一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法，熒光染色試劑將全細(xì)胞染色，細(xì)胞吞噬有不透光的納米粒子顆粒時(shí)，納米粒子顆粒富集于吞噬體內(nèi)，由于納米鐵顆粒阻斷了檢測(cè)光線，使其在熒光圖像上表現(xiàn)為熒光負(fù)染區(qū)，根據(jù)負(fù)染區(qū)的大小可方便判斷出細(xì)胞對(duì)納米粒子的吞噬率，而不影響細(xì)胞的活性。本發(fā)明細(xì)胞標(biāo)記檢測(cè)方法的CFSE熒光負(fù)染法可以用于納米鐵標(biāo)記細(xì)胞后標(biāo)記率與標(biāo)記量的檢測(cè)，用于評(píng)價(jià)納米鐵類(lèi)新型藥物的藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)分析，且本方法不需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，CFSE染色簡(jiǎn)單方便，保持了細(xì)胞的活力。
【專利說(shuō)明】一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種細(xì)胞標(biāo)記檢測(cè)方法，尤其涉及一種動(dòng)態(tài)檢測(cè)單個(gè)活細(xì)胞吞噬超順磁性氧化鐵納米粒子的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著納米材料研究的快速發(fā)展，細(xì)胞磁標(biāo)記成為近年來(lái)影像學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。超順磁性氧化鐵納米粒子(superparamagnetic iron oxide, SP10)是一種新型磁共振對(duì)比齊U，體外加入細(xì)胞培養(yǎng)體系，可被細(xì)胞攝入，回輸體內(nèi)后用于活體示蹤，借助MRI手段可以在各種損傷修復(fù)研究中觀察移植后的細(xì)胞在體內(nèi)的移行、定植等情況，在間充質(zhì)干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞等研究中得到了廣泛應(yīng)用。SP1在一定濃度下使用很安全，不影響細(xì)胞的生物學(xué)功能，并且可以通過(guò)生物降解的形式進(jìn)入鐵代謝循環(huán)。在體外，應(yīng)用SP1標(biāo)記細(xì)胞后，對(duì)其標(biāo)記情況的檢測(cè)目前多通過(guò)普魯士藍(lán)染色方法，可以將細(xì)胞內(nèi)攝取的SP1清析地以醒目的藍(lán)色標(biāo)示出來(lái)[2-4]。但經(jīng)過(guò)普魯士藍(lán)染色后，細(xì)胞即失去活力，不適用于珍貴細(xì)胞樣本的抽樣檢測(cè)，并且不能進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。為此，我們嘗試?yán)肧P1不透光的特性，以熒光染料羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)標(biāo)記細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀察其負(fù)染區(qū)域，借以判斷細(xì)胞對(duì)SP1的攝取效率。
[0003]熒光染色試劑(熒光探針)是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，不影響細(xì)胞的增殖能力。熒光探針CFSE(CFDA-SE)即羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯能夠輕易穿透細(xì)胞膜，在活細(xì)胞內(nèi)不可逆地與胞內(nèi)蛋白共價(jià)結(jié)合，水解后釋放出綠色熒光，用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡在490nm激發(fā)光處可對(duì)其進(jìn)行分析。熒光探針CFSE進(jìn)入細(xì)胞后定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，在細(xì)胞核的熒光染色最強(qiáng)。CFSE標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，常被用來(lái)做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種細(xì)胞標(biāo)記檢測(cè)的熒光負(fù)染法。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法，包括以下步驟:
[0006](I)將不透光的磁性納米粒子加入細(xì)胞懸液中，混合均勻，室溫孵育進(jìn)行標(biāo)記；
