本發(fā)明涉及一種生鮮乳新鮮度檢測的方法，具體涉及一種檢測牛奶生鮮乳新鮮度的方法。
背景技術(shù)：
鮮牛乳品質(zhì)直接或間接影響著牛奶的安全性和產(chǎn)品質(zhì)量，而新鮮榨取的牛奶溫度一般在36℃左右，隨之要及時冷卻至4℃左右，以便保持奶品質(zhì)。由于新鮮榨取的奶是最適宜微生物繁殖，如不及時冷卻，會造成微生物的大量繁殖，導(dǎo)致奶成分發(fā)生變化，奶品質(zhì)變差。因此，新鮮榨取的牛奶須迅速冷卻才能在較長時間內(nèi)保持生鮮乳的品質(zhì)。但是，低溫儲存時間也會造成乳成分的變化，影響奶品質(zhì)，其中乳清酸是嘧啶的合成的中間產(chǎn)物，其在加熱條件下是穩(wěn)定的，但在發(fā)酵酸奶中含量下降。此外，乳制品氣味同樣決定牛奶是否被消費者所接受的主要感官質(zhì)量指標之一，盡管牛奶具有高質(zhì)量的營養(yǎng),如果其氣味不佳,就會導(dǎo)致消費者對奶制品的抵制，給奶業(yè)發(fā)展造成阻力，然而在正常牛奶中三甲胺的含量低于2mg/L，不會影響牛奶的風味，但隨著牛奶新鮮度下降，三甲胺代謝濃度的變化就會影響奶的品質(zhì)。因此，開發(fā)一種檢測準確、靈敏度高的生鮮乳新鮮度檢測方法對牛乳品質(zhì)進行精準的評估具有重要意義
目前現(xiàn)有測定牛奶新鮮度的方法有感官檢查、化學(xué)檢查和細菌檢查，其中以滴定酸度法和奶滴形狀法最為常見。在滴定酸度法中，牛奶酸度在18°T以內(nèi)為新鮮牛奶，酸度大于20°T為不新鮮牛奶；而以奶滴形狀進行初步判斷時，奶滴呈球狀為新鮮奶，奶滴流散為不新鮮奶。但這些方法只能較粗略的判定奶的新鮮度，不能準確、客觀地讓消費者知情生鮮乳的新鮮度。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)在生鮮乳新鮮度判定上存在的問題，本發(fā)明提供了一種精準測定生鮮乳新鮮度的方法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種生鮮乳新鮮度檢測的方法，包括以下步驟：
(1)、將采集的牛奶在干凈的環(huán)境中分裝于無菌管中，分成若干份，在4℃冰箱中按照時間梯度增加分別保存，然后將不同時間梯度的牛奶樣品進行冷凍儲存；
(2)、牛奶樣品在室溫下解凍后經(jīng)離心機離心，除去脂肪層后收集清液，清液與冰浴的甲醇以1:2-3體積混合，渦旋混合均勻，超聲10-30s后再靜置20s，共10個循環(huán)，冰浴靜置5-20min后離心收集上清液，上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將甲醇除去，再用冷凍干燥儀冷凍干燥得到粉末樣品；
(3)、將粉末樣品溶于600μL-1mL磷酸鹽緩沖液，渦旋混勻后離心，取上清液至核磁管中，用核磁共振光譜儀檢測各個樣品的小分子代謝物；
(4)、多元變量統(tǒng)計分析小分子代謝物隨時間的變化，尋找出差異代謝物，然后繪制差異代謝物與保存時間之間的關(guān)系，其中，差異代謝物為隨著保存時間的變化而變化的小分子代謝物；
(5)、將待檢測牛奶按照步驟(1)-(3)處理后，測出差異代謝物的值，然后根據(jù)關(guān)系曲線計算代謝物的相對變化量，以此來對牛奶新鮮度進行評判。
優(yōu)選地，所述步驟(2)中解凍后離心處理條件為2500-4000×g離心15-40min；冰浴靜置后離心處理條件為10000-15000×g離心10-30min；所述步驟(3)渦旋混勻后離心處理條件為12000-15000×g離心10-30min，所述步驟(2)和步驟(3)離心均在4-6℃環(huán)境下操作。
優(yōu)選地，所述步驟(3)中磷酸鹽緩沖液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O組成，其PH為7.4。
優(yōu)選地，步驟(4)中差異代謝物為乳清酸或三甲胺。
優(yōu)選地，當牛奶中體細胞數(shù)為20萬以下時，乳清酸代謝物的含量隨著時間的增加而顯著下降，差異代謝物選擇乳清酸；當牛奶中體細胞數(shù)為100萬以上時，三甲胺代謝物的含量隨著時間的增加而顯著增加，差異代謝物選擇三甲胺。
