腸卷。因此一只小鼠的全長腸道將制備出四塊腸卷，這無疑增加了樣品保存的空間負荷。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對上述技術(shù)不足，本實用新型的目的是提供小鼠腸道縱切臺；使用縱切臺代替解剖剪來縱向切開腸道組織；將一只小鼠的腸道組織分段后（小腸分三段，而大腸為一段），制備為一個腸卷冰凍組織塊。

2、為解決上述技術(shù)問題，本實用新型采用如下技術(shù)方案：

3、本實用新型提供一種小鼠腸道縱切臺，其特征在于，包括底座和蓋子，蓋子蓋在底座上；所述底座兩端各設(shè)置有一個凸起的棍架，所述棍架上等距設(shè)置有若干個凹槽，且和底座臺面上的凹槽一一對應(yīng)；所述蓋子上設(shè)置有若干個貫穿槽，相鄰兩個貫穿槽之間的蓋子部分形成刀切導(dǎo)向棱；所述刀切導(dǎo)向棱截面上部分為梯型結(jié)構(gòu)，下部分為矩形結(jié)構(gòu)。

4、本實用新型還涉及采用上述小鼠腸道縱切臺制作小鼠全長腸道冰凍瑞士卷的方法，其特征在于，包括如下步驟：

5、步驟一：小鼠腸道的取材與固定；

6、（1）采用頸椎脫臼法犧牲小鼠，剃除小鼠腹部毛發(fā)，于腹正中線處剪一個小的“v”形切口，繼續(xù)向上至胸骨、向下至恥骨剪開皮膚，延伸手術(shù)切口；

7、（2）充分暴露腹腔后，尋找胃與食管的交界處，于稍上方將其剪斷；

8、（3）以斷端為起始點，將胃腸道從腹腔中游離出來，同時剝離相關(guān)腸系膜及結(jié)締組織；在游離過程中，注意適時用冷pbs沖淋游離出腹腔的胃腸道，使其保持濕潤狀態(tài)；

9、（4）將一條完整的胃腸道游離出腹腔后，立即將其浸泡在冷pbs中；

10、（5）用解剖剪將小腸按長度均分為三段，從胃側(cè)向盲腸側(cè)，依次標記為sb1、sb2、sb3；剪去盲腸后，留下的大腸標記為lb；

11、（6）使用裝滿冷pbs的簡易沖洗管沖洗腸道內(nèi)容物；使用的簡易沖洗管的管身為10ml注射器，而管頭則是將頭皮針的針頭剪去后制作而成的；

12、（7）腸道內(nèi)容物沖洗完成后，使用小鼠腸道縱切臺進行腸道的縱切；首先將裁剪好的吸水紙a用冷pbs浸濕后，放置在底座的臺面上；然后將四根不銹鋼棒依次穿過sb1、sb2、sb3和lb的腸腔，隨后固定在臺面上并放置好蓋子；

13、（8）一手持鑷子夾穩(wěn)腸管最前端，另一手持無菌手術(shù)刀，以蓋子中間的側(cè)壁為支點，將腸道沿縱軸平整劃開；此時若腸道仍部分貼合在不銹鋼棒上，可使用裝滿冷pbs的10ml注射器沿手術(shù)刀切開方向噴灑液體，使腸道平鋪在吸水紙a上；

14、（10）取下不銹鋼棒后，用冷pbs濕潤另一張吸水紙b，將其覆蓋在切開的腸道組織上；將兩張對合完全的吸水紙沿其長軸方向卷起成一空心管狀，放入裝滿4%pfa的50ml離心管中，室溫下固定24小時；

15、（11）固定24小時后，將pfa替換為15%蔗糖溶液，進行脫水24小時；

16、（12）15%蔗糖脫水24小時后，將其替換為30%蔗糖溶液，繼續(xù)脫水24小時；

17、步驟二：制作小鼠全長腸卷的冰凍組織塊；

18、（1）30%蔗糖脫水24小時后，將吸水紙從50ml離心管中取出，以吸水紙b朝上的方向在臺面上展平；

19、（2）小心掀開吸水紙b，一手持彎鑷夾住腸道的最前端，另一手持另一把鑷子或徒手，輕輕夾住腸道的最遠端，以腸粘膜面朝內(nèi)為方向，將腸道卷起，成一管狀；隨后用30g針頭以腸道最外側(cè)端的稍內(nèi)側(cè)為入點，扎穿過整個腸卷，以防止其散開；小心松開彎鑷，使其從固定好的腸卷中抽離出來；

20、（3）小心拔出30g針頭，將四個腸卷按順序直立放置在組織包埋盒中；

21、（4）用oct完整包裹住四塊腸卷，然后將其放置在冰凍切片機的速凍臺上速凍包埋；在oct變白變硬后即可進行切片，也可保存于-80℃冰箱中備用。

22、本實用新型的有益效果在于：1、使用“小鼠腸道縱切臺”縱向切開小鼠腸道組織，操作簡單快速，腸道組織縱切效果佳，能有效縮短“腸組織離體到固定的時間”（小鼠腸道在取樣后、固定前的短暫時間窗內(nèi)會發(fā)生快速變化，間隔時間越長越不利于后續(xù)的組織染色分析）；

23、2、將一只小鼠的腸道組織制備到一個冰凍組織塊中，能有效節(jié)省樣本的儲存空間；石蠟切片雖然可室溫保存，但其染色步驟繁瑣（冰凍切片無需脫蠟等前期步驟），并且在免疫熒光染色的效果方面遜色于冰凍切片；在一張切片上染色以觀察一只小鼠的全長腸道組織的概況，允許研究人員對整個腸道進行全面而仔細的觀察，從而做出系統(tǒng)科學(xué)的組織學(xué)分析。

技術(shù)特征：

1.小鼠腸道縱切臺，其特征如下，使用時蓋子蓋在底座上；所述底座兩端各設(shè)置有一個凸起的棍架，所述棍架上等距設(shè)置有若干個凹槽，且和底座臺面上的凹槽一一對應(yīng)；所述蓋子上設(shè)置有若干個貫穿槽，相鄰兩個貫穿槽之間的蓋子部分形成刀切導(dǎo)向棱。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腸道縱切臺，其特征在于，所述刀切導(dǎo)向棱截面上部分為梯型結(jié)構(gòu)，下部分為矩形結(jié)構(gòu)。

技術(shù)總結(jié)
本技術(shù)公開了小鼠腸道縱切臺，所述小鼠腸道縱切臺包括底座和蓋子，蓋子蓋在底座上；所述底座兩端各設(shè)置有一個凸起的棍架，所述棍架上等距設(shè)置有若干個凹槽，且和底座臺面上的凹槽一一對應(yīng)；所述蓋子上設(shè)置有若干個貫穿槽，相鄰兩個貫穿槽之間的蓋子部分形成刀切導(dǎo)向棱。本技術(shù)使用小鼠腸道縱切臺縱向切開小鼠腸道組織，操作簡單快速，腸道組織縱切效果佳，能有效縮短腸組織離體到固定的時間。

技術(shù)研發(fā)人員：李寧寧,姜友恒,李長學(xué),林澤镕
受保護的技術(shù)使用者：中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院（深圳）
技術(shù)研發(fā)日：20231220
技術(shù)公布日：2025/1/9