一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法，待測(cè)樣品經(jīng)乙腈震蕩提取，提取液經(jīng)弗羅里硅土固相萃取柱凈化，采用以碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，流動(dòng)相為甲醇、水的混合溶劑，其組成的體積比例為甲醇80％-90％、水20％-10％，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，柱溫35℃。本發(fā)明經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的比較研究，首次建立了植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法，具有分離效果好，測(cè)定準(zhǔn)確、靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，分析簡(jiǎn)便快速等技術(shù)特點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種農(nóng)藥殘留分析方法，具體涉及一種植物源性食品中喹螨醚殘留量 測(cè)定的高效液相色譜法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 喹螨醚屬喹唑啉類(lèi)殺螨劑，是以鄰氨基苯甲酸為原料，制得4-羥基喹唑啉，再與 三氯氧磷反應(yīng)，得到的含4-氯喹唑啉鹽酸鹽的混合物，然后4-特丁基苯乙醇回流反應(yīng)，得 到4-(2-(4-特丁基苯基）乙氧基）喹唑啉鹽酸鹽，中和后即得本品。喹螨醚主要用于扁桃 (杏仁）、蘋(píng)果、柑橘、棉花、葡萄和觀賞植物上，可有效地防治真葉螨、全爪螨和紅葉螨以及 紫紅短須螨。該化合物亦具有殺菌活性。中國(guó)、歐盟、日本和美國(guó)等暫未制定喹螨醚的最大 殘留限量（MRL)，印度規(guī)定喹螨醚在茶葉中的最大殘留限量為3mg/kg，韓國(guó)規(guī)定其在蘋(píng)果、 嫩枝、茄子、葡萄、中國(guó)柑橘、梨、紫蘇葉和西瓜中的最大殘留限量分別為〇. l，〇. l，〇. 2,0. 5， 0? 7,0. 3,3 和 0? 05mg/kg。
[0003] ① Food and Chemical Toxicology，2004,42,423-428,公開(kāi)了用二氣甲燒萃取 茶葉和茶湯中的喹螨醚，弗羅里硅土柱層析凈化，高效液相色譜儀測(cè)定，采用乙腈-水= 80 : 20為流動(dòng)相。
[0004] ②《（農(nóng)藥科學(xué)與管理，2011，32(8)，41-43》公開(kāi)了用甲醇：0.05%磷酸溶液= 85 : 15為流動(dòng)相分離，在220nm處檢測(cè)紫外吸收進(jìn)行喹螨醚定量分析。
[0005] ③ Journal of Chromatography A，2008,1208,16-24,公開(kāi)了米用中空纖維-液相 微萃取技術(shù)分離含酒精飲料中的50種農(nóng)藥（含喹螨醚），用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 測(cè)定。
[0006] ④ Journal of Chromatography A，2004,1036,161-169,公開(kāi)了用氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH值，用乙酸乙酯-環(huán)己烷提取蘋(píng)果醬、濃縮檸檬汁、番茄醬中的24種新型農(nóng)藥殘留（含喹 螨醚），用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。
[0007] 但經(jīng)過(guò)本發(fā)明人系統(tǒng)的研究，結(jié)果表明上述專(zhuān)利或論文所確定的主要技術(shù)條件在 實(shí)際的生產(chǎn)應(yīng)用中存在有缺陷：
[0008] (1)上述方法所選用的流動(dòng)相甲醇-0? 05%磷酸溶液=85 : 15在220nm波長(zhǎng)處 不易平衡，改用甲醇-水=85 : 15時(shí)，峰形、分離度、拖尾因子和對(duì)稱(chēng)性均能滿足要求。
[0009] (2)上述方法采用二氯甲烷作為提取溶劑，毒性較大，且提取溶劑用量較大，環(huán)境 污染嚴(yán)重，采用乙腈作為提取溶劑，提取效率較高，毒性較二氯甲烷小。
[0010] (3)上述方法采用正己烷-乙酸乙酯=99 : 1(V/V)作為洗脫溶劑，喹螨醚不能被 洗脫。
[0011] 為尋求對(duì)于植物源性食品中喹螨醚更科學(xué)合理，更具有實(shí)用性的殘留分析方法， 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的對(duì)比研究，提供了一種不同于上述論文或標(biāo)準(zhǔn)所公布的，可用于測(cè)定 植物源性食品中喹螨醚殘留的HPLC法。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0012] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種簡(jiǎn)便快速， 且成本低的植物源性食品中喹螨醚殘留量的液相色譜測(cè)定方法。
[0013] 本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，所采用的技術(shù)方案是：
[0014] 本發(fā)明的一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法，包括以下步 驟：
[0015] 1?樣品提?。?br> [0016] 稱(chēng)取已制備好的水果、蔬菜或糧食樣品5. 0-10. Og于50mL具蓋離心管中。糧食類(lèi) 或含水量較少的樣品加入3-5mL水，然后加入15-30mL乙腈，其他樣品直接加入15-30mL乙 腈，震蕩提取20-60min，加入3-5g氯化鈉渦旋混勻后，5000-10000rpm離心5-15min，移取一 定體積的上清液至雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用正己烷溶解殘?jiān)齼艋?br> [0017] 2?固相萃取柱凈化
[0018] 將上步溶解液轉(zhuǎn)移至弗羅里硅土固相萃取柱，上樣后先用10_20mL正己烷淋洗， 棄去流出液，再用10-30mL正己烷+乙酸乙酯（9+1)洗脫，收集洗脫液于雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)至干，殘留物用甲醇溶解并定容，供高效液相色譜測(cè)定；
[0019] 3?色譜測(cè)定
