一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種巰基鍵合銀離子色譜柱及其制備方法，所述的巰基鍵合銀離子色譜柱，即利用液相色譜儀，使用巰丙基三甲氧基硅烷在溶劑環(huán)己烷的作用下與空白硅膠色譜柱在柱內(nèi)發(fā)生原位反應(yīng)，得到巰基鍵合硅膠柱，然后利用液相色譜儀直接將銀離子原位結(jié)合到巰基鍵合硅膠柱上，即得巰基鍵合銀離子柱。該巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法簡(jiǎn)便、且可通過(guò)制備過(guò)程中調(diào)整空白硅膠色譜柱的粒徑最終得到不同的小粒徑的巰基鍵合銀離子色譜柱，該巰基鍵合銀離子色譜柱可用于超高效液相色譜或液質(zhì)聯(lián)用的儀器中中對(duì)食用油，特別是玉米油和大豆油中不飽和有機(jī)物即不同類型的甘油三酯的分離分析。
【專利說(shuō)明】一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種有效的色譜柱的制備方法，特別涉及一種巰基鍵合銀離子色譜柱 的制備方法，該巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色譜或其與質(zhì)譜聯(lián)用中用于分離食用 油中不同類型的甘油三酯。

【背景技術(shù)】
[0002] 銀離子色譜法是基于獨(dú)特的不飽和有機(jī)化合物屬性的，也就是與過(guò)渡金屬絡(luò)合的 能力，不飽和化合物充當(dāng)電子供體，銀離子作電子受體，而形成烯鍵分子絡(luò)合物，進(jìn)而有效 的分離含不同烯鍵的甘油三酯 [1]。
[0003] 目前使用銀離子柱來(lái)分離含不同烯鍵的甘油三酯，主要包括使用單根銀離子柱
[2]，或者串聯(lián)2根銀離子柱[3]，甚至是串聯(lián)3根銀離子柱 [4]來(lái)達(dá)到分離分析的作用。使用 一根銀離子柱進(jìn)行分離比較常規(guī)，但不能完全分離出所有的不飽和有機(jī)物，因而部分學(xué)者 采用多根串聯(lián)的技術(shù)來(lái)進(jìn)行分離，從而達(dá)到更好的分離效果。
[0004] 在使用銀離子柱的時(shí)候，有直接采用商品化的銀離子柱，也有采用自制的銀離子 柱，自制的銀離子柱更加方便。自制銀離子柱主要是使用高效液相色譜儀在陽(yáng)離子交換柱 灌注硝酸銀溶液，硝酸銀吸附在交換柱上，從而達(dá)到制備的效果。但是自制的銀離子柱，一 般不僅需要使用多根銀離子柱串聯(lián)才能很好的分離，并且使用壽命不長(zhǎng)，重現(xiàn)性較差。
[0005] 為了使得銀離子柱更有效的達(dá)到分離的作用，有學(xué)者采用巰基鍵合銀離子柱[5'6'7] 的方法來(lái)自制銀離子柱，這種方法可以使得鍵合的銀離子更穩(wěn)定，使用時(shí)間更長(zhǎng)，更加有益 于不飽和有機(jī)化合物的分離。 、'0 '? SH
[0006]Y-巰丙基三甲氧基硅烷結(jié)構(gòu) 目前這種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法由于需要先合成相應(yīng)的鍵合硅膠后，通過(guò) 柱填料填裝的方法制備出所需的色譜柱。因此該制備方法存在制備過(guò)程過(guò)于復(fù)雜，條件苛 亥IJ，人工操作繁瑣，得到的結(jié)果準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性受到實(shí)驗(yàn)技術(shù)的限制，且通常用于制備較大 粒徑的巰基鍵合銀離子固定相等技術(shù)問(wèn)題。
[0007] 參考文獻(xiàn)：
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是為了解決上述的巰基鍵合銀離子色譜柱制備過(guò)程復(fù)雜，條件苛 亥IJ，人工操作繁瑣，得到的結(jié)果準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性受到實(shí)驗(yàn)技術(shù)的限制，及通常制備較大粒徑 固定相等技術(shù)問(wèn)題而提供一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，該制備方法操作簡(jiǎn)便、 且可以制備小粒徑固定相的巰基鍵合銀離子色譜柱，該色譜柱可以用于超高效液相色譜或 高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用中對(duì)食用油中不飽和有機(jī)物即不同類型的甘油三酯進(jìn)行了分離。
[0009] 本發(fā)明的技術(shù)方案 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，具體包括如下兩個(gè)步驟： (1) 、硅膠柱鍵合巰丙基 利用超高效液相色譜儀，以流速0. 5-lmL/min的環(huán)己烷沖洗硅膠柱lh，取4mL巰丙基 三甲氧基娃燒溶于IOOmL環(huán)己燒中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的流速?zèng)_洗娃 膠柱6-12h，結(jié)束后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環(huán)己烷沖洗硅膠柱l-2h， 然后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用乙醇沖洗硅膠柱l-2h，然后維持40-80°C 柱溫不變，保持12-24h; 所述的硅膠柱長(zhǎng)度為100_250mm，優(yōu)選為100-150mm，硅膠柱中所用的硅膠粒徑為 1. 3-20μπι，優(yōu)選為 1. 8-5μπι; 所述的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； (2) 、巰基鍵合銀離子 配制0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動(dòng)相； 以10-50μL/min的進(jìn)樣量進(jìn)樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結(jié)束后使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃膠柱l-2h，結(jié)束后改用甲醇以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_ 洗硅膠柱l_2h，再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，最后用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0010] 上述所得的巰基鍵合銀離子色譜柱可以用于超高效液相色譜或液質(zhì)聯(lián)用的儀器 中用于分離食用油，如玉米油或大豆油中不飽和有機(jī)物即不同類型的甘油三酯。
