一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚a的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，該方法中雙酚A在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2作用下發(fā)生聚集，形成雙酚A聚合物，對巰基苯酚修飾納米金表面的酚羥基與雙酚A聚合物中的酚羥基鄰位形成共價鍵而使對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，聚集后對巰基苯酚修飾納米金的表面狀態(tài)改變，表面狀態(tài)的改變其等離子共振吸收，表現為520nm處吸收變小，720nm處吸收迅速變大，以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，建立雙酚A的標準曲線，通過雙酚A的標準曲線可以準確測量實際雙酚A樣品的濃度。該方法能對雙酚A進行半定量和定量分析，成本低，且具有檢出通量高、檢測范圍廣、準確和速度快的優(yōu)點。
【專利說明】一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，屬于食品和日常用品安全檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]雙酚A(Bisphenol A，縮寫為BPA)，一種有機化合物，具有兩個酚官能團。在工業(yè)上雙酚A被用來合成聚碳酸酯(PC)和環(huán)氧樹脂等材料，60年代以來就被用于制造塑料(奶)瓶、幼兒用的吸口杯、食品和飲料(奶粉)罐內側涂層。后來，人們發(fā)現BPA能導致內分泌失調，威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。2012年9月24日，美國華盛頓州立大學等機構刊登其研究，公布其在獼猴進行的實驗結果，證實雙酚A會影響獼猴雌性后代的生殖系統(tǒng)，導致卵子染色體異常(Hunt，Patricia A.et.al.PNAS.2012，109(43) 17525-17530)。雖然目前各國已先后禁止了雙酚A在嬰兒奶瓶中的應用，但是在日常成人飲水杯，熱敏紙，食品包裝材料等領域仍有著廣泛的應用。由于雙酚A的大量使用，環(huán)境中雙酚A也普遍存在，如自然水體，雨水等都能檢出不同濃度的雙酚A。
[0003]目前國內僅出臺了聚合物材料中雙酚A檢出的國家標準，國標采用高效液相色譜來實現雙酚A的檢出，檢出靈敏可靠，然而檢出前處理步驟麻煩，依賴大型儀器，檢測通量不高。對于雙酚A這樣普遍存在的環(huán)境污染物而言，快速高通量篩查技術可與高效液相色譜技術形成互補，實現大規(guī)模檢測和樣品篩查?？焖贆z測技術是檢測領域的一塊很有競爭力的方向，快速檢測技術具有檢測方法簡單易行，檢測時間短，不需要大型儀器，甚至無需依賴儀器。盡管快速檢測由于靈敏度和特異性方面的限制，不能作為判定樣品安全性的最終依據；但作為發(fā)現問題的第一步，它具有不可替代的作用。事實上，一些突發(fā)食源性事件的現場調查也往往以快速檢測作為篩查的第一步。目前雙酚A快速檢測技術還處于初步發(fā)展階段，比較常用的有抗體標記納米金試紙條法，利用納米金標記抗體識別雙酚A，抗體雙酚A復合物被捕獲后形成紅色條帶實現檢測。該方法只能提供有或無的結果，而且檢測使用抗體成本較高，無法真正用于大規(guī)模篩查。因此，開發(fā)一種具有定量能力、成本低廉且檢測通量高的雙酚A檢測方法十分必要。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明提供了一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，該方法能對雙酚A進行半定量和定量分析，成本低，且具有檢出通量高、檢測范圍廣、準確和速度快的優(yōu)點。
[0005]實現本發(fā)明目的所采用的技術方案為:
[0006]一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，將對巰基苯酚溶液加入到納米金溶液中，避光孵育至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠，以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含不同已知濃度的雙酚A溶液的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y(tǒng)=kx+b，以實際雙酚A樣品為被檢測物，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的I值中，計算出X值，再根據X值計算出實際雙酚A樣品的濃度。
[0007]所述的對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，包括如下步驟:
[0008]I)對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備:
[0009]①按摩爾比對巰基苯酚:納米金=0.1:1?100:1，將濃度為I?20nM的納米金溶液加入對巰基苯酚溶液中至對巰基苯酚溶液的終濃度為0.1nM?2 μ Μ，混合均勻后，避光孵育至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠；
[0010]2)建立雙酚A的標準工作曲線:
[0011]①在酶標儀微孔板的7個以上的孔中分別加入7組以上的相同體積、不同已知濃度的標準雙酚A溶液，再分別加入催化量的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，過量的H2O2溶液和過量的對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為7個以上的實驗組，其中7個以上的實驗組中加入的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠完全相同，在另一個微孔板的一個孔中，加入與各實驗組中雙酚A溶液等體積的水，再加入與各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為陰性對照組，10?42°C孵育至實驗組與陰性對照組相比有色差后，檢測各實驗組中含已知濃度的雙酚A的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；
[0012]②以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據各實驗組檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y(tǒng)=kx+b ；
[0013]3)實際雙酚A樣品濃度的測定:
[0014]①在酶標儀微孔板的一個孔中先加入與步驟2)中各實驗組中雙酚A溶液等體積的實際雙酚A樣品，再加入與步驟2)中各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，10?42°C孵育至出現色差后，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出X值，再根據X值計算出實際雙酚A樣品的濃度。
[0015]所述納米金溶液中納米金的粒徑為5_50nm。
[0016]所述過氧化物酶為辣根過氧化物酶，過氧化物模擬酶為氯化血紅素。
[0017]所述辣根過氧化物酶或過氧化物模擬酶的終濃度為0.2ηΜ-2 μ Μ。
[0018]所述H2O2溶液的終濃度為0.00006%-0.6%，該濃度為體積百分比濃度。
[0019]在上述技術方案中，過氧化物酶或過氧化物模擬酶是催化劑，用來催化雙酚A聚合，只需要使用催化量的即能達到目的，H2O2是氧化劑，用來氧化雙酚A聚合，H2O2 一定要確保過量，確保加入的標準雙酚A能完全被氧化聚合，對巰基苯酚修飾納米金溶膠是檢測物，與雙酚A聚合物發(fā)生共聚合作用，為了使加入的標準雙酚A被完全檢測出來，對巰基苯酚修飾納米金溶膠的量與雙酚A聚合物的量相比要確保過量。在實際操作過程中，繪制雙酚A的標準曲線時，由于雙酚A的量是已知的，H2O2的量是可以根據雙酚A的量來確定的，對巰基苯酹修飾納米金溶膠的量與雙酹A聚合物的量相比應確保是過量的，同時還應確保對巰基苯酚修飾納米金溶膠對雙酚A的響應靈敏度在數量級上保持穩(wěn)定并且在520nm和720nm處光密度之比值的變化幅度不超過10%。
[0020]由上述技術方案可知，該方法中雙酚A在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2作用下發(fā)生聚集，形成雙酚A聚合物，對巰基苯酚修飾納米金表面的酚羥基與雙酚A聚合物中的酚羥基鄰位形成共價鍵而使對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，聚集后對巰基苯酚修飾納米金的表面狀態(tài)改變，表面狀態(tài)的改變其等離子共振吸收，表現為520nm處吸收變小，720nm處吸收迅速變大。以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，建立雙酚A的標準曲線，通過雙酚A的標準曲線可以準確測量實際雙酚A樣品的濃度，即對雙酚A樣品進行定量分析，不僅僅是簡單的定性分析。
[0021]與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果和優(yōu)點在于:
[0022]I)該方法中用對巰基苯酚修飾納米金溶膠作為檢測物，而制備對巰基苯酚修飾納米金溶膠的方法簡單，所使用的試劑均為常用試劑，價格低廉，因而用對巰基苯酚修飾納米金溶膠作為檢測物使該方法檢測的成本低。
[0023]2)該方法通過建立標準曲線對雙酚A進行定量分析，標準曲線的線性范圍為
0.5?32mg/L，當雙酚A的濃度在此線性范圍內時，采用該方法進行檢測，檢測結果十分準確、可靠，當不在此范圍內，稍有偏差，可進行半定量分析，而且操作簡單，快速，靈敏度高，檢出限低，。
[0024]3)該方法檢測時所使用的試劑均為普通試劑，所使用的測量儀器為酶標儀，酶標儀為常用儀器，因此，該方法的檢測成本低。
[0025]4)該方法可同時進行大量的雙酚A樣品分析，檢出通量高。
[0026]5)該方法制備對巰基苯酚修飾納米金溶膠的方法簡單，可在檢測檢測現場隨時制備，不需要事先制備存放，而且對巰基苯酚修飾納米金溶膠對含有金屬離子的雙酚A樣品，特別是含有鉄系離子的雙酚A樣品可以進行準確地測量，不會因為金屬離子的存在對檢測造成干擾，檢測范圍廣。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1為對巰基苯酚修飾納米金溶膠的透射電鏡(TEM)圖。
[0028]圖2為對巰基苯酚修飾納米金溶膠與雙酚A反應的透射電鏡(TEM)圖。
[0029]圖3為實施例2制備的對巰基苯酚修飾納米金溶膠檢測雙酚A的標準曲線。
【具體實施方式】
[0030]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0031]實施例1
[0032]I)對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備:
[0033]將lmL20 μ M對巰基苯酚溶液加入到IOOmLlOnM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，混合均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得對巰基苯酚修飾納米金溶膠，用透射電鏡圖觀察對巰基苯酚修飾納米金溶膠，對巰基苯酚修飾納米金溶膠的透射電鏡圖如圖1所示，由圖1可知納米金修飾后沒有發(fā)生聚集，可以作為檢測物使用；
[0034]2)對巰基苯酚修飾納米金溶膠對雙酚A時的響應:
[0035]在40 μ L30mg/L雙酚A溶液中加入5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L體積百分濃度為0.3%的H2O2溶液，200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，用透射電鏡圖觀察雙酚A與對巰基苯酚修飾納米金溶膠的反應，雙酚A與對巰基苯酚修飾納米金溶膠反應的透射電鏡圖如圖2所示，由圖2可知，雙酚A在辣根過氧化物酶和H2O2共同存在的作用下，與對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生了相互作用，使得對巰基苯酚修飾納米發(fā)生了聚集，對巰基苯酚修飾納米對雙酚A具有信號響應。
[0036]實施例2
[0037]I)對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備:
[0038]將lmL20 μ M對巰基苯酚溶液加入到IOOmLlOnM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，混合均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得對巰基苯酚修飾納米金溶膠；
[0039]2)建立雙酚A的標準曲線:
[0040]①在酶標儀微孔板的7個孔中分別加入40μ L3.125mg/L、6.25mg/L、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、lOOmg/L和200mg/L雙酚A溶液，再分別加入5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L體積百分比濃度為0.3%Η202溶液和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為7個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L水,5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液,5 μ L體積百分比濃度為0.3%Η202溶液和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為陰性對照組，37°C孵育至各實驗組與陰性對照組相比有明顯色差后，檢測各實驗組中含已知濃度的雙酚A的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；
[0041]②不同已知濃度的標準雙酚A溶液的檢測結果如圖2所示，以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據各實驗組測得的數據繪圖，擬合后得到雙酚A`的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系為:y=0.0784x+0.22，R2=0.9921，其中，y為對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度的比值，x為以2為底雙酚A濃度的對數，0.0784為標準曲線的斜率，0.22為標準曲線與y軸的截距，雙酚A濃度的線性范圍為0.5~32mg/L，線性良好，可用于雙酚A的定量分析，結果準確、可靠。
[0042]3)實際樣品的測試
[0043]I〇在酶標儀微孔板的一個孔中先加入40 μ L實際雙酹A樣品,5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L體積百分比濃度為0.3%Η202溶液和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出x值，x值即為實際雙酚A樣品的濃度。
[0044]實施例3
[0045]I)對巰基苯酹修飾納米金溶膠的制備:
[0046]將4組ImL0.05 μ MU μ MUO μ Μ、100 μ M對巰基苯酚溶液分別加入到4組100mLlnM、5nM、10nM和20nM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，攪拌均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得4組對巰基苯酚修飾納米金溶膠；[0047]2)按對巰基苯酚與納米金的不同摩爾比制備的對巰基苯酚修飾納米金溶膠對雙酚A的響應:
[0048]在酶標儀微孔板的4個孔中分別加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L體積百分濃度為0.3%的H2O2溶液，再分別加入200 μ L步驟I)中制備的4組對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為4個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L體積百分比濃度為0.3%的Η202溶液，再加入200 μ L /K，作為空白對照組，370C孵育5?30分鐘，檢測各實驗組中對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；