[0007](2)在標(biāo)記細(xì)胞溶液中,加入活細(xì)胞熒光染色試劑進(jìn)行染色，然后用PBS溶液洗洚2-4次去上清，保留沉淀部分；
[0008](3)將前述沉淀部分的標(biāo)記染色細(xì)胞在顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)。
[0009]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述步驟(I)中的磁性納米粒子選自氧化鐵納米粒子、氧化鈣納米粒子。
[0010]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述步驟(I)中的室溫孵育時(shí)間為6?24h。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述步驟(2)中的熒光染色試劑選自CFSE熒光染料。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述步驟(3)中的標(biāo)記染色細(xì)胞在熒光顯微鏡或激光掃描共聚焦顯微鏡及其配套的活細(xì)胞工作站下進(jìn)行檢測(cè)。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述細(xì)胞為原代或傳代培養(yǎng)細(xì)胞。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，在所述的步驟(I)標(biāo)記細(xì)胞后，當(dāng)所述的磁性納米粒子選用氧化鐵納米粒子時(shí)，可用普魯士藍(lán)染色法對(duì)細(xì)胞標(biāo)記情況進(jìn)行檢驗(yàn)。
[0015]本發(fā)明中的“細(xì)胞培養(yǎng)基”是指適于培養(yǎng)各種動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基，針對(duì)不同種類(lèi)的生物細(xì)胞及不同的組織的細(xì)胞，包括但不限于DMEM、PRM1-1640、F-10、MEM、F-12、DMEM/F-12等系列培養(yǎng)基等，且培養(yǎng)基的具體組份可以根據(jù)需要有所調(diào)整。
[0016]本發(fā)明中“細(xì)胞”包括現(xiàn)有技術(shù)中可與磁性納米粒子標(biāo)記結(jié)合的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、干細(xì)胞、人骨髓基質(zhì)細(xì)胞、大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞、小鼠纖維母細(xì)胞、小鼠肌前體細(xì)胞等。
[0017]SP1標(biāo)記細(xì)胞后，對(duì)其標(biāo)記率的檢測(cè)手段單一，目前多通過(guò)普魯士藍(lán)染色方法。普魯士藍(lán)反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鐵的原理是:細(xì)胞經(jīng)4 %多聚甲醛固定后，細(xì)胞內(nèi)源性鐵，如幼紅細(xì)胞胞漿內(nèi)的鐵、網(wǎng)狀細(xì)胞及造血島內(nèi)鐵粒，及細(xì)胞內(nèi)外源性鐵，如SP1標(biāo)記的MSC，在酸性條件下，可與亞鐵氰化鉀起反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色普魯士藍(lán)沉積。普魯士藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鐵的方法較為成熟，但其不利之處在于該方法不能用于觀察活細(xì)胞對(duì)SP1的攝取。
[0018]理論上，細(xì)胞吞噬的納米鐵越多，對(duì)檢測(cè)光線的阻斷率越高。CFSE將全細(xì)胞染為綠色，細(xì)胞內(nèi)吞噬有SP1時(shí)，SP1富集于吞噬體內(nèi)，由于SP1阻斷了檢測(cè)光線，使其在熒光圖像上表現(xiàn)為熒光負(fù)染區(qū)，根據(jù)負(fù)染區(qū)的大小可方便判斷出細(xì)胞對(duì)SP1的吞噬率，而不影響細(xì)胞的活性。CFSE熒光負(fù)染法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)納米鐵的攝取量則是對(duì)單個(gè)細(xì)胞的分析，因此不受體系中細(xì)胞數(shù)量的影響，且體系中的細(xì)胞外殘余鐵不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
