糟醅中黃曲霉毒素b1的提取及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及糟醅中黃曲霉毒素B1的提取方法，屬于分析檢測領(lǐng)域。本發(fā)明提供一種糟醅中黃曲霉毒素B1的提取方法，包括如下步驟：稱取烘干的糟醅，過篩，加入甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮超聲波震蕩后過濾，取濾液備用，用二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮萃取濾液，收集二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮層并烘干即可。本方法可以快速準(zhǔn)確的從糟醅中提取出黃曲霉毒素B1，然后利用酶聯(lián)免疫法對提取出的黃曲霉毒素B1進(jìn)行檢測。本發(fā)明的提取和檢測方法能夠很好地應(yīng)用于糟醅中黃曲霉毒素B1的提取與檢測，為其研究提供了一條更好的途徑。
【專利說明】糟醅中黃曲霉毒素BI的提取及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析檢測領(lǐng)域，具體涉及糟醅中黃曲霉毒素BI的提取及檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃曲霉毒素(Af latoxin，AFT)主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類有毒的次生代謝產(chǎn)物，它廣泛存在于農(nóng)作物及食物中，黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。
[0003]白酒釀造主要是以糧食為原料，從而存在著被黃曲霉毒素BI污染的可能性，所以在白酒的釀造過程中做好對黃曲霉毒素BI的檢測尤為重要。現(xiàn)階段有關(guān)黃曲霉毒素BI的檢測主要集中在糧食和食品上，而白酒釀造過程中的酒糟是一種比較復(fù)雜的物質(zhì)，現(xiàn)有的檢測方法并不能完全適應(yīng)酒糟中黃曲霉毒素BI的檢測，所以建立一套準(zhǔn)確、成本低、操作簡便、快速且適應(yīng)白酒生產(chǎn)過程的毒素檢測方法，運(yùn)用于白酒釀造過程中黃曲霉毒素BI檢測，意義重大。
[0004]本方法可以快速準(zhǔn)確的從糟醅中提取出黃曲霉毒素BI然后利用酶聯(lián)免疫法(ELISA)對提取出的黃曲霉毒素BI進(jìn)行檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種糟醅中黃曲霉毒素BI的提取方法，該方法快速、準(zhǔn)確、易操作。
[0006]糟醅中黃曲霉毒素BI的提取方法，包括以下步驟:
[0007]a、預(yù)處理:稱取烘干的糟醅，過篩，在篩下物中加入溶劑A，超聲震蕩，過濾，濾液備用；其中，所述的溶劑A為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種；
[0008]b、萃取:用溶劑B萃取濾液，收集溶劑B相層，烘干后即得到黃曲霉毒素BI ;其中所述的溶劑B為二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中任意一種。
[0009]具體的，上述提取方法步驟a中所述的過篩為過20目篩。
[0010]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的溶劑A為甲醇水溶液。
[0011]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的甲醇水溶液體積濃度為45~85%。
[0012]進(jìn)一步優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的甲醇水溶液體積濃度為65%。
[0013]具體的，上述提取方法步驟a中糟醅與溶劑A的固液比為Ig: 7~10ml。
[0014]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中糟醅與溶劑A的固液比為Ig: 10ml。
[0015]具體的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩功率為120~200W。
[0016]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩功率為180W。
[0017]具體的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩時間為10~40min。
[0018]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩時間為30min。
[0019]優(yōu)選的，上述提取方法步驟b中所述的溶劑B為二氯甲烷。
[0020]最優(yōu)選的，上述提取方法中所述溶劑A為體積濃度65%的甲醇水溶液，超聲震蕩功率為180W，超聲震蕩時間為30min，所述溶劑B為二氯甲烷。
[0021]本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種黃曲霉毒素BI的檢測方法。該方法包括以下步驟:
[0022]①、通過上述的提取方法提取出黃曲霉毒素BI ；