[0011] 本發(fā)明的有益效果 本發(fā)明的一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，由于以商品化硅膠柱為原料，直接 在柱內(nèi)合成目標(biāo)固定相，即制備過(guò)程中采用原位制備法，因此具有簡(jiǎn)便、不需要柱填充儀 器、便于實(shí)驗(yàn)室制備、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，最終所得的巰基鍵合銀離子色譜柱相比較于普通的 陽(yáng)離子交換固定相制備所得的銀離子柱更加的靈敏以及耐久。使用普通的陽(yáng)離子交換柱在 實(shí)驗(yàn)室中制備所得的銀離子柱在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)不飽和物的分離往往得不到完美的效果，而 且經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)后結(jié)果也存在著很大的差異，甚至經(jīng)過(guò)幾次實(shí)驗(yàn)后就開(kāi)始出現(xiàn)無(wú)法出峰的現(xiàn) 象，必須通過(guò)再鍵合才能確保繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
[0012] 進(jìn)一步，本發(fā)明的巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法所得的一種巰基鍵合銀離子 色譜柱，使用時(shí)，只需使用超液相色譜儀或液質(zhì)聯(lián)用的儀器對(duì)樣品進(jìn)行儀器操作，無(wú)任何人 為影響，重現(xiàn)性好，分析時(shí)間短。而現(xiàn)有技術(shù)中的巰基鍵合銀離子薄層色譜法對(duì)不飽和物進(jìn) 行分析的過(guò)程手動(dòng)操作較多，人為影響因素大，重現(xiàn)性不好，耗時(shí)長(zhǎng)。
[0013] 進(jìn)一步，本發(fā)明的巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中銀離子 柱制備過(guò)程復(fù)雜、難以制備小粒徑柱的不足之處，制備過(guò)程中調(diào)整空白硅膠色譜柱的粒徑 最終得到不同的小粒徑的巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0014] 進(jìn)一步，本發(fā)明的一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備過(guò)程簡(jiǎn)單，易于操作，使用其 對(duì)不飽和物進(jìn)行分析也同樣簡(jiǎn)單易操作，相比較巰基鍵合銀離子薄層色譜的方法來(lái)說(shuō)，更 加的簡(jiǎn)便。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1、應(yīng)用實(shí)施例1中，利用實(shí)施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜柱進(jìn)行色譜分析 玉米油樣品的總離子流圖； 圖2、應(yīng)用實(shí)施例2中，利用實(shí)施例1所得巰基鍵合銀離子色譜柱與實(shí)施例2所得巰基 鍵合銀離子色譜柱串聯(lián)進(jìn)行色譜分析大豆油樣品的總離子流圖。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面通過(guò)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明。
[0017] 本發(fā)明各實(shí)施例或應(yīng)用實(shí)施例中所用的試劑： 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司購(gòu)買試劑乙腈（HPLC級(jí)）； 賽默飛世爾（中國(guó)）有限公司購(gòu)買試劑正己烷（HPLC級(jí)）； 本發(fā)明的各實(shí)施例中所用的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液 相色譜儀； 液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定所用的儀器為L(zhǎng)CMS-2020型液相色譜質(zhì)譜儀（島津)，其中色譜分離部分 為L(zhǎng)C-30AD型超效液相色譜儀。
[0018] 實(shí)施例1 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，具體包括如下兩個(gè)步驟： (1)、硅膠柱鍵合巰丙基 利用日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀，使用環(huán)己烷以0. 5-lmL/min的流速 沖洗硅膠柱lh，取4mL巰丙基三甲氧基硅烷溶于IOOmL環(huán)己烷中，在40-80°C柱溫條件下 以0. 2-0. 