同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜熒光檢測法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜熒光檢測法，先將煙用香精香料用乙醇進行振蕩萃取，靜置后過0.45μm有機相濾膜，得到待測樣品溶液；同時配制4種禁限用添加劑的標準溶液，再采用高效液相色譜熒光檢測儀分別對待測樣品溶液和標準溶液進行檢測分析，然后以外標法進行定量分析，計算出煙用香精香料中4種禁限用添加劑的含量；所述4種禁限用添加劑為芝麻酚、β-萘酚、β-細辛醚和黃樟素。本發(fā)明實現(xiàn)了煙用香精香料中4種禁限用添加劑的同時測定。由于使用了酚類專用色譜柱，檢測時間更短；采用熒光檢測器，選擇性也較高，基質(zhì)干擾較小，檢出限更低；且前處理不需要除水，操作更為簡單。
【專利說明】同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色 譜熒光檢測法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及煙用香精香料中4種禁限用添加劑的檢測方法，具體地指一種同時測 定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜熒光檢測法。

【背景技術(shù)】
[0002] 在卷煙中添加香精香料，其作用在于改善卷煙的理化特性、圓潤香氣、修飾煙香 味、改善吸味、確立產(chǎn)品的風(fēng)格。煙用香精香料是從帶香物質(zhì)中提取或以人工合成方法得到 并且用于煙草中的致香物質(zhì)的總稱。通常情況下，煙用香精香料是由多種香料和適量溶劑 及其他添加劑按照一定的比例和工藝調(diào)配而成。在添加劑中，由于芝麻酚、β -萘酚、β -細 辛醚和黃樟素均有致癌作用，因此被禁止或限制使用。
[0003] 目前，煙草行業(yè)分別頒布了 β -萘酚、β -細辛醚的檢測標準，均采用氣相色譜-質(zhì) 譜聯(lián)用（GC/MS)方法；李晶等利用超高效液相色譜-紫外檢測（UPLC-UV)方法測定了香精 香料中芝麻酚，而黃樟素的測定方法則主要采用GC/MS。GC/MS測定β-萘酚、β-細辛醚 和黃樟素所需時間較長，UPLC-UV方法專一性較差且易受基質(zhì)干擾，而液相色譜-熒光檢測 (HPLC-FD)方法具有檢測速度快、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點。由于芝麻酚、β -萘酚、β -細 辛醚和黃樟素均具有較強的熒光響應(yīng)，且采用HPLC-FD法檢測煙用香精香料中上述4種禁 限用物質(zhì)的研究未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的就是要克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足，提供一種同時測定煙用香精香 料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜熒光檢測法，旨在為煙用香精香料的質(zhì)量安全控制 提供參考。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所提供的同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的 高效液相色譜熒光檢測法（HPLC-FD):先將煙用香精香料用乙醇進行振蕩萃取，靜置后過 0. 45 μ m有機相濾膜，得到待測樣品溶液；同時配制4種禁限用添加劑的標準溶液，再采用 高效液相色譜熒光檢測儀分別對待測樣品溶液和標準溶液進行檢測分析，然后以外標法進 行定量分析，計算出煙用香精香料中4種禁限用添加劑的含量；所述4種禁限用添加劑為芝 麻酚、β-萘酚、β -細辛醚和黃樟素；其中，高效液相色譜熒光檢測儀的檢測條件：
[0006] 米用色譜柱為 Phenomenex Luna C18 柱，其規(guī)格為 150_X4. 6mm i. d.，5 μ m， lOOA,柱溫為 3〇°c ;
[0007] 采用梯度洗脫，流動相A為水，流動相B為乙腈；以體積百分比計算，梯度洗脫程 序如下：0?5111；[11，60 (%流動相六線性降至5(%流動相4，并保持71]1；[11;12?141]1；[11，5 (%流動 相A線性升至60%流動相A，并保持lmin ;流速為lmL/min ;進樣量：20 μ L ;總分析時間為 15min ；
[0008] 熒光檢測條件：
[0009] 0· OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm ;
[0010] 4. 50min，激發(fā)波長為331nm，發(fā)射波長為353nm ;
[0011] 5. 50min，激發(fā)波長為265nm，發(fā)射波長為365nm ;
[0012] 6. 50min，激發(fā)波長為288nm，發(fā)射波長為325nm ;
[0013] 15. OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm。
[0014] 本發(fā)明將煙用香精香料用萃取溶劑進行振蕩萃取時，所述萃取溶劑為甲醇、乙醇 和乙腈，振蕩萃取的速率為200r/min，振蕩萃取時間20?30min ;優(yōu)選地，萃取溶劑為乙醇， 所述煙用香精香料與萃取溶劑的萃取比例為〇. 〇5g/mL，振蕩萃取時間20min。
[0015] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明由于使用了酚類專用色譜柱，檢測時間更短；采 用熒光檢測器，選擇性也較高，基質(zhì)干擾較小，檢出限更低；且前處理不需要除水，操作更為 簡單。本發(fā)明實現(xiàn)了煙用香精香料中芝麻酚、β -萘酚、β -細辛醚和黃樟素的同時測定，靈 敏度高，重現(xiàn)性好，可為煙用香精香料添加劑監(jiān)督檢驗工作提供方法參考。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為不同萃取時間下4種目標物的萃取效率的變化曲線圖。
[0017] 圖2為4種添加劑標準溶液的液相色譜圖。
[0018] 圖3為樣品溶液的液相色譜圖。

