一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法及檢測方法，屬于中藥【技術領域】。該中藥組合物由烏梢蛇、荊芥、防風、醋香附、獨活、土鱉蟲、威靈仙、桂枝、羌活、地龍、制川烏、制草烏組成，采用塑制與泛制聯(lián)合應用技術，制成易于吞服的丸型，從而改善該藥臨床應用上的弊端。通過增加薄層色譜鑒別加強該組合物的檢測，同時采用薄層色譜法改善了毒性成分烏頭堿的限量對照品斑點瞬間消失或不出現(xiàn)的問題，采用高效液相色譜法對其主成分5-O-甲基維斯阿米醇苷測定方法進行了改進，解決了以合格原材料投產(chǎn)而含量不達標，有效成分轉(zhuǎn)移率偏低的技術難點。本發(fā)明檢測方法不僅適用于工業(yè)化生產(chǎn)，同時也為臨床用藥提供了一種安全有效的檢測手段。
【專利說明】一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法及檢測方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥、天然藥物【技術領域】，具體涉及一種治療風寒濕邪中藥組合物的 制備方法及檢測方法。

【背景技術】
[0002] 風濕性疾病是一類侵犯多種組織多系統(tǒng)和內(nèi)臟器官的自身免疫性疾病，可致各種 組織和器官損傷，嚴重影響其正常功能，甚至造成致命性損害。目前市場上應用最廣泛的 是"散寒活絡丸"，以追風散寒、舒筋活絡為主要療效的中藥組合物，主要用于風寒濕邪引起 的肩背疼痛，手足麻木，腰腿疼痛，行步困難等。用于風寒濕邪引起的肩背疼痛，手足麻木， 腰腿疼痛，行步困難等。其處方由按重量份的烏梢蛇（去頭尾）85. 8份，荊芥85. 8份，防風 85. 8份，醋香附68. 2份，獨活68. 2份，土鱉蟲68. 2份，威靈仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活 51. 2份，地龍51. 2份，制川烏34份，制草烏34份組成。
[0003] 該"散寒活絡丸"是經(jīng)過塑制法制成的每丸重9g的大蜜丸，其給藥途徑必須通過 咀嚼或研麿后才能吞服，且每次服用9g，服用量較大，隨著人們對生活質(zhì)量要求的不斷提 高，越來越多的患者對這種服用方式望而怯步，臨床應用上出現(xiàn)越來越多患者不愿意服用 的現(xiàn)象，使該藥物發(fā)揮不了應有的價值。另該組合物藥味較多，成份復雜，原標準收載的控 制項目針對處方藥材荊芥、香附、制川烏、制草烏和防風進行控制。
[0004] 其中荊芥的薄層鑒別具體步驟如下：
[0005] 取本品適量（相當于原藥材7g)，加乙酸乙酯30?60ml，加熱回流30?90分鐘， 濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液。另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯10?50ml，同 法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述 兩種溶液各1?10 μ 1，分別點于同一娃膠G薄層板上，以石油醚（30?60°C )-乙酸乙酯 (4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥 材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0006] 其中香附的薄層鑒別具體步驟如下：
[0007] 取本品適量（相當于原藥材7g)，加乙醚30?60ml，浸漬1?3小時，超聲處理 10?30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加丙酮lml使溶解，作為供試品溶液。另取α -香附酮 對照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010 年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5?10 μ 1、對照品溶液2?5 μ 1，分別點于同一 硅膠G薄層板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙酯（17:3?5)為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同 顏色的斑點。
[0008] 存在的問題：①對制川烏、制草烏中烏頭堿限量檢查定性控制項，以甲苯-乙酸乙 酯-二乙胺（14:4:1)為展開劑，以改良碘化鉍鉀試液為顯色劑，結(jié)果對照品斑點顯色極不 穩(wěn)定，有時瞬間消失，重現(xiàn)性差，且比移值較低，達不到對處方毒性成分起到真正控制的作 用。②對防風中5-0-甲基維斯阿米醇苷定量控制項，樣品的處理方法：采用水飽和正丁醇 提取，用正丁醇飽和的水洗滌去雜質(zhì)，操作時樣品溶液乳化嚴重，長時間很難分離，由于操 作性不強，導致5-0-甲基維斯阿米醇苷轉(zhuǎn)移率偏低，加樣回收率不到60%，起不到對防風 的質(zhì)量控制作用。由于本品處方中毒性成分烏頭堿限量及含量控制方法操作性不強，造成 本品生產(chǎn)及檢驗對該兩項指標無法有效控制。從而影響了該產(chǎn)品的臨床療效的穩(wěn)定發(fā)揮。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明提供一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法及檢測方法，以解決目前 "散寒活絡丸"不方便服用、制劑不易成型、及檢測方法落后的問題。
[0010] 本發(fā)明丸劑的制備方法包括以下步驟：
[0011] a)破粗粉：稱取去頭尾烏梢蛇85. 8份，荊芥85. 8份，防風85. 8份，醋香附68. 2 份，獨活68. 2份，土鱉蟲68. 2份，威靈仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活51. 2份，地龍51. 2份， 制川烏34份，制草烏34份凈藥材破碎成粗粉；
[0012] b)滅菌：取上述粗粉鋪于全身帶孔的托盤內(nèi)，使物料溫度為50?60°C，保溫1? 3小時；
[0013] C)細粉碎：將滅菌后的藥材粗粉粉碎成細粉，過100目篩，并批混45分鐘，細粉備 用；
[0014] d)煉蜜：將生蜜進行煉制，去浮沫、死蜂和其它雜質(zhì)，制成45?55%的煉蜜，備 用；
[0015] e)制丸：將上述細粉加煉蜜輔料制成大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸或糊丸劑。 [0016] 上述制備步驟（e)中，水蜜丸的制備方法如下，用80%的藥粉與濃度50%煉蜜合 培，每10(^粉末用50%煉蜜40?458，壓制成0.158的丸模，鋪于托盤內(nèi)，厚度為不超過 2cm，經(jīng)45?50°C干燥，檢測丸模水分小于8%時，停止干燥，室溫晾12小時，將丸模倒入泛 丸鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時交替添加蜜水和藥粉操作，當20%泛丸藥 粉全部泛盡后，撒入少許活性炭粉末，使活性炭均勻分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干 燥；成丸干燥時先將干燥空間溫度迅速升至80°C，并在80°C保溫lOmin，中間翻盤1次，然 后將溫度降至50?60°C干燥；中間進行翻盤；當水分在12%以下時停止干燥，室溫晾丸24 小時后，將成丸倒入拋光鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時加入少許蟲白蠟粉 末進行拋光，室溫晾丸24小時后包裝，每袋裝5. Og。