5mL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱6-12h，結(jié)束后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流 速使用環(huán)己烷沖洗硅膠柱l_2h，然后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱 l-2h，然后維持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的硅膠柱為月旭材料科技(上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2硅膠柱，規(guī)格 為2.l*150mm,娃膠柱中所用的娃膠粒徑為3μm; (2)、巰基鍵合銀離子 配制0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動(dòng)相； 以10-50μL/min的進(jìn)樣量進(jìn)樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結(jié)束后使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃膠柱l-2h，然后用甲醇以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃 膠柱l-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，最后用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，即得巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0019] 應(yīng)用實(shí)施例1 利用實(shí)施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜柱對(duì)玉米油進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用色譜分離，具體步 驟如下： 玉米油：益海嘉里食品營(yíng)銷有限公司金龍魚(yú)玉米胚芽油； 液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定所用的儀器：LCMS-2020型液相色譜質(zhì)譜儀（島津)，其色譜分離部分為L(zhǎng)C-30AD型超效液相色譜儀； 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備：ι〇μ?金龍魚(yú)玉米胚芽油溶于ιοοομ?正己烷中，濃度〇. 1% (v/v); 液相分離條件：流速為lmL/min，柱溫為室溫，以A:B的體積比為40 :60的比例組成流 動(dòng)相，進(jìn)樣量5yL; 所述的A為正己烷，B為由正己烷：乙腈按體積比為99:1組成的混合液； 液相分離后直接進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析； 質(zhì)譜分離條件=APCI電離源，正離子電離模式，質(zhì)荷比范圍300-1050,霧化氣流速I. 5L/min，干燥氣流速10L/min，APCI溫度350°C，DL溫度200°C，檢測(cè)器電壓I. 05kV。
[0020] 上述液質(zhì)聯(lián)用色譜分離所得的玉米油樣品的總離子流圖如圖1所示，從圖1中可 以看出通過(guò)巰基鍵合銀離子柱，玉米油樣品中的甘油三酯根據(jù)雙鍵數(shù)由2-6共分離出了 5 個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)著不同的甘油三酯，由此表明了利用巰基鍵合銀離子柱可以對(duì)甘油三酯這 類不飽和化合物進(jìn)行分離分析。
[0021] 實(shí)施例2 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，具體包括如下兩個(gè)步驟： (1) 、硅膠柱鍵合巰丙基 利用超高效液相色譜儀（島津)，使用環(huán)己烷以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱lh，取 4mL巰丙基三甲氧基硅烷溶于IOOmL環(huán)己烷中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的 流速?zèng)_洗硅膠柱6-12h，結(jié)束后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環(huán)己烷沖洗硅 膠柱l-2h，然后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用乙醇沖洗硅膠柱l-2h，然后維 持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的硅膠柱為月旭材料科技(上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2硅膠柱，規(guī)格 為2.l*100mm,娃膠柱中所用的娃膠粒徑為1. 8μm; (2) 、巰基鍵合銀離子 配制0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液，蒸餾水做為流動(dòng)相； 以10-50μL/min的進(jìn)樣量進(jìn)樣0. 2-0. 5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，結(jié)束后使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃膠柱l-2h，然后用甲醇以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃 膠柱l-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，最后用正 己烷以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
[0022]應(yīng)用實(shí)施例2 利用實(shí)施例2所得的巰基鍵合銀離子色譜柱串聯(lián)實(shí)施例1所得的巰基鍵合銀離子色譜 柱對(duì)大豆油進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用色譜分離，具體步驟如下： 大豆油：益海嘉里食品營(yíng)銷有限公司金龍魚(yú)大豆油； 液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定所用的儀器：LCMS-2020型液相色譜質(zhì)譜儀（島津)，其中色譜分離部分為L(zhǎng)C-30AD型超效液相色譜儀。