[0023]②、在所得黃曲霉毒素BI中加入溶劑C，采用酶聯(lián)免疫法檢測黃曲霉毒素BI的含量；其中所述的溶劑C為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種。
[0024]優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中所述的甲醇水溶液體積濃度為40~80%。
[0025]進(jìn)一步優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中所述的甲醇水溶液體積濃度為50%。
[0026]優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中溶劑C的加入量為IOg糟醅對應(yīng)加入5~15ml。[0027]更優(yōu)選的，上述方法步驟②中溶劑C的加入量為IOg糟醅對應(yīng)加入10ml。
[0028]本方法利用了超聲波提取糟醅中黃曲霉毒素BI，不僅快速、準(zhǔn)確、易操作，而且取得的效果比國標(biāo)方法要好得多，從而使本方法能很好地適應(yīng)白酒的生產(chǎn)過程。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1不同震蕩方式的比較效果
[0030]圖2甲醇水溶液濃度對提取結(jié)果的影響
[0031]圖3提取溫度對提取結(jié)果的影響
[0032]圖4提取時間對提取結(jié)果的影響
[0033]圖5超聲波功率對提取結(jié)果的影響
【具體實(shí)施方式】
[0034]一種糟醅中黃曲霉毒素BI的提取方法，包括以下步驟:
[0035]a、預(yù)處理:稱取烘干的糟醅，過篩，在篩下物中加入溶劑A，超聲震蕩，過濾，濾液備用；其中，所述的溶劑A為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種；
[0036]b、萃取:用溶劑B萃取濾液，收集溶劑B相層，烘干后即得到黃曲霉毒素BI ;其中所述的溶劑B為二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中任意一種。
[0037]具體的，上述提取方法步驟a中所述的過篩為過20目篩。
[0038]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的溶劑A為甲醇水溶液。
[0039]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的甲醇水溶液體積濃度為45~85%。
[0040]進(jìn)一步優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中所述的甲醇水溶液體積濃度為65%。
[0041]具體的，上述提取方法步驟a中糟醅與溶劑A的固液比為Ig: 7~10ml。
[0042]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中糟醅與溶劑A的固液比為Ig: 10ml。
[0043]具體的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩功率為120~200W。
[0044]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩功率為180W。
[0045]具體的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩時間為10~40min。
[0046]優(yōu)選的，上述提取方法步驟a中超聲震蕩時間為15min。
[0047]優(yōu)選的，上述提取方法步驟b中所述的溶劑B為二氯甲烷。
[0048]最優(yōu)選的，上述提取方法所述溶劑A為體積濃度65%的甲醇水溶液，超聲震蕩功率為180W，超聲震蕩時間為30min，所述溶劑B為二氯甲烷。[0049]一種黃曲霉毒素BI的檢測方法，包括以下步驟:
[0050]①通過上述的提取方法提取出黃曲霉毒素BI ；
[0051]②在所得黃曲霉毒素BI中加入溶劑C，采用酶聯(lián)免疫法檢測黃曲霉毒素BI的含量；其中所述的溶劑C為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種。
[0052]優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中所述的甲醇水溶液體積濃度為40~80%。
[0053]進(jìn)一步優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中所述的甲醇水溶液體積濃度為50%。
[0054]優(yōu)選的，上述檢測方法步驟②中溶劑C的加入量為原料IOg糟醅對應(yīng)加入5~15ml ο
[0055]更優(yōu)選的，上述方法步驟②中溶劑C的加入量為原料IOg糟醅對應(yīng)加入10ml。