[0017] 按本發(fā)明所述的一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法制備的丸劑的檢測方 法，包括荊芥、香附、羌活、獨活、桂枝的薄層鑒別方法、毒性成分烏頭堿限量檢查方法、防風 中5-0-甲基維斯阿米醇苷含量測定方法：
[0018] 其中所述的荊芥的薄層鑒別具體步驟如下：
[0019] 取本品10g，研細，加乙酸乙酯40ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作 為供試品溶液，另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照藥材溶液，照中國藥 典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫 外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0020] 其中所述的香附的薄層鑒別具體步驟如下：
[0021] 取本品15g，研細，加乙醚50ml，浸漬1小時，超聲處理10分鐘，濾過，濾液揮干，殘 渣加丙酮lml使溶解，作為供試品溶液，另取α -香附酮對照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作為對照品溶液，照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品 溶液5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60?90°C石油醚：乙酸乙 酯17:3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供試品色譜中，在與對 照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0022] 本發(fā)明所述桂枝的薄層鑒別具體步驟如下：
[0023] (a)取本品15g，研細，加乙酸乙脂10?30ml，回流提取30?60分鐘，濾過，濾過， 濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；
[0024] (b)對照品溶液的制備：取肉桂酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0025] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取 上述兩種溶液各5?10 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，在254nm紫外光燈下看熒光，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0026] 上述桂枝的薄層鑒別方法曾按2004年8月出版的遼寧中醫(yī)藥雜志第8期中收載 的檳榔七味丸質(zhì)量標準中的肉桂的薄層鑒別方法，樣品采用甲醇超聲提取，堿性條件下乙 醚除雜，酸性條件下乙醚提取有效成分，本發(fā)明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1為展開 劑操作，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置無斑點出現(xiàn)；將樣品的處理方法采用乙酸 乙酯直接回流制備，展開劑采用環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑點清晰，同法制備 的陰性無干擾。
[0027] 本發(fā)明所述的羌活和獨活的薄層鑒別具體步驟如下：
[0028] (a)取本品15g，研細，加乙醚80ml及1 %氫氧化鈉溶液30?50ml，加熱回流1小 時，濾過，分取乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液；
[0029] (b)對照品溶液的制備：取獨活與羌活對照藥材各lg，加乙醚20ml及1 %氫氧 化鈉溶液l〇ml，同法分別制成對照藥材溶液，另取羌活醇對照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 5?1. Omg的溶液，作為對照品溶液；
[0030] (C)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取 上述三種溶液各5?10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙 酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供 試品色譜中，在與獨活對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以茴香醛 試液，在105°C加熱至顯色，供試品色譜中，在與羌活對照藥材及羌活醇對照品色譜相應的 位置上，應顯相同顏色的斑點；
[0031] 上述羌活和獨活的薄層鑒別其展開系統(tǒng)參考2006年7月山西中醫(yī)學院學報第5 期出版的香樟風寒熨劑的薄層鑒別中獨活的薄層鑒別的展開系統(tǒng)："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展開系統(tǒng)操作，供試品中的斑點分離度不好，將展開 系統(tǒng)以石油醚（30?60°C ):乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展開，在熒光及顯色劑 不同的觀察條件下，供試品色譜中，羌活與獨活兩種藥材的有效成分均能有效分離，現(xiàn)象明 顯，易于判斷。
[0032] 本發(fā)明所述的烏頭堿限量檢查具體步驟如下：
[0033] 取本品適量，研細，取10. 4g，加氨試液10ml，拌勻，放置1?3小時，加乙醚50? 70ml，振搖1小時，放置24小時，濾過，濾渣用乙醚10ml洗滌，洗液與濾液合并，低溫蒸干， 殘渣加無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每 lml含1. Omg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試 驗，精密吸取供試品溶液8 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲 烷：丙酮：甲醇=5 :1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點。
[0034] 上述烏頭堿限量檢查采用原標準的展開系統(tǒng)"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"與原顯色劑"改良碘化鉍鉀"，結(jié)果對照品不出現(xiàn)斑點或出現(xiàn)瞬間就消失的斑點，致使生 產(chǎn)檢驗無法判斷其產(chǎn)品是否為合格產(chǎn)品，通過對比性研究，現(xiàn)采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展開劑，以稀碘化鉍鉀試液顯色解決了對照品斑點的問題，易于生產(chǎn)實際對產(chǎn)品的 分析判斷。
[0035] 本發(fā)明所述的防風含量采用高效液相色譜法測定步驟如下：
[0036] (a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水 =15 :85為流動相；檢測波長為254nm，理論板數(shù)按5-0-甲基維斯阿米醇苷峰計算應不低 于 3000 ;