[0019]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):(1)本發(fā)明的一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法，熒光染色試劑將全細(xì)胞染色，細(xì)胞吞噬有不透光的納米粒子顆粒時(shí)，納米粒子顆粒富集于吞噬體內(nèi)，由于納米鐵顆粒阻斷了檢測(cè)光線，使其在熒光圖像上表現(xiàn)為熒光負(fù)染區(qū)，根據(jù)負(fù)染區(qū)的大小可方便判斷出細(xì)胞對(duì)納米粒子的吞噬率，而不影響細(xì)胞的活性，因此可以用于納米粒子標(biāo)記細(xì)胞后標(biāo)記率與標(biāo)記量的檢測(cè)，用于評(píng)價(jià)不透光的磁性納米粒子類(lèi)新型藥物的藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)分析。
[0020](2)本發(fā)明細(xì)胞標(biāo)記檢測(cè)方法的熒光負(fù)染法用于檢測(cè)單個(gè)活細(xì)胞吞噬磁性納米粒子最大的優(yōu)點(diǎn)是不需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，染色簡(jiǎn)單方便，保持了細(xì)胞的活力。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
[0022]圖1Al為對(duì)照組(沒(méi)有吞噬納米鐵粒子的細(xì)胞)CFSE熒光染色檢測(cè)的成像，圖1A2為放大圖；圖1Bl為本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)組(吞噬納米鐵粒子的細(xì)胞)進(jìn)行CFSE熒光負(fù)染法的成像，圖1B2為放大圖；圖1Cl為普魯士藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)納米鐵粒子的吞噬情況，圖1C2為放大圖。
[0023]圖2A，2B為對(duì)照組(沒(méi)有吞噬納米鐵粒子的細(xì)胞)CFSE熒光染色情況，圖2C，2D為實(shí)驗(yàn)組SP1標(biāo)記好的細(xì)胞CFSE熒光負(fù)染后的圖像，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞斷面(白色虛線)的熒光強(qiáng)度曲線；其中綠色曲線的波谷代表CFSE熒光負(fù)染區(qū)(白色箭頭示)。
[0024]圖3為臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)吞噬了納米鐵粒子并經(jīng)CFSE染色的細(xì)胞的活性；黑色箭頭代表臺(tái)盼藍(lán)染色陽(yáng)性的死細(xì)胞。
[0025]圖4為應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光負(fù)染法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)納米鐵的攝??；白色箭頭指示的熒光負(fù)染區(qū)代表細(xì)胞所攝取的SP10。
[0026]圖5本發(fā)明的CFSE熒光負(fù)染法檢測(cè)原理示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0027]根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0028]實(shí)驗(yàn)材料及儀器:
[0029]RAW264.7 細(xì)胞(上海博谷)，CFSE (東仁化學(xué))，SP1 (SINEREM)。
[0030]熒光顯微鏡(FM) TE2000-E型(日本Nikon公司);激光掃描共聚焦顯微鏡(德國(guó)Leica 公司)。
[0031]實(shí)施例1:SP10標(biāo)記小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞
[0032]取生長(zhǎng)良好的RAW264.7細(xì)胞，將SP1 (終濃度為25?50 μ g/ml)加入細(xì)胞培養(yǎng)體系，置37°C、5% CO2培養(yǎng)箱孵育6?24h，SP1對(duì)細(xì)胞的標(biāo)記率接近100%，對(duì)細(xì)胞的活力、生長(zhǎng)、分化及其他生物活性無(wú)不利影響，且無(wú)明顯細(xì)胞毒性。
[0033]實(shí)施例2:細(xì)胞爬片的普魯士藍(lán)染色方法
[0034]將無(wú)菌蓋玻片置于六孔培養(yǎng)皿內(nèi)，加入SP1標(biāo)記好的RAW264.7細(xì)胞，制備細(xì)胞爬片，經(jīng)4%多聚甲醛固定1min ;蒸餾水洗滌2次，每次2min，洗后晾干；將細(xì)胞爬片置入Perls液(配制:20%亞鐵氰化鉀水溶液25ml，2%鹽酸水溶液25ml。兩液分別配制貯存，臨用前等量混合，過(guò)濾后使用)浸染30min ;蒸餾水充分沖洗；0.2%核固紅(配制:硫酸鋁1g溶于蒸餾水10ml中，待溶解后加入核固紅0.2g混勻，并放在37°C水浴箱內(nèi)I小時(shí)，時(shí)時(shí)振蕩使其充分溶解后過(guò)濾使用)復(fù)染20?30min，蒸餾水沖洗，晾干。染色結(jié)果判斷:陰性(一)，未見(jiàn)藍(lán)色鐵顆粒；陽(yáng)性(+)，含藍(lán)色鐵顆粒1-2顆；陽(yáng)性(++)，含藍(lán)色鐵顆粒3-5顆；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，含藍(lán)色鐵顆粒6-10顆，或1-4個(gè)粗大顆粒；強(qiáng)陽(yáng)性(++++)，含藍(lán)色鐵顆粒10顆以上，或5個(gè)以上粗大顆粒。