[0020] 稱(chēng)取喹螨醚標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容后作為儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為 具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；
[0021] 利用液相色譜儀對(duì)試樣進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量；
[0022] 作為優(yōu)選，高效液相色譜分析條件為：
[0023] a)色譜柱：以碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑；
[0024] b)流動(dòng)相：甲醇 + 水=80+20 至 90+10 (V/V);
[0025] c)柱溫：35°C ;
[0026] d)流速：lmL/min ;
[0027] e)進(jìn)樣量：20iiL;
[0028] f)波長(zhǎng)：220nm ;
[0029] 由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果在于：
[0030] 1、建立了植物源性食品（蔬菜、水果、糧食）中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜 法，比利用LC-MS/MS檢測(cè)方法成本低，儀器較普遍，利于推廣應(yīng)用。
[0031] 2、對(duì)蔬菜、水果、糧食等樣品采用乙腈震蕩提取，鹽析、離心分層，提取效率高，提 取液中雜質(zhì)溶出少。
[0032] 3、提取液采用弗羅里硅土固相萃取柱凈化，通過(guò)對(duì)弗羅里硅土固相萃取柱凈化條 件的優(yōu)化，具有較好的凈化效果，并保證喹螨醚有較高的回收率。
[0033] 4、本方法具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、高效等優(yōu)點(diǎn)，喹螨醚的檢測(cè)低限為0. 02y g/mL，平 均回收率為78. 0-102.0%，變異系數(shù)（CV%)為1.6-5. 9%。本方法滿足國(guó)內(nèi)外相關(guān)法規(guī)的 要求，回收率等技術(shù)指標(biāo)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。
[0034] 5、本發(fā)明可應(yīng)用于植物源性產(chǎn)品中喹螨醚殘留量的檢測(cè)中，對(duì)促進(jìn)我國(guó)植物源性 食品的進(jìn)出口貿(mào)易，確保食品安全，保障人類(lèi)身體健康都具有十分重要的意義。

【具體實(shí)施方式】：
[0035] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于具體實(shí)施 例。
[0036] 實(shí)施例1黃瓜中喹螨醚殘留量的測(cè)定
[0037] 1、樣品提取：稱(chēng)取制備好的黃瓜樣品10. Og于50mL具蓋離心管中，加入20mL乙 腈，震蕩提取30min后，加入5g氯化鈉潤(rùn)旋混勻，8000rpm離心IOmin,用移液管移取IOmL 上清液至雞心瓶中，40°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用2mL正己烷溶解殘?jiān)齼艋?br> [0038] 2、固相萃取柱凈化：將上步溶解液轉(zhuǎn)移至已活化好的弗羅里硅土固相萃取柱 (6mL正己烷活化），上樣后先用20mL正己烷淋洗，棄去流出液（控制流速不超過(guò)2mL/min)， 再用15mL正己烷+乙酸乙酯（9+1)洗脫，收集洗脫液于雞心瓶中，洗脫液在40°C水浴中旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘留物用甲醇溶解并定容至I. OmL，混勻，過(guò)0. 45 y m有機(jī)系濾膜，供高效液相 色譜測(cè)定。
[0039] 3、高效液相色譜儀測(cè)定
[0040] 按照液相色譜條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品溶液濃度進(jìn)行校 正，外標(biāo)法定量。
[0041] 4、線性關(guān)系：將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋?zhuān)苽湮鍌€(gè)不同濃度的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按濃 度從低到高順序，依照上述色譜條件測(cè)定。每一濃度測(cè)定3次，按其標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度Y (ii g/ mL)與對(duì)應(yīng)峰面積平均值X作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0042] 表1喹螨醚系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度、峰面積及標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法，其特征在于：所述測(cè)定 方法包括如下步驟： (1) 樣品經(jīng)有機(jī)溶劑振蕩提取，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用正己烷溶解殘?jiān)?，待?化； (2) 采用固相萃取柱凈化，經(jīng)有機(jī)溶劑淋洗后，正己烷和乙酸乙酯混合溶劑洗脫，洗脫 液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用甲醇溶解并定容，高效液相色譜儀測(cè)定。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法， 其特征在于，步驟（1)中所述有機(jī)溶劑為乙腈。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法， 其特征在于，步驟（2)中所述固相萃取柱為弗羅里硅土固相萃取柱，淋洗液為正己烷，采用 的正己烷和乙酸乙酯混合洗脫溶劑比例為：正己烷+乙酸乙酯=9+1 (V/V)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物源性食品中喹螨醚殘留量測(cè)定的高效液相色譜法， 其特征在于所述的植物源性食品為水果、蔬菜或糧食。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104374846SQ201410711798
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】宋薇 申請(qǐng)人:譜尼測(cè)試科技(天津)有限公司