[0037] (b)對照品溶液的制備，取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0038] (c)供試品溶液的制備，取重量差異或裝量差異項下的本品，研細，稱取2. 8g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，稱定重量，水浴加熱回流1?3小時，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸至近干，殘渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱上，該中性氧化鋁的粒度100?200目、用量7g，柱內(nèi) 徑1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0039] (d)測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀， 測定，即得；
[0040] 本品含防風以5-0-甲基維斯阿米醇苷（C22H280 1Q)計，每袋不得少于0. 85mg。
[0041] 上述含量測定方法中，供試品的制備方法按原乙醚除雜，正丁醇超聲提取制備樣 品，其藥材中5-0-甲基維斯阿米醇苷轉(zhuǎn)移率為65%左右，致使合格的藥材生產(chǎn)出不合格的 產(chǎn)品，采用中性氧化鋁柱80%甲醇洗脫的處理方法，其藥材轉(zhuǎn)移率達95%以上。
[0042] 本發(fā)明采用塑制與泛制聯(lián)合應用技術：①解決了處方藥材本身粘性差、減少粘合 劑用量不宜易制劑成型的問題；②解決了 9g/丸太大，不方便服用問題，制成易于吞服的丸 粒；③解決了單次服用量過大問題，單次服用量由9g降低為3. 6?5g。從而改善該藥臨床 應用大蜜丸無法直接吞服、單次服用量為9g太大的弊端。另通過增加薄層色譜鑒別加強該 組合物的檢測，同時采用薄層色譜法改善了毒性成分烏頭堿的限量對照品斑點瞬間消失或 不出現(xiàn)的問題；采用高效液相色譜法對其主成分5-0-甲基維斯阿米醇苷測定方法進行了 改進；解決了以合格原材料投產(chǎn)而含量不達標，有效成分轉(zhuǎn)移率偏低的技術難點，修訂后的 工藝制備方法及質(zhì)量控制方法，不僅適用于工業(yè)化生產(chǎn)，同時也為臨床用藥提供了一種安 全有效的控制方法。
[0043] 本發(fā)明的制備方法簡單易行，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)；檢測方法專屬性較強，重現(xiàn)性 好，經(jīng)方法學驗證，其準確性高，同時為工業(yè)化生產(chǎn)提供了一種科學、準確的檢測方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0044] 圖1是本發(fā)明荊芥鑒別薄層色譜圖；
[0045] 圖2是本發(fā)明香附鑒別薄層色譜圖；
[0046] 圖3是本發(fā)明羌活和獨活鑒別薄層熒光色譜圖；
[0047] 圖4是本發(fā)明羌活和獨活鑒別薄層色譜圖；
[0048] 圖5是本發(fā)明桂枝鑒別薄層色譜圖；
[0049] 圖6是本發(fā)明烏頭堿限量檢查薄層色譜圖；
[0050] 圖7是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷紫外最大吸收光譜圖；
[0051] 圖8是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷含量標準曲線圖；
[0052] 圖9是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷含量空白溶液色譜圖；
[0053] 圖10是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品色譜圖；
[0054] 圖11是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷含量樣品色譜圖；
[0055] 圖12是本發(fā)明5-0-甲基維斯阿米醇苷含量陰性對照色譜圖。

【具體實施方式】
[0056] 實施例1水蜜丸的制備方法
[0057] (a)取去頭尾烏梢蛇85. 8g，荊芥85. 8g，防風85. 8g，醋香附68. 2g，獨活68. 2g， 土鱉蟲68.2g，威靈仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龍51.2g，制川烏34g，制草烏 34g，破碎成粗粉；
[0058] (b)滅菌：取上述粗粉鋪于全身帶孔的托盤內(nèi)，粗粉厚度為5cm，設置溫度為55°C， 保溫2小時；
[0059] (c)細粉碎：將滅菌后的藥材粗粉置粉碎機內(nèi)粉碎成細粉，過100目篩，并批混45 分鐘，混勻；
[0060] ⑷煉蜜：將生蜜進行煉制，去浮沫、死蜂和雜質(zhì)，制成50%的煉蜜，備用；
[0061] (e)制丸：用80%的藥粉與濃度50%煉蜜合挖，每100g粉末用50%煉蜜42g，壓 制成〇. 15g的丸模，鋪于托盤內(nèi)，厚度為不超過2cm，經(jīng)47°C干燥，檢測丸模水分小于8%時， 停止干燥，室溫晾12小時，將丸模倒入泛丸鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時 交替添加蜜水和藥粉操作，當20%泛丸藥粉全部泛盡后，撒入少許活性炭粉末，使活性炭均 勻分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥時先將干燥空間溫度迅速升至80°C， 并在80°C保溫lOmin，中間翻盤1次，然后將溫度降至55°C干燥沖間進行翻盤；當水分在 12%以下時停止干燥，室溫晾丸24小時后，將成丸倒入拋光鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi) 形成滾動運動時加入少許蟲白蠟粉末進行拋光，室溫晾丸24小時后包裝，每袋裝5. 0g。
[0062] 實施例2水蜜丸的制備方法
[0063] (a)取去頭尾烏梢蛇85. 8g，荊芥85. 8g，防風85. 8g，醋香附68. 2g，獨活68. 2g， 土鱉蟲68.2g，威靈仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龍51.2g，制川烏34g，制草烏 34g，破碎成粗粉；
[0064] (b)滅菌：取上述粗粉鋪于全身帶孔的托盤內(nèi)，粗粉厚度為5cm，設置溫度為50°C， 保溫3小時；
[0065] (c)細粉碎：將滅菌后的藥材粗粉置粉碎機內(nèi)粉碎成細粉，過100目篩，并批混45 分鐘，混勻；
[0066] ⑷煉蜜：將生蜜進行煉制，去浮沫、死蜂和雜質(zhì)，制成45%的煉蜜，備用；
[0067] (e)制丸：用80%的藥粉與濃度45%煉蜜合挖，每100g粉末用45%煉蜜40g，壓 制成0. 15g的丸模，鋪于托盤內(nèi)，厚度為不超過2cm，經(jīng)45°C干燥，檢測丸模水分小于8%時， 停止干燥，室溫晾12小時，將丸模倒入泛丸鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時 交替添加蜜水和藥粉操作，當20%泛丸藥粉全部泛盡后，撒入少許活性炭粉末，使活性炭均 勻分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥時先將干燥空間溫度迅速升至80°C， 并在80°C保溫lOmin，中間翻盤1次，然后將溫度降至50°C干燥沖間進行翻盤；當水分在 12%以下時停止干燥，室溫晾丸24小時后，將成丸倒入拋光鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi) 形成滾動運動時加入少許蟲白蠟粉末進行拋光，室溫晾丸24小時后包裝，每袋裝5. 0g。 [0068] 實施例3水蜜丸的制備方法