[0056]由于糟醅中混雜著酸、醇等復(fù)雜物質(zhì)，與普通糧食的成分及含量不同，單純的國標(biāo)法只適用于糧食作物，卻不完全適用于檢測糟醅中的黃曲霉毒素BI。本發(fā)明的發(fā)明人針對糟醅的特殊成分，做了大量嘗試和探索發(fā)現(xiàn)，采用甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮作為提取溶劑，配合超聲震蕩，可以很好地適用于提取糟醅中黃曲霉毒素BI，優(yōu)選采用甲醇水溶液，效果較好同時無毒。 [0057]本發(fā)明技術(shù)方案的提出是基于以下原理:從糟醅中提取黃曲霉毒素BI主要基于液液萃取的原理，即使用一定濃度的甲醇溶液浸取糟醅中的黃曲霉毒素BI，由于黃曲霉毒素BI在二氯甲烷中溶解度大于甲醇溶液，故再使用二氯甲烷對黃曲霉毒素BI進(jìn)行萃取，重復(fù)一次，以確保充分萃??；再者黃曲霉毒素BI的沸點(diǎn)要遠(yuǎn)高于二氯甲烷，對萃取后的二氯甲烷相進(jìn)行水浴烘干，則可以除去一些低沸點(diǎn)的雜質(zhì)，最后用一定濃度的甲醇溶液溶解烘干后的物質(zhì)，即為待測樣。
[0058]試驗(yàn)例I震蕩方式的選擇
[0059]糟醅烘干粉碎后，過20目篩，分別準(zhǔn)確稱取IOg樣品于三只250mL錐形瓶中，編號
①、②、③，分別加入IOOmL提取液，①號錐形瓶室溫超聲提取30min，②號錐形瓶室溫漩渦振蕩30min,③號錐形瓶室溫超聲鏇潤交替進(jìn)行30min,用快速定性濾紙過濾于錐形瓶中，吸取IOmL濾液于分液漏斗中，加入40mL 二氯甲烷，加塞振搖5min，靜置分層(約30min)，放出下層相，再加入IOmL 二氯甲烷于分液漏斗中，重復(fù)提取，合并二氯甲烷相，經(jīng)盛有約20g預(yù)先用二氯甲烷潤濕的無水Na2SO4濾紙漏斗過濾于錐形瓶中，65°C水浴烘干，冷卻后加入IOmL甲醇-水(I: 1)，即為待測樣品，用酶聯(lián)免疫法測定，平行實(shí)驗(yàn)三次，確定最佳提取方式，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。
[0060]由圖1可以看出采用超聲波震蕩提取黃曲霉毒素BI效果明顯高于其它兩種震蕩方式。
[0061]試驗(yàn)例2單因素試驗(yàn)
[0062]取IOg烘干后的糟醅磨碎，過20目篩，選取提取液甲醇濃度、提取時間、超聲波提取功率、提取溫度四個因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。
[0063]表1單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)
【權(quán)利要求】
1.糟醅中黃曲霉毒素BI的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: a、預(yù)處理:稱取烘干的糟醅，過篩，在篩下物中加入溶劑A，超聲震蕩，過濾，濾液備用；其中，所述的溶劑A為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種； b、萃取:用溶劑B萃取濾液，收集溶劑B相層，烘干后即得到黃曲霉毒素BI;其中所述的溶劑B為二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中任意一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟a中，所述的溶劑A為甲醇水溶液，甲醇水溶液體積濃度為45~85%，優(yōu)選為65%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟a中，糟醅與溶劑A的固液比為Ig: 7 ~IOmL,優(yōu)選為 Ig: 10mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟a中，超聲震蕩功率為120~200W，優(yōu)選為 180W。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟a中，超聲震蕩時間為10~40min,優(yōu)選為 30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟b中，所述的溶劑B為二氯甲烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述溶劑A為體積濃度65%的甲醇水溶液，超聲震蕩功率為180W，超聲震蕩時間為30min，所述溶劑B為二氯甲烷。
8.一種黃曲霉毒素B I的檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: ①、根據(jù)權(quán)利要求1~7所述的提取方法提取出黃曲霉毒素BI； ②、在所得黃曲霉毒素BI中加入溶劑C，采用酶聯(lián)免疫法檢測黃曲霉毒素BI的含量；其中所述的溶劑C為甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮中任意一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于:步驟②中所述的甲醇水溶液體積濃度為40~80%，優(yōu)選為50%。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于:步驟②中溶劑C的加入量為IOg糟醅對應(yīng)加入5~15ml，優(yōu)選為10ml。
【文檔編號】G01N33/53GK103896959SQ201410116242
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月26日
【發(fā)明者】胡竹行, 沈才洪, 敖宗華, 王松濤, 王明, 廖源, 周軍 申請人:瀘州品創(chuàng)科技有限公司