[0035]結(jié)果如圖2C所示，普魯士藍(lán)將細(xì)胞內(nèi)吞噬的SP1標(biāo)記為醒目的藍(lán)色，核固紅將細(xì)胞核標(biāo)記為紅色。每個(gè)細(xì)胞內(nèi)含藍(lán)色鐵顆粒在10顆以上，染色結(jié)果呈強(qiáng)陽(yáng)性(++++)。
[0036]實(shí)施例3 =CFSE熒光負(fù)染檢測(cè)活細(xì)胞攝取SP1
[0037]準(zhǔn)備SP1標(biāo)記好的RAW264.7細(xì)胞懸液，用合適的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度至約107個(gè)/ml。取Iml細(xì)胞懸液至試管中，加入適量CFSE工作液，輕輕攪拌混勻(CFSE的終濃度設(shè)定終濃度為0.1?2μΜ，具體由預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定最佳染色濃度)，在37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15?30分鐘。離心后去上清，加入2mlPBS溶液，再離心后去上清，重復(fù)此操作一次。加入合適的培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液。滴10μ I的細(xì)胞懸液在載玻片上，用熒光顯微鏡觀察。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):陰性(一)，未見(jiàn)熒光負(fù)染區(qū)；陽(yáng)性(+)，含熒光負(fù)染區(qū)1-2個(gè)；陽(yáng)性(++)，含熒光負(fù)染區(qū)3-5個(gè)；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，含熒光負(fù)染區(qū)6-10個(gè)，或1-4個(gè)粗大熒光負(fù)染區(qū)；強(qiáng)陽(yáng)性(++++)，含熒光負(fù)染區(qū)10個(gè)以上，或5個(gè)以上粗大熒光負(fù)染區(qū)。
[0038]對(duì)照組(沒(méi)有吞噬納米鐵粒子的細(xì)胞)染色結(jié)果如圖1A2所示，CFSE將對(duì)照組全細(xì)胞染為綠色，熒光分布均勻。實(shí)驗(yàn)組(SP10標(biāo)記好的RAW264.7細(xì)胞)染色結(jié)果如圖1B2所示，細(xì)胞吞噬有納米鐵顆粒時(shí)，納米鐵顆粒富集于吞噬體內(nèi)，由于納米鐵顆粒阻斷了檢測(cè)光線，使其在熒光圖像上表現(xiàn)為熒光負(fù)染區(qū)，呈篩孔狀。每個(gè)細(xì)胞內(nèi)含熒光負(fù)染區(qū)在10個(gè)以上，染色結(jié)果呈強(qiáng)陽(yáng)性(++++)。CFSE熒光負(fù)染法與普魯士藍(lán)染色法的檢測(cè)結(jié)果具有很好的對(duì)應(yīng)性。
[0039]圖2B所示為對(duì)照組經(jīng)CFSE染色后，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞斷面(白色虛線)的熒光強(qiáng)度曲線(綠色曲線)，其波型較為平滑。圖2D所示為實(shí)驗(yàn)組(SP10標(biāo)記好的RAW264.7細(xì)胞)經(jīng)CFSE熒光負(fù)染后，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞斷面(白色虛線)的熒光強(qiáng)度曲線(綠色曲線)，其波形呈波動(dòng)劇烈的指狀，波谷即對(duì)應(yīng)CFSE熒光負(fù)染區(qū)(白色箭頭示)，代表細(xì)胞所吞噬的SP10。根據(jù)熒光強(qiáng)度曲線的形態(tài)，可以方便的識(shí)別細(xì)胞對(duì)SP1的攝取。
[0040]實(shí)施例4:臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)CFSE熒光負(fù)染細(xì)胞活力