本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的牛奶生鮮乳新鮮度檢測方法與現(xiàn)有生鮮乳新鮮度檢測技術(shù)相比，本發(fā)明能夠精準的對生鮮乳新鮮度進行測定，操作易于標準化，結(jié)果準確可靠，可為消費者精準的了解乳制品新鮮度提供知情權(quán)，對提升消費者對國產(chǎn)奶制品信心起到一定的作用。
具體實施方式
為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，下面對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1
一種生鮮乳新鮮度檢測的方法，具體步驟如下：
(1)、試驗樣品采集
選擇體細胞數(shù)為20萬以下的牛奶樣品采集后在干凈的環(huán)境中分裝于無菌管中，在4℃冰箱中按照0、36、72和144h等多個時間條件下分別保存，待用；
(2)、牛奶粉末樣品制備
將牛奶樣品在室溫下解凍，隨后在低溫(4℃)離心機2500-4000g離心15-40min，除去脂肪層，收集清液，取清液與冰浴的甲醇以1:2-3體積混合，渦旋混合均勻，超聲10-30s靜置20s，共10個循環(huán)，冰浴靜置5-20min后離心(4-6℃，10000-15000g，10-30min)收集上清液。上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將甲醇除去，再用冷凍干燥儀冷凍干燥至粉末樣品；
(3)、將粉末樣品溶于600μL-1mL磷酸鹽緩沖液(優(yōu)選地，磷酸鹽緩沖液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O組成，其PH為7.4)，渦旋混勻后離心(4-6℃，12000-15000g，10-30min)，取上清液至5mm核磁管中，用核磁共振光譜儀檢測各個樣品的小分子代謝物表達模式；
(4)、多元變量統(tǒng)計分析小分子代謝物隨生鮮乳保存時間的變化，確定差異代謝物，繪制出差異代謝物與保存時間之間的關(guān)系；
(5)、生鮮乳中乳清酸(化學(xué)位移6.19)代謝物含量隨保存時間顯著下降。與新鮮乳相比，生鮮乳保存至72-144h，乳清酸代謝物的比率顯著的降低至0.64-0.66。所述乳清酸可作為生鮮乳新鮮度的評價指標。
實施例2
一種生鮮乳新鮮度檢測的方法，具體步驟如下：
(1)、試驗樣品采集
選擇體細胞數(shù)為100萬以上的牛奶樣品采集后在干凈的環(huán)境中分裝于無菌管中，在4℃冰箱中按照0、36、72和144h等多個時間條件下分別保存，待用；
(2)、牛奶粉末樣品制備
將牛奶樣品在室溫下解凍，隨后在低溫(4℃)離心機2500-4 000g離心15-40min，除去脂肪層，收集清液，取清液與冰浴的甲醇以1:2-3體積混合，渦旋混合均勻，超聲10-30s靜置20s，共10個循環(huán)，冰浴靜置5-20min后離心(4-6℃，10000-15000g，10-30min)收集上清液。上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將甲醇除去，再用冷凍干燥儀冷凍干燥至粉末樣品；
(3)、將粉末樣品溶于600μL-1mL磷酸鹽緩沖液(優(yōu)選地，磷酸鹽緩沖液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O組成，其PH為7.4)，渦旋混勻后離心(4-6℃，12000-15000g，10-30min)，取上清液至5mm核磁管中，用核磁共振光譜儀檢測各個樣品的小分子代謝物表達模式；
(4)、多元變量統(tǒng)計分析小分子代謝物隨生鮮乳保存時間的變化，確定差異代謝物，繪制出差異代謝物與保存時間之間的關(guān)系；
(5)、生鮮乳中三甲胺(化學(xué)位移3.27)代謝物含量隨保存時間顯著增加。與新鮮乳相比，生鮮乳保存至72-144h，三甲胺代謝物比率顯著的增加至1.71-1.87。所述三甲胺可作為生鮮乳新鮮度的評價指標。
以上內(nèi)容僅僅是對本發(fā)明的構(gòu)思所作的舉例和說明，所屬本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對所描述的具體實施例做出的補充或修改或采用類似的方式替代，只要不偏離發(fā)明的構(gòu)思或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護范圍。