[0069] (a)取去頭尾烏梢蛇85. 8g，荊芥85. 8g，防風85. 8g，醋香附68. 2g，獨活68. 2g， 土鱉蟲68.2g，威靈仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龍51.2g，制川烏34g，制草烏 34g，破碎成粗粉；
[0070] (b)滅菌：取上述粗粉鋪于全身帶孔的托盤內(nèi)，粗粉厚度為5cm，設置溫度為60°C， 保溫1小時；
[0071] (c)細粉碎：將滅菌后的藥材粗粉置粉碎機內(nèi)粉碎成細粉，過100目篩，并批混45 分鐘，混勻；
[0072] (d)煉蜜：將生蜜進行煉制，去浮沫、死蜂和雜質(zhì)，制成55%的煉蜜，備用；
[0073] (e)制丸：用80%的藥粉與濃度55%煉蜜合挖，每100g粉末用55%煉蜜45g，壓 制成0. 15g的丸模，鋪于托盤內(nèi)，厚度為不超過2cm，經(jīng)50°C干燥，檢測丸模水分小于8%時， 停止干燥，室溫晾12小時，將丸模倒入泛丸鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時 交替添加蜜水和藥粉操作，當20%泛丸藥粉全部泛盡后，撒入少許活性炭粉末，使活性炭均 勻分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥時先將干燥空間溫度迅速升至80°C， 并在80°C保溫10min，中間翻盤1次，然后將溫度降至60°C干燥沖間進行翻盤；當水分在 12%以下時停止干燥，室溫晾丸24小時后，將成丸倒入拋光鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi) 形成滾動運動時加入少許蟲白蠟粉末進行拋光，室溫晾丸24小時后包裝，每袋裝5. 0g。
[0074] 實施例4按本發(fā)明所述的一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法制備的丸劑 的檢測方法，包括荊芥、香附、羌活、獨活、桂枝的薄層鑒別方法、毒性成分烏頭堿限量檢查 方法、防風中5-0-甲基維斯阿米醇苷含量測定方法：
[0075] 其中所述的荊芥的薄層鑒別具體步驟如下：
[0076] 取本品10g，研細，加乙酸乙酯40ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作 為供試品溶液，另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照藥材溶液，照中國藥 典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以30°C石油醚：乙酸乙酯=4:1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈 下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0077] 其中所述的香附的薄層鑒別具體步驟如下：
[0078] 取本品15g，研細，加乙醚50ml，浸漬1小時，超聲處理10分鐘，濾過，濾液揮干，殘 渣加丙酮lml使溶解，作為供試品溶液，另取α-香附酮對照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作為對照品溶液，照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品 溶液5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯17:3 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0079] 本發(fā)明所述桂枝的薄層鑒別具體步驟如下：
[0080] (a)取本品15g，研細，加乙酸乙脂10ml，回流提取30分鐘，濾過，濾過，濾液濃縮至 lml,作為供試品溶液；
[0081] (b)對照品溶液的制備：取肉桂酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0082] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸 取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，在254nm紫外光燈下看熒光，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0083] 上述桂枝的薄層鑒別方法曾按2004年8月出版的遼寧中醫(yī)藥雜志第8期中收載 的檳榔七味丸質(zhì)量標準中的肉桂的薄層鑒別方法，樣品采用甲醇超聲提取，堿性條件下乙 醚除雜，酸性條件下乙醚提取有效成分，本發(fā)明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1為展開 劑操作，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置無斑點出現(xiàn)；將樣品的處理方法采用乙酸 乙酯直接回流制備，展開劑采用環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑點清晰，同法制備 的陰性無干擾。
[0084] 本發(fā)明所述的羌活和獨活的薄層鑒別具體步驟如下：
[0085] (a)取本品15g，研細，加乙醚80ml及1%氫氧化鈉溶液30ml，加熱回流1小時，濾 過，分取乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液；
[0086] (b)對照品溶液的制備：取獨活與羌活對照藥材各lg，加乙醚20ml及1 %氫氧 化鈉溶液l〇ml，同法分別制成對照藥材溶液，另取羌活醇對照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
[0087] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取 上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在 與獨活對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以茴香醛試液，在105°C 加熱至顯色，供試品色譜中，在與羌活對照藥材及羌活醇對照品色譜相應的位置上，應顯相 同顏色的斑點；
[0088] 上述羌活和獨活的薄層鑒別其展開系統(tǒng)參考2006年7月山西中醫(yī)學院學報第5 期出版的香樟風寒熨劑的薄層鑒別中獨活的薄層鑒別的展開系統(tǒng)："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展開系統(tǒng)操作，供試品中的斑點分離度不好，將展開 系統(tǒng)以石油醚30°C ):乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展開，在熒光及顯色劑不同的 觀察條件下，供試品色譜中，羌活與獨活兩種藥材的有效成分均能有效分離，現(xiàn)象明顯，易 于判斷。
[0089] 本發(fā)明所述的烏頭堿限量檢查具體步驟如下：