【具體實施方式】
[0019] 為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說 明，但它們不對本發(fā)明構(gòu)成限定。
[0020] 實施例
[0021] 本實施例所采用的材料、試劑與儀器如下：
[0022] 甲醇、乙醇、乙腈（色譜純，德國CNW公司）；芝麻酚（純度彡98.0%，上海詩丹 德生物技術(shù)有限公司）萘酚（純度彡99.0% )、β-細辛醚（純度彡71.0% ;德國 Dr. Ehrenstorfer 公司；黃棒素（純度 99. 4%，美國 ChemService 公司）。
[0023] Dionex P680高效液相色譜儀（配有RF2000熒光檢測器，美國Dionex公司）； AL204 電子天平（感量：0.0001g，瑞士 Mettler Toledo 公司）；Milli_Q Advantage A10 超 純水儀（美國Millipore公司）；HY-5A回旋式振蕩器（金壇市城東新瑞儀器廠）；0· 45 μ m 有機相濾膜（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。
[0024] 測定方法如下：
[0025] 先稱取0. 5g煙用香精香料樣品于50mL錐形瓶中，準確加入10mL乙醇，在振蕩器 上以200r/min速率振蕩萃取20min，靜置后過0. 45 μ m有機相濾膜，得到待測樣品溶液；同 時配制4種禁限用添加劑的標準溶液，再采用高效液相色譜熒光檢測儀分別對待測樣品溶 液和標準溶液進行檢測分析，然后以外標法進行定量分析，計算出煙用香精香料中4種禁 限用添加劑的含量；其中，高效液相色譜熒光檢測儀的檢測條件：
[0026] 米用色譜柱為 Phenomenex Luna C18 柱，其規(guī)格為 150_X4. 6mm i. d.，5 μ m， lOOA;柱溫為 3〇°c ;
[0027] 采用梯度洗脫，流動相A為水，流動相B為乙腈；以體積百分比計算，梯度洗脫程 序如下：0?5111；[11，60(%流動相六線性降至5(%流動相4，并保持71]1；[11 ;12?141]1；[11，5(%流動 相A線性升至60%流動相A，并保持lmin ;流速為lmL/min ;進樣量：20 μ L ;總分析時間為 15min ；
[0028] 熒光檢測條件：
[0029] 0· OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm ;
[0030] 4. 50min，激發(fā)波長為331nm，發(fā)射波長為353nm ;
[0031] 5. 50min，激發(fā)波長為265nm，發(fā)射波長為365nm ;
[0032] 6. 50min，激發(fā)波長為288nm，發(fā)射波長為325nm ;
[0033] 15. OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm。
[0034] 采用本發(fā)明的方法檢測了湖北省煙草產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站接受的委托檢測樣留 樣，19個煙用香精香料樣品中均未檢出芝麻酚、β-萘酚、β-細辛醚和黃樟素這4種添加 齊U，如圖3所示。說明煙草行業(yè)對禁限用添加劑的控制非常嚴格，4種禁限用添加劑在煙草 行業(yè)中的使用比較規(guī)范。
[0035] 樣品前處理條件的選擇及優(yōu)化
[0036] 1、萃取溶劑的選擇
[0037] 為選擇合適的萃取溶劑，通過在同一樣品中加標的方法，選擇甲醇、乙醇、乙腈為 萃取溶劑進行實驗，測定結(jié)果如表1所示。
[0038] 表1不同萃取溶劑對4種目標物的萃取效率（mg/kg)
[0039]

【權(quán)利要求】
1. 一種同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜熒光檢測法，其特 征在于：先將煙用香精香料用萃取溶劑進行振蕩萃取，靜置后過〇. 45 y m有機相濾膜，得到 待測樣品溶液；同時配制4種禁限用添加劑的標準溶液，再采用高效液相色譜熒光檢測儀 分別對待測樣品溶液和標準溶液進行檢測分析，然后以外標法進行定量分析，計算出煙用 香精香料中4種禁限用添加劑的含量；所述4種禁限用添加劑為芝麻酚、0 -萘酚、0 -細 辛醚和黃樟素；其中，高效液相色譜熒光檢測儀的檢測條件： 米用色譜柱為 Phenomenex Luna C18 柱，其規(guī)格為 150mmX4.6mm i.d.，5iim，l〇〇A; 柱溫為30 C ; 采用梯度洗脫，流動相A為水，流動相B為乙腈；以體積百分比計算，梯度洗脫程序如 下：0?5min，60 %流動相A線性降至5 %流動相A，并保持7min ; 12?14min，5 %流動相A線 性升至60%流動相A，并保持lmin ;流速為lmL/min ;進樣量：20 y L ;總分析時間為15min ; 熒光檢測條件： 0? OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm ; 4. 50min，激發(fā)波長為331nm，發(fā)射波長為353nm ; 5. 50min，激發(fā)波長為265nm，發(fā)射波長為365nm ; 6. 50min，激發(fā)波長為288nm，發(fā)射波長為325nm ; 15. OOmin，激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為340nm。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜 熒光檢測法，其特征在于：將煙用香精香料用萃取溶劑進行振蕩萃取時，所述萃取溶劑為甲 醇、乙醇和乙腈，振蕩萃取的速率為200r/min，振蕩萃取時間20?30min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定煙用香精香料中4種禁限用添加劑的高效液相色譜 熒光檢測法，其特征在于：將煙用香精香料用萃取溶劑進行振蕩萃取時，所述萃取溶劑為乙 醇，所述煙用香精香料與萃取溶劑的萃取比例為〇. 〇5g/mL，振蕩萃取的速率為200r/min， 振蕩萃取時間20min。
【文檔編號】G01N30/02GK104280474SQ201410591722
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月29日
【發(fā)明者】李韻, 汪宏毅, 廖曉玲, 肖少紅, 陳慧 申請人:中國煙草總公司湖北省公司