[0049]檢測的結果顯示，按對巰基苯酚與納米金的不同摩爾比制備的對巰基苯酚修飾納米金溶膠對雙酚A均有良好響應，且720nm與520nm處光密度的比值遠大于空白對照組。實施例4
[0050]I)對巰基苯酹修飾納米金溶膠的制備:
[0051]將lmL20 μ M對巰基苯酚溶液加入到IOOmLlOnM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，混合均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得對巰基苯酚修飾納米金溶膠；
[0052]2)不同濃度的辣根過氧化物酶溶液對雙酚A的響應:
[0053]在酶標儀微孔板的5個孔中分別加入40μ L200mg/L雙酚A溶液，5μ L體積百分濃度0.3%Η202溶液，然后分別加入5 μ L0.01 μ Μ、0.1 μ Μ、I μ Μ、10 μ Μ、100 μ M辣根過氧化物酶溶液，再分別加入200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為5個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L體積百分比濃度0.3%Η202溶液，5 μ L水和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為空白對照組，37°C孵育2-180分，辣根過氧化物酶加入的則量多孵育時間短，加入的量少則孵育時間長，檢測各實驗組中對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；
[0054]檢測的結果顯示，不同濃度的辣根過氧化物酶溶液對雙酚A均有良好的響應，且720nm與520nm處光密度的比值遠大于空白對照組。
[0055]實施例5
[0056]將4組lmL20 μ M對巰基苯酚溶液分別加入到100mL5nM納米金粒徑分別為5nm、13nm、30nm、50nm的納米金溶液中，混合均勻后,得到4組對巰基苯酹修飾納米金溶膠；
[0057]2)不同粒徑的納米金溶液制備的對巰基苯酹修飾納米金溶膠對雙酹A的響應:
[0058]在酶標儀微孔板的4個孔中分別加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L體積百分濃度0.3%Η202溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，再分別加入200 μ L步驟I)中制備的四組對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為四個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L體積百分濃度0.3%Η202溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液和200 μ L水作為空白對照組，IO0C孵育5?30分鐘，檢測各實驗組中對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；
[0059]檢測的結果顯示，不同粒徑的納米金溶液制備的對巰基苯酚修飾納米金溶膠對雙酚A均有良好的響應，且720nm與520nm處光密度的比值遠大于空白對照組。
[0060]實施例6
[0061]I)對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備:
[0062]將lmL20 μ M對巰基苯酚溶液加入到IOOmLlOnM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，混合均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得對巰基苯酚修飾納米金溶膠；
[0063]2)不同濃度的H2O2溶液對雙酚A的響應:
[0064]在酶標儀微孔板的5個孔中分別加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，然后分別加入5 μ L體積百分濃度0.003%,0.03%,0.3%、3%、30%Η202溶液，再分別加入200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為5個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L3 μ M辣根過氧化物酶溶液，5 μ L水和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為空白對照組，37°C孵育2?180分，檢測各實驗組中對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度，H2O2加入的量多則孵育時間短，H2O2加入的量少則孵育時間長；
[0065]檢測的結果顯示，不同濃度的H2O2溶液對雙酚A均有良好的響應，且720nm與520nm處光密度的比值遠大于空白對照組。
[0066]實施例7
[0067]I)對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備:
[0068]將lmL20 μ M對巰基苯酚溶液加入到IOOmLlOnM納米金粒徑為13nm的納米金溶液中，混合均勻后，錫箔包被慢搖2小時，即得對巰基苯酚修飾納米金溶膠；
[0069]2)不同濃度的氯化血紅素溶液對雙酚A的響應:
[0070]在酶標儀微孔板的5個孔中分別加入40 μ L200mg/L雙酚A溶液，5 μ L體積百分濃度0.3%Η202溶液，然后分別加入5 μ L0.01 μ Μ、0.1 μ MU μ MUO μ MUOO μ M氯化血紅素溶液，再分別加入200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為5個實驗組，在另一個微孔板的一個孔中，加入40 μ L200mg/L雙酹A溶液,5 μ L體積百分濃度0.3%Η202溶液,5 μ L水和200 μ L對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為空白對照組，42°C孵育至實驗組與空白對照組相比有明顯色差后，檢測各實驗組中對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度，
[0071]檢測的結果顯示，不同濃度的氯化血紅素溶液對雙酚A均有良好的響應，且720nm與520nm處光密度的比值遠大于空白對照組。
【權利要求】
1.一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于:將對巰基苯酚溶液加入到納米金溶液中，避光反應至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠，以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含不同已知濃度的雙酚A溶液的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y(tǒng)=kx+b，以實際雙酚A樣品為被檢測物，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H2O2共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出X值，再根據X值計算出實際雙酚A樣品的濃度。
2.根據權利要求1所述的對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于包括如下步驟: O對巰基苯酹修飾納米金溶膠的制備: ①按摩爾比對巰基苯酚:納米金=0.1:1~100:1，將對巰基苯酚溶液加入濃度為I~20nM的納米金溶液中至對巰基苯酚溶液的終濃度為0.1nM~2 μ Μ，混合均勻后，避光反應至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠； 2)建立雙酚A的標準工作曲線: ①在酶標儀微孔板的7個以上的孔中分別加入7組以上的相同體積、不同已知濃度的標準雙酚A溶液，再分別加入催化量的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，過量的H2O2溶液和過量的對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為7個以上的實驗組，其中7個以上的實驗組中加入的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠完全相同，在另一個微孔板的一個孔中，加入`與各實驗組中雙酚A溶液等體積的水，再加入與各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為陰性對照組，10~42°C孵育至各實驗組與陰性對照組相比有色差后，檢測各實驗組中含已知濃度的雙酚A的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度； ②以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據各實驗組檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y(tǒng)=kx+b ； 3)實際雙酚A樣品濃度的測定: ①在酶標儀微孔板的一個孔中先加入與步驟2)中各實驗組中雙酚A溶液等體積的實際雙酚A樣品，再加入與步驟2)中各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H2O2溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，10~42°C孵育至出現色差后，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出X值，再根據X值計算出實際雙酚A樣品的濃度。
3.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于: 所述納米金溶液中納米金的粒徑為5-50nm。
4.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于:所述過氧化物酶為辣根過氧化物酶，過氧化物模擬酶為氯化血紅素。
5.根據權利要求5所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于:所述辣根過氧化物酶或過氧化物模擬酶的終濃度為0.2ηΜ-2 μ M0
6.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于:所述Η202溶液的終濃度為0.00·006%-0.6%，該濃度為體積百分比濃度。
【文檔編號】G01N21/31GK103852432SQ201410111567
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月24日 優(yōu)先權日:2014年3月24日
【發(fā)明者】梁曉聲, 熊海容, 王海英, 郭小華, 汪文俊 申請人:中南民族大學