[0090] 取本品適量，研細，取10. 4g，加氨試液10ml，拌勻，放置1小時，加乙醚50ml，振 搖1小時，放置24小時，濾過，濾渣用乙醚10ml洗滌，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘渣加 無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，精密 吸取供試品溶液8 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點。
[0091] 上述烏頭堿限量檢查采用原標準的展開系統(tǒng)"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"與原顯色劑"改良碘化鉍鉀"，結(jié)果對照品不出現(xiàn)斑點或出現(xiàn)瞬間就消失的斑點，致使生 產(chǎn)檢驗無法判斷其產(chǎn)品是否為合格產(chǎn)品，通過對比性研究，現(xiàn)采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展開劑，以稀碘化鉍鉀試液顯色解決了對照品斑點的問題，易于生產(chǎn)實際對產(chǎn)品的 分析判斷。
[0092] 本發(fā)明所述的防風含量采用高效液相色譜法測定步驟如下：
[0093] (a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水 =15 :85為流動相；檢測波長為254nm，理論板數(shù)按5-0-甲基維斯阿米醇苷峰計算應不低 于 3000 ;
[0094] (b)對照品溶液的制備，取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0095] (c)供試品溶液的制備，取重量差異或裝量差異項下的本品，研細，稱取2. 8g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，稱定重量，水浴加熱回流1?3小時，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸至近干，殘渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱上，該中性氧化鋁的粒度100目、用量7g，柱內(nèi)徑 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0096] (d)測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀， 測定，即得；
[0097] 本品含防風以5-0-甲基維斯阿米醇苷（C22H280 1Q)計，每袋不得少于0. 85mg。
[0098] 上述含量測定方法中，供試品的制備方法按原乙醚除雜，正丁醇超聲提取制備樣 品，其藥材中5-0-甲基維斯阿米醇苷轉(zhuǎn)移率為65%左右，致使合格的藥材生產(chǎn)出不合格的 產(chǎn)品，采用中性氧化鋁柱80%甲醇洗脫的處理方法，其藥材轉(zhuǎn)移率達95%以上。
[0099] 實施例5按本發(fā)明所述的一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法制備的丸劑 的檢測方法，包括荊芥、香附、羌活、獨活、桂枝的薄層鑒別方法、毒性成分烏頭堿限量檢查 方法、防風中5-0-甲基維斯阿米醇苷含量測定方法：
[0100] 其中所述的荊芥的薄層鑒別具體步驟如下：
[0101] 取本品l〇g，研細，加乙酸乙酯40ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作 為供試品溶液，另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照藥材溶液，照中國藥 典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以45°C石油醚：乙酸乙酯=4:1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈 下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0102] 其中所述的香附的薄層鑒別具體步驟如下：
[0103] 取本品15g，研細，加乙醚50ml，浸漬1小時，超聲處理10分鐘，濾過，濾液揮干，殘 渣加丙酮lml使溶解，作為供試品溶液，另取α-香附酮對照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作為對照品溶液，照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品 溶液5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以75°C石油醚：乙酸乙酯17:3 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0104] 本發(fā)明所述桂枝的薄層鑒別具體步驟如下：
[0105] (a)取本品15g，研細，加乙酸乙脂20ml，回流提取45分鐘，濾過，濾過，濾液濃縮至 lml,作為供試品溶液；
[0106] (b)對照品溶液的制備：取肉桂酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0107] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸 取上述兩種溶液各8 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，在254nm紫外光燈下看熒光，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0108] 上述桂枝的薄層鑒別方法曾按2004年8月出版的遼寧中醫(yī)藥雜志第8期中收載 的檳榔七味丸質(zhì)量標準中的肉桂的薄層鑒別方法，樣品采用甲醇超聲提取，堿性條件下乙 醚除雜，酸性條件下乙醚提取有效成分，本發(fā)明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1為展開 劑操作，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置無斑點出現(xiàn)；將樣品的處理方法采用乙酸 乙酯直接回流制備，展開劑采用環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑點清晰，同法制備 的陰性無干擾。
[0109] 本發(fā)明所述的羌活和獨活的薄層鑒別具體步驟如下：
[0110] (a)取本品15g，研細，加乙醚80ml及1%氫氧化鈉溶液40ml，加熱回流1小時，濾 過，分取乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液；
[0111] (b)對照品溶液的制備：取獨活與羌活對照藥材各lg，加乙醚20ml及1 %氫氧 化鈉溶液l〇ml，同法分別制成對照藥材溶液，另取羌活醇對照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 8mg的溶液，作為對照品溶液；
[0112] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取 上述三種溶液各8ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以45°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在 與獨活對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以茴香醛試液，在105°C 加熱至顯色，供試品色譜中，在與羌活對照藥材及羌活醇對照品色譜相應的位置上，應顯相 同顏色的斑點；