[0023] 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備：ι〇μ?金龍魚(yú)大豆油溶于ιοοομ?正己烷中，濃度〇. 1% (v/v) 液相分離條件：流速為〇. 2mL/min，柱溫為室溫，以A:B的體積比為45 :55的比例組成 流動(dòng)相，進(jìn)樣量5yL; 所述的A為正己燒，B為由正己烷：乙腈按體積比為99:1組成的混合液； 液相分離后直接進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析； 質(zhì)譜分離條件=APCI電離源，正離子電離模式，質(zhì)荷比范圍300-1000,霧化氣流速 2. 5L/min，干燥氣流速10L/min，APCI溫度240°C，DL溫度200°C，檢測(cè)器電壓I. 10kV。
[0024] 上述液質(zhì)聯(lián)用色譜分離所得的大豆油樣品的總離子流圖如圖2所示，從圖2中可 以看出大豆油的樣品根據(jù)雙鍵數(shù)由1-8以及相當(dāng)碳原子數(shù)(所述的相當(dāng)碳原子數(shù)等于碳原 子個(gè)數(shù)減去兩倍雙鍵數(shù)，以下同）由38-48的不同共分離出了 11種不同的甘油三酯，表明本 發(fā)明制備方法所得的巰基鍵合銀離子柱可有效對(duì)甘油三酯這類不飽和物進(jìn)行分析。
[0025] 綜上所述，本發(fā)明的巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法具有簡(jiǎn)便、不需要柱填充 儀器、便于實(shí)驗(yàn)室制備、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，所得的巰基鍵合銀離子色譜柱可以有效地對(duì)不飽 和物，如甘油三酯進(jìn)行分離，其分離主要依據(jù)不同的雙鍵數(shù)，根據(jù)雙鍵數(shù)的不同，按由少到 多的順序進(jìn)行了分離，同時(shí)對(duì)于擁有相同的雙鍵數(shù)，不同的相當(dāng)碳原子數(shù)的化合物同樣可 以進(jìn)行分離，分離效果明顯，重現(xiàn)性好。
[0026] 以上實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外，在閱讀了本發(fā) 明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣 落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，其特征在于包括如下兩個(gè)步驟： (1 )、硅膠柱原位鍵合制備巰丙基硅膠 利用超高效液相色譜儀，以流速0. 5-lmL/min的環(huán)己烷沖洗硅膠柱lh，取4mL巰丙基三 甲氧基娃燒溶于100mL環(huán)己燒中，在40-80°C柱溫條件下以0. 2-0. 5mL/min的流速?zèng)_洗娃膠 柱6-12h，結(jié)束后在40-80°C柱溫條件下以lmL/min的流速使用環(huán)己烷沖洗硅膠柱l-2h，繼 續(xù)使用乙醇在同一條件下沖洗硅膠柱l-2h，維持40-80°C柱溫不變，保持12-24h; 所述的超高效液相色譜儀為日本島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； (2)、巰基原位鍵合銀離子 配制0. 2-0. 5g/mL的AgN03水溶液，蒸餾水做為流動(dòng)相； 以10-50 μ L/min的進(jìn)樣量進(jìn)樣0. 2-0. 5g/mL的AgN03水溶液40-100次，結(jié)束后使用 蒸饋水以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃膠柱l-2h，然后用甲醇以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗娃 膠柱l-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0. 5-lmL/min的流速?zèng)_洗硅膠柱l-2h，最后用正 己烷以0. 5-lmL/min的流逝沖洗硅膠柱l-2h，即得到巰基鍵合銀離子色譜柱。
2. 如權(quán)利要求1所述一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，其特征在于步驟（1)中 所述的硅膠柱長(zhǎng)度為50-250mm，硅膠柱中所用的硅膠粒徑為1. 3-20 μ m。
3. 如權(quán)利要求2所述一種巰基鍵合銀離子色譜柱的制備方法，其特征在于步驟（1)中 所述的硅膠柱長(zhǎng)度為50-150mm，硅膠柱中所用的硅膠粒徑為1. 8-3 μ m。
4. 如權(quán)利要求1、2或3所述的制備方法所得的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色 譜或液質(zhì)聯(lián)用的儀器中分離食用油中不同類型的甘油三酯的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求4所述的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色譜或液質(zhì)聯(lián)用的儀器 中分離食用油中不同類型的甘油三酯的應(yīng)用，其特征在于所述的超高效液相色譜儀為日本 島津公司LC-30AD型超高效液相色譜儀； 所述的液質(zhì)聯(lián)用的儀器為L(zhǎng)CMS-2020型液相色譜質(zhì)譜儀，其中色譜分離部分為 LC-30AD型超效液相色譜儀。
6. 如權(quán)利要求1、2或3所述的制備方法所得的巰基鍵合銀離子色譜柱在超高效液相色 譜或液質(zhì)聯(lián)用的儀器中分離玉米油或大豆油中不同類型的甘油三酯的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/60GK104226284SQ201410463353
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】許旭, 何榕, 山曉琳, 董方圓 申請(qǐng)人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院