[0041]臺(tái)盼藍(lán)主要用來(lái)鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞分離后的存活情況，用0.4%臺(tái)盼藍(lán)直接染色，在顯微鏡下觀察即可。細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。4%臺(tái)盼藍(lán)母液配置:稱取4g臺(tái)盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過(guò)濾，4°C保存。使用時(shí)，用PBS稀釋至0.4%。染色方法:制備單細(xì)胞懸液，適當(dāng)稀釋(106細(xì)胞/ml)；將細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻；在三分鐘內(nèi)，在顯微鏡下觀察，用計(jì)數(shù)板分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞，死細(xì)胞被染成淡藍(lán)色，而活細(xì)胞拒染。根據(jù)下式計(jì)算細(xì)胞活力:活細(xì)胞率(％)=活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))X 100。
[0042]結(jié)果如圖3所示，RAW264.7細(xì)胞經(jīng)過(guò)SP1和CFSE雙重標(biāo)記后，對(duì)細(xì)胞活力的影響較小，死細(xì)胞比例較低，活細(xì)胞率為95?98%。
[0043]實(shí)施例5:應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光負(fù)染法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞對(duì)SP1的攝取
[0044]按實(shí)施例1和實(shí)施例2所述方法對(duì)RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行SP1和CFSE雙重標(biāo)記，將標(biāo)記好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移置激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿，應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察熒光負(fù)染情況。
[0045]結(jié)果如圖4所示，應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光負(fù)染法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞對(duì)SP1的攝取，結(jié)果更為清晰，熒光染色區(qū)與熒光負(fù)染區(qū)對(duì)比強(qiáng)烈，代表SP1吞噬泡的熒光負(fù)染區(qū)呈明顯的篩孔狀。
[0046]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)例的限制，上述實(shí)例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等同物界定。
【權(quán)利要求】
1.一種熒光負(fù)染法檢測(cè)活細(xì)胞的方法，包括以下步驟: (1)將不透光的磁性納米粒子加入細(xì)胞懸液中，混合均勻，室溫孵育進(jìn)行標(biāo)記； (2)在標(biāo)記細(xì)胞溶液中，加入活細(xì)胞熒光染色試劑進(jìn)行染色，然后用PBS溶液洗滌2-4次去上清，保留沉淀部分； (3)將前述沉淀部分的標(biāo)記染色細(xì)胞在顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的磁性納米粒子選自氧化鐵納米粒子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的磁性納米粒子為氧化鐵納米粒子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的室溫孵育時(shí)間為6?24h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的熒光染色試劑為CFSE熒光染料。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中的標(biāo)記染色細(xì)胞在熒光顯微鏡或激光掃描共聚焦顯微鏡及其配套的活細(xì)胞工作站下進(jìn)行檢測(cè)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞為原代或傳代培養(yǎng)細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步驟(I)標(biāo)記細(xì)胞后，當(dāng)所述的磁性納米粒子選用氧化鐵納米粒子時(shí)，可用普魯士藍(lán)染色法對(duì)細(xì)胞標(biāo)記情況進(jìn)行檢驗(yàn)。
【文檔編號(hào)】G01N1/30GK104345052SQ201410515671
【公開(kāi)日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】何向鋒, 強(qiáng)福林, 沈康, 蔡晶, 張一心, 王建紅, 劉繼斌 申請(qǐng)人:南通市腫瘤醫(yī)院