[0113] 上述羌活和獨活的薄層鑒別其展開系統(tǒng)參考2006年7月山西中醫(yī)學院學報第5 期出版的香樟風寒熨劑的薄層鑒別中獨活的薄層鑒別的展開系統(tǒng)："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展開系統(tǒng)操作，供試品中的斑點分離度不好，將展開 系統(tǒng)以石油醚45°C :乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展開，在熒光及顯色劑不同的觀 察條件下，供試品色譜中，羌活與獨活兩種藥材的有效成分均能有效分離，現(xiàn)象明顯，易于 判斷。
[0114] 本發(fā)明所述的烏頭堿限量檢查具體步驟如下：
[0115] 取本品適量，研細，取10. 4g，加氨試液10ml，拌勻，放置2小時，加乙醚60ml，振 搖1小時，放置24小時，濾過，濾渣用乙醚10ml洗滌，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘渣加 無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，精密 吸取供試品溶液8 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點。
[0116] 上述烏頭堿限量檢查采用原標準的展開系統(tǒng)"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"與原顯色劑"改良碘化鉍鉀"，結(jié)果對照品不出現(xiàn)斑點或出現(xiàn)瞬間就消失的斑點，致使生 產(chǎn)檢驗無法判斷其產(chǎn)品是否為合格產(chǎn)品，通過對比性研究，現(xiàn)采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展開劑，以稀碘化鉍鉀試液顯色解決了對照品斑點的問題，易于生產(chǎn)實際對產(chǎn)品的 分析判斷。
[0117] 本發(fā)明所述的防風含量采用高效液相色譜法測定步驟如下：
[0118] (a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水 =15 :85為流動相；檢測波長為254nm，理論板數(shù)按5-0-甲基維斯阿米醇苷峰計算應不低 于 3000 ;
[0119] (b)對照品溶液的制備，取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0120] (c)供試品溶液的制備，取重量差異或裝量差異項下的本品，研細，稱取2. 8g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，稱定重量，水浴加熱回流1?3小時，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸至近干，殘渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱上，該中性氧化鋁的粒度160目、用量7g，柱內(nèi)徑 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0121] (d)測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀， 測定，即得；
[0122] 本品含防風以5-0-甲基維斯阿米醇苷（C22H280 1Q)計，每袋不得少于0. 85mg。
[0123] 上述含量測定方法中，供試品的制備方法按原乙醚除雜，正丁醇超聲提取制備樣 品，其藥材中5-0-甲基維斯阿米醇苷轉(zhuǎn)移率為65%左右，致使合格的藥材生產(chǎn)出不合格的 產(chǎn)品，采用中性氧化鋁柱80%甲醇洗脫的處理方法，其藥材轉(zhuǎn)移率達95%以上。
[0124] 實施例6按本發(fā)明所述的一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法制備的丸劑 的檢測方法，包括荊芥、香附、羌活、獨活、桂枝的薄層鑒別方法、毒性成分烏頭堿限量檢查 方法、防風中5-0-甲基維斯阿米醇苷含量測定方法：
[0125] 其中所述的荊芥的薄層鑒別具體步驟如下：
[0126] 取本品10g，研細，加乙酸乙酯40ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作 為供試品溶液，另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照藥材溶液，照中國藥 典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈 下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0127] 其中所述的香附的薄層鑒別具體步驟如下：
[0128] 取本品15g，研細，加乙醚50ml，浸漬1小時，超聲處理10分鐘，濾過，濾液揮干，殘 渣加丙酮lml使溶解，作為供試品溶液，另取α-香附酮對照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作為對照品溶液，照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品 溶液5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以90°C石油醚：乙酸乙酯17:3 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0129] 本發(fā)明所述桂枝的薄層鑒別具體步驟如下：
[0130] (a)取本品15g，研細，加乙酸乙脂30ml，回流提取60分鐘，濾過，濾過，濾液濃縮至 lml,作為供試品溶液；
[0131] (b)對照品溶液的制備：取肉桂酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0132] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸 取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，在254nm紫外光燈下看熒光，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0133] 上述桂枝的薄層鑒別方法曾按2004年8月出版的遼寧中醫(yī)藥雜志第8期中收載 的檳榔七味丸質(zhì)量標準中的肉桂的薄層鑒別方法，樣品采用甲醇超聲提取，堿性條件下乙 醚除雜，酸性條件下乙醚提取有效成分，本發(fā)明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1為展開 劑操作，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置無斑點出現(xiàn)；將樣品的處理方法采用乙酸 乙酯直接回流制備，展開劑采用環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑點清晰，同法制備 的陰性無干擾。
[0134] 本發(fā)明所述的羌活和獨活的薄層鑒別具體步驟如下：
[0135] (a)取本品15g，研細，加乙醚80ml及1 %氫氧化鈉溶液50ml，加熱回流1小時，濾 過，分取乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液；
[0136] (b)對照品溶液的制備：取獨活與羌活對照藥材各lg，加乙醚20ml及1 %氫氧 化鈉溶液l〇ml，同法分別制成對照藥材溶液，另取羌活醇對照品加乙酸乙酯制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液；
[0137] (c)色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取 上述三種溶液各l〇ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在 與獨活對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以茴香醛試液，在105°C 加熱至顯色，供試品色譜中，在與羌活對照藥材及羌活醇對照品色譜相應的位置上，應顯相 同顏色的斑點；
[0138] 上述羌活和獨活的薄層鑒別其展開系統(tǒng)參考2006年7月山西中醫(yī)學院學報第5 期出版的香樟風寒熨劑的薄層鑒別中獨活的薄層鑒別的展開系統(tǒng)："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展開系統(tǒng)操作，供試品中的斑點分離度不好，將展開 系統(tǒng)以石油醚60°C乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展開，在熒光及顯色劑不同的觀察 條件下，供試品色譜中，羌活與獨活兩種藥材的有效成分均能有效分離，現(xiàn)象明顯，易于判 斷。
[0139] 本發(fā)明所述的烏頭堿限量檢查具體步驟如下：
[0140] 取本品適量，研細，取10. 4g，加氨試液10ml，拌勻，放置3小時，加乙醚70ml，振 搖1小時，放置24小時，濾過，濾渣用乙醚10ml洗滌，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘渣加 無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，精密 吸取供試品溶液8 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點。
[0141] 上述烏頭堿限量檢查采用原標準的展開系統(tǒng)"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"與原顯色劑"改良碘化鉍鉀"，結(jié)果對照品不出現(xiàn)斑點或出現(xiàn)瞬間就消失的斑點，致使生 產(chǎn)檢驗無法判斷其產(chǎn)品是否為合格產(chǎn)品，通過對比性研究，現(xiàn)采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展開劑，以稀碘化鉍鉀試液顯色解決了對照品斑點的問題，易于生產(chǎn)實際對產(chǎn)品的 分析判斷。
[0142] 本發(fā)明所述的防風含量采用高效液相色譜法測定步驟如下：
[0143] (a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水 =15 :85為流動相；檢測波長為254nm，理論板數(shù)按5-0-甲基維斯阿米醇苷峰計算應不低 于 3000 ;
[0144] (b)對照品溶液的制備，取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0145] (c)供試品溶液的制備，取重量差異或裝量差異項下的本品，研細，稱取2. 8g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，稱定重量，水浴加熱回流3小時，放冷，再稱 定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸至近干，殘渣加甲醇 5ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱上，該中性氧化鋁的粒度200目、用量7g，柱內(nèi)徑1. 5cm，用 80%甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲 醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0146] (d)測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀， 測定，即得；
[0147] 本品含防風以5-0-甲基維斯阿米醇苷（C22H280 1Q)計，每袋不得少于0· 85mg。
[0148] 上述含量測定方法中，供試品的制備方法按原乙醚除雜，正丁醇超聲提取制備樣 品，其藥材中5-0-甲基維斯阿米醇苷轉(zhuǎn)移率為65%左右，致使合格的藥材生產(chǎn)出不合格的 產(chǎn)品，采用中性氧化鋁柱80%甲醇洗脫的處理方法，其藥材轉(zhuǎn)移率達95%以上。
[0149] 試驗例1 5-0-甲基維斯阿米醇苷含量檢測方法的方法學研究
[0150] 儀器：Agilentl200高效液相色譜儀（G1311A四元梯度泵、G1329A自動進樣器、 G1314B可變波長紫外檢測器、G1322A真空脫氣泵、G1316A柱溫箱、G2170B化學工作站）、賽 多利斯BP211D電子天平。
[0151] 試劑：乙腈（色譜純）、甲醇（分析純）、正丁醇（分析純）、水（純化水），其它試 劑均為分析純。
[0152] 對照品：5-0-甲基維斯阿米醇苷，供含量測定用，批號：111523-201007,中國食品 藥品生物制品檢定研究院提供。
[0153] 測定波長的選擇取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液適量，以溶劑為空白，在 200?400nm波長處掃描，確定的最大波長為254nm。結(jié)果見圖7。
[0154] 線性關系的考察取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品（176. Oug/ml)溶液精密吸取此 液lml、3ml、5ml、7ml、9ml分別至10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。再精密吸取10ul，分 別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標，5-0-甲基維斯阿米醇苷進樣量 (μ g)為橫坐標繪制標準曲線。結(jié)果見表1、附圖8。
[0155] 表1 5-0-甲基維斯阿米醇苷標準曲線測定結(jié)果
[0156]

【權(quán)利要求】
1. 一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法，其特征在于包括下列步驟： a) 破粗粉：稱取去頭尾烏梢蛇85. 8份，荊芥85. 8份，防風85. 8份，醋香附68. 2份，獨 活68. 2份，土鱉蟲68. 2份，威靈仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活51. 2份，地龍51. 2份，制川 烏34份，制草烏34份凈藥材破碎成粗粉； b) 滅菌：取上述粗粉鋪于全身帶孔的托盤內(nèi)，使物料溫度為50?60°C，保溫1?3小 時； c) 細粉碎：將滅菌后的藥材粗粉粉碎成細粉，過100目篩，并批混45分鐘，細粉備用； d) 煉蜜：將生蜜進行煉制，去浮沫、死蜂和其它雜質(zhì)，制成45?55%的煉蜜，備用； e) 制丸：將上述細粉加煉蜜輔料制成大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸或糊丸劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法，其特征在于：步驟（e) 中，水蜜丸的制備方法如下，用80%的藥粉與濃度50%煉蜜合坨，每100g粉末用50%煉蜜 40?45g,壓制成0. 15g的丸模，鋪于托盤內(nèi)，厚度為不超過2cm，經(jīng)45?50°C干燥，檢測 丸模水分小于8%時，停止干燥，室溫晾12小時，將丸模倒入泛丸鍋內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在 鍋內(nèi)形成滾動運動時交替添加蜜水和藥粉操作，當20%泛丸藥粉全部泛盡后，撒入少許活 性炭粉末，使活性炭均勻分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥時先將干燥空 間溫度迅速升至80°C，并在80°C保溫lOmin，中間翻盤1次，然后將溫度降至50?60°C干 燥；中間進行翻盤；當水分在12 %以下時停止干燥，室溫晾丸24小時后，將成丸倒入拋光鍋 內(nèi)，轉(zhuǎn)動鍋體使丸粒在鍋內(nèi)形成滾動運動時加入少許蟲白蠟粉末進行拋光，室溫晾丸24小 時后包裝，每袋裝5. 0g。
3. 按權(quán)利要求1或2所述的一種治療風寒濕邪中藥組合物的制備方法制備的丸劑的檢 測方法，包括荊芥的薄層鑒別，具體步驟如下： 取本品l〇g，研細，加乙酸乙酯40ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試 品溶液，另取荊芥對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照藥材溶液，照中國藥典2010 年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板 上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下 檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 還包括香附的薄層鑒別，具體步驟如下： 取本品15g，研細，加乙醚50ml，浸漬1小時，超聲處理10分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加 丙酮lml使溶解，作為供試品溶液，另取α -香附酮對照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶 液，作為對照品溶液，照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液 5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一娃膠G薄層板上，以60?90°C石油醚：乙酸乙酯17:3 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； 其特征在于：還包括桂枝的薄層鑒別，具體步驟如下： (a) 取本品15g，研細，加乙酸乙脂10?30ml，回流提取30?60分鐘，濾過，濾過，濾液 濃縮至lml，作為供試品溶液； (b) 對照品溶液的制備：取肉桂酸對照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶液，作 為對照品溶液； (c) 色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上 述兩種溶液各5?10 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，在254nm紫外光燈下看熒光，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 還包括羌活和獨活的薄層鑒別，具體步驟如下： (a) 取本品15g，研細，加乙醚80ml及1%氫氧化鈉溶液30?50ml，加熱回流1小時， 濾過，分取乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液； (b) 對照品溶液的制備：取獨活與羌活對照藥材各lg，加乙醚20ml及1 %氫氧化鈉溶 液l〇ml，同法分別制成對照藥材溶液，另取羌活醇對照品加乙酸乙酯制成每lml含0. 5? 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液； (c) 色譜條件與操作：照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述 三種溶液各5?10ul，分別點于同一娃膠G薄層板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯：甲 苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色 譜中，在與獨活對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以茴香醛試液， 在105°C加熱至顯色，供試品色譜中，在與羌活對照藥材及羌活醇對照品色譜相應的位置 上，應顯相同顏色的斑點； 還包括烏頭堿限量檢查，具體步驟如下： 取本品適量，研細，取10. 4g，加氨試液10ml，拌勻，放置1?3小時，加乙醚50?70ml， 振搖1小時，放置24小時，濾過，濾渣用乙醚10ml洗滌，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘渣加 無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，精密 吸取供試品溶液8μ 1、對照品溶液2μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點； 還包括采用高效液相色譜法測定防風含量，步驟如下： (a) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：水= 15 :85為流動相；檢測波長為254nm，理論板數(shù)按5-0-甲基維斯阿米醇苷峰計算應不低于 3000 ； (b) 對照品溶液的制備，取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成 每lml含60 μ g的溶液，即得； (c) 供試品溶液的制備，取重量差異或裝量差異項下的本品，研細，稱取2. 8g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，稱定重量，水浴加熱回流1?3小時，放冷，再稱 定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸至近干，殘渣加甲醇 5ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱上，該中性氧化鋁的粒度100?200目、用量7g，柱內(nèi)徑 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； (d) 測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
【文檔編號】G01N30/90GK104042824SQ201410299704
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月26日
【發(fā)明者】王士青, 隋義東, 崔延輝, 陳希, 曹曉平 申請人:長春人民藥業(yè